牛结核病污染场4种检测方法评估

为寻找最适合牛结核病污染场的检测方法,加快牛结核病净化,采用牛结核菌素(PPD)皮内变态反应试验(TST)、比较皮内变态反应试验(SICTT)、牛结核病ELISA-γ-干扰素试验(IFN-γ-ELISA)、牛结核病抗体ELISA试验4种方法,对某结核病污染牛场300头奶牛进行检测,并以TST为参考标准,对不同检测方法的检测结果进行对比分析。结果显示,这4种方法中,IFN-γ-ELISA的阳性检出率最高,与TST相比,差异显著(P0.05),而其他方法的阳性检出率均低于TST。结果表明,IFN-γ-ELISA方法的检测敏感性较高,在牛结核病污染场净化初期使用,可以尽量避免阳性牛漏检,从而加快牛结核病净化进程。     

新疆石河子地区牛结核病检测方法的比较研究

采用比较变态反应检测方法对石河子地区6家规模牛场牛型提纯结核菌素(PPD)皮内变态反应检出的475头阳性牛进行了检测,按照国家标准-动物结核病诊断技术(GB/T18645-2002)进行结果判定,结果表明:牛型结核阳性457头,符合率在93.18%～100%之间,平均96.21%。经反复试验对比分析采用牛型提纯结核菌素皮内变态反应进行结核病的检测,结果准确,既经济实用又便于操作,还可避免再采用比较变态反应要隔离阳性牛而导致牛结核病传染散播风险。项目组通过在四个牛场的对比分析,在未建立符合防疫条件的独立隔离圈舍的牛场检测阳性牛及可疑牛在隔离45d后再次检测时新增阳性牛数量增加;而采用牛型提纯结核菌素检测后对阳性牛采取扑杀、无害化处理、消毒等综合性措施后,间隔45d对全群再次检测时新增阳性牛数量明显减少。因此牛结核病检疫采用适宜基层实际的牛型提纯结核菌素皮内变态反应对及时检出阳性牛,并尽快进行扑杀、无害化处理、净化牛群、控制结核的传播扩散,实现公共卫生安全具有重要意义。     

不同监测方法在奶牛结核病检疫中的应用

为了解牛型提纯结核菌素PPD皮内变态反应试验和牛结核γ-干扰素ELISA试验的相关性,对规模牛场先进行牛型PPD皮内变态反应试验,采集检疫阳性牛和部分阴性牛抗凝血进行牛结核γ-干扰素ELISA试验,通过试验结果找出两者之间的相关性,研究牛结核γ-干扰素ELISA试验在牛结核病检疫中的可行性。     

应用Dot-ELISA检测结核病牛血清抗体效价

用牛型结核菌菌体蛋白(PP)及提纯牛结核菌素(PPD)作抗原,硝酸纤维素滤膜(NC 膜)作载体。以斑点-酶联免疫吸附试验(Dot-ELISA)检测了30份结核菌素变态反应阳性牛及30份非结核病牛血清中的抗体效价。结果证实,Dot-ELISA 与变态反应符合率很高(20/30),只有简便、快速、经济及适于现场推广应用等优点,可望在今后牛结核病检疫中取代变态反应和常规 ELISA.     

上林县奶水牛结核病检疫报告

按国家规定采用牛型结核分枝杆菌提纯的结核菌素 (PPD)皮内变态反应试验对上林县某奶牛场水奶牛进行结核病检疫 ,被检奶水牛 46头 ,检出结核病阳性奶水牛 3头。文章分析了结核病阳性牛发生原因并提出净化奶水牛结核病的措施。     

田阳县应用皮内变态反应监测牛结核病

PPD(结核菌素纯蛋白衍生物)颈部皮内变态反应法是国家检测结核病的法定方法,我县在组织开展牛结核病PPD检测方法及迟缓型变态反应时,准确把握PPD检测法和皮内变态反应方法,现将临床应用和结果进行分析,供同行参考。     

对奶牛结核病平行检测的不同方法

[目的]综合分析奶牛的健康状况,评价不同检测方法的优缺点,提出实际应用建议。[方法]同时采用单纯牛结核菌素（PPD）皮内变态反应试验（TST,使用国产PPD简称国产TST、使用进口PPD简称进口TST）、欧盟比较变态反应试验（SICTT）和牛结核γ-干扰素酶联免疫吸附试验（IFN-γ-ELISA）,对河北省唐山市某奶牛场存栏的115头牛进行结核病平行检测。[结果]经综合判定牛型结核阳性15头（其中5头为牛型、禽型双阳性）、阴性100头（其中1头为禽型阳性）,牛型结核阳性率13.04%、禽型结核阳性率5.22%、二者混合感染率为4.35%。试验表明,对于伴有非结核分枝杆菌感染的牛群,仅靠一种活体检测方法难以做出牛结核病准确诊断。[结论]因此,可采用进口TST初筛,阳性和可疑牛用IFN-γ-ELISA复检以排除部分假阳性,对于早期感染牛场可直接采用IFN-γ-ELISA方法检测。     

γ-干扰素检测技术和皮内变态反应在奶牛结核病检测中的应用比较

笔者对牛型提纯结核菌素(PPD)皮内变态反应试验和新型牛结核杆菌γ-干扰素检测技术进行比较,分析其优劣。试验结果表明,γ-干扰素检测技术特异性好、敏感性高、操作简便、易于标准化,但价格较高。该方法可作为PPD皮内变态反应的平行试验,用于复核检查目前国家标准方法 PPD皮内变态反应阳性牛。     

短期内进行牛型结核分支杆菌PPD皮内变态反应复检试验的结果变化观察

牛型结核分支杆菌PPD皮内变态反应试验,是当前国际国内普遍使用的牛结核病诊断方法.我国农业部《牛结核病防治技术规范》将牛型结核分支杆菌PPD皮内变态反应试验规定为牛结核病确诊方法之一.GB/T 18645-2002(《动物结核病诊断技术》)规定,用牛型结核分支杆菌PPD皮内变态反应试验检出的结核病可疑牛,应立即在对侧颈部用同一批号试剂再进行一次试验.在实际生产中,因为检出结核病阳性牛必须扑杀,为慎重,除可疑牛外,多数情况下阳性牛也同时进行了再次试验(复检)以再次确认.根据往年检测结果,我们发现这种短期内复检通常都可弱化首次试验结果.为研究这种变化发生的原因及评价其对检测结果判定的影响,2012年我们对新疆南疆阿克苏地区的4个奶牛场和北疆昌吉地区的1个奶牛场使用该方法进行结核病检测的情况进行了观察分析.     

结合皮内变态反应与γ干扰素ELISA的牛结核病检疫

巴州辖区内某奶牛场为根除牛结核病对该奶牛场的威胁,技术人员根据该奶牛场情况制定了检疫计划,选用皮内变态反应与γ干扰素ELISA检测相结合的方法,从而达到检疫的目的。初筛检疫使用牛型结核病PPD(纯化蛋白衍生物)皮内变态反应,出现阳性或可疑牛之后,再对其接触较为密切的同群牛进行γ干扰素ELISA(酶联免疫吸附试验),目的在于检出与患病动物接触的牛群是否处在牛结核感染的潜伏期。检测结果:皮内变态反应全检150头奶牛后,出现1例阳性牛和1例可疑牛,之后将阳性、可疑与同属一个圈舍的其他13头牛进行γ干扰素ELISA检测,出现1例牛型结核分枝杆菌阳性、14例阴性。表明牛结核PPD皮内变态反应结合γ干扰素ELISA可以有效提高牛结核病检疫的准确性,节省检疫时间,减少因单纯使用牛结核PPD皮内变态反应出现假阳性而造成的不必要扑杀。     

y-干扰素检测技术对奶牛结核病检痘的初步应用

本文在应用牛型提纯结核菌素（PPD）变态反应试验进行奶牛结核病检疫的基础上,引进牛结核分枝杆菌y-干扰素检测技术,初步开展了新型检疫技术的应用研究,证明y-干扰素技术特异性好,敏感性高,操作简便,易于标准化,可作为目前国家标准牛型PPD变态反应的平行试验,完善我国奶牛结核病检疫和净化工作的技术体系。     

PPD批次与注射方式对PPD皮内变态反应检疫的影响

[目的]为了探究在牛结核病检疫中出现的使用不同批次的PPD和皮下注射PPD等情况是否会对检疫结果的判定造成干扰。[方法]试验首次通过在豚鼠背部采用皮下注射法和皮内交替注射同一厂家不同批次的结核菌素提纯蛋白衍化物(purified protein derivative of tuberculin, PPD)的方法,参照《结核菌素提纯蛋白衍化物(PPD)制造及检定规程》于每次注射后24 h, 48 h和72 h观察皮试处是否产生迟发型变态反应。[结果]皮内组(不同批次PPD皮内注射)和皮下组(同一批次PPD皮下注射)经3次注射后的皮试结果与标准参照组的皮试结果无差异,且在每次皮试后的24 h, 48 h和72 h皮试处均未出现局部红斑硬结。[结论]试验证明了PPD皮内变态反应检疫结果判定不受PPD皮下接种及PPD的不同批次的干扰。     

不同厂家牛型结核菌素（PPD）在奶牛结核病检测中的效果对比

采用国产2个不同厂家的牛型提纯结核菌素进行皮内变态反应比对试验,以期了解不同厂家生产的牛型提纯结核菌素(PPD)对奶牛结核病皮内变态反应试验结果的影响。试验结果显示,2个厂家生产的试剂检测结果符合率较高,差异不显著。     

奶牛结核病不同检疫方法比较

采用牛结核菌素皮内变态反应试验(TST)、欧盟比较变态反应试验(SICTT)和牛结核γ干扰素酶联免疫吸附试验(IFN-γ-ELISA)对河北省石家庄市栾城县某奶牛场300头奶牛进行结核病平行检测,比较不同检疫方法对奶牛结核病诊断结果的影响,并分析对比检测结果。经综合判定牛型结核阳性牛208头(其中20头双阳),阴性92头(其中禽型19头)。TST和SICTT相比,阳性符合率为94.89%;TST与IFN-γ-ELISA相比,阳性符合率为31.16%;SICTT与IFN-γ-ELISA对比,阳性符合率为51%。综合判定,3种方法的总符合率为33.67%,符合率较低,表明各种检测方法各有优缺点,在实际应用中应根据需要合理选择。     

不同方法检测奶牛结核病的结果分析

采用常规皮内变态反应(TST)、牛全血干扰素试验方法(IFN-γ)及胶体金3种检测方法,对2个奶牛场的600头奶牛进行结核病检测,发现结核病阳性率均偏高,表明奶牛场结核病感染较严重。将3种方法检测结果的敏感性、特异性及符合率进行比较,结果表明:单独使用PPD皮内变态反应方法或胶体金方法在牛结核病的诊断方面存在特异性及符合率差的缺点;用IFN-γ实验进行检测,可以提高特异性,避免因假阳性造成的误杀,适合在本地区推广应用。     

PPD的批次与注射方式对PPD皮内变态反应检疫的影响

为了探究在牛结核病检疫中出现的使用不同批次的PPD和皮下注射PPD等情况是否会对检疫结果的判定造成干扰。本试验首次通过在豚鼠背部采用皮下注射法和皮内交替注射同一厂家不同批次的结核菌素提纯蛋白衍化物(Purified protein derivative of tuberculin,PPD)的方法,参照《结核菌素提纯蛋白衍化物(PPD)制造及检定规程》于每次注射后24h、48h和72h观察皮试处是否产生迟发型变态反应。试验结果为皮内组(不同批次PPD皮内注射)和皮下组(同一批次PPD皮下注射)经3次注射后的皮试结果与标准参照组的皮试结果无差异,且在每次皮试后的24h、48h和72h皮试处均未出现局部红斑硬结。本试验证明了PPD皮内变态反应检疫结果判定不受PPD皮下接种及PPD的不同批次的干扰。     

牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和应用

为了建立一种快速检测牛分支杆菌抗体的新方法用于诊断牛结核病,利用胶体金免疫层析技术原理,用原核诱导表达的牛分支杆菌抗原蛋白MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条.结果表明,粒径为40 nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高,胶体金最佳标记pH为6.0,MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5 μg,MPB70抗原的最适包被浓度为3.0 mg/mL,抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5 mg/mL,交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性.比较试验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条.在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较.本试纸条与牛分支杆菌分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%.快速检测牛结核抗体的免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核病根除计划中具有良好的应用前景.     

实验室检测奶牛结核病的方法比较

<正>奶牛结核病属于人畜共患传染病,该病严重危害奶牛养殖业和公共卫生安全,是由牛结核分枝杆菌引起,奶牛是家畜中最易感染该病的动物。多年来,奶牛结核病已成为制约奶牛养殖业发展和危害人类健康的重要因素。为了更好地防控奶牛结核病,用两种方法检测结核病:牛型提纯结核菌素(PPD)皮内变态反应和γ-干扰素检测技术检测比较,分析其优劣,为以后的检测工作提供依据。1材料与方法1.1材料1.1.1试剂盒     

牛结核病抗体胶体金快速检测技术的建立和初步运用

目的:建立一种快速检测牛结核抗体的新方法,用以诊断牛结核病。方法:利用胶体金免疫层析技术原理,用大肠杆菌表达的牛分枝杆菌重组抗原MPB83和MPB70分别作为胶体金标记抗原和检测线上的捕获抗原,制备牛结核抗体检测试纸条。结果:粒径为40nm的胶体金制备的试纸条敏感性最高;胶体金最佳标记pH值为6.0;MPB83抗原最适标记量为每毫升胶体金6.5μg;MPB70抗原的最适包被浓度为3.0mg/mL;抗MPB83蛋白IgG的最佳包被浓度为2.5mg/mL;交叉试验证明试纸条不与牛的其他非相关疾病的阳性血清反应,具有较高的特异性。比较实验证明其敏感性显著高于韩国进口试纸条。在上述试验条件下生产了一批胶体金试纸条进行临床样品检测,并与细菌分离培养、结核菌素皮内变态反应(TST)和韩国试纸条比较。本试纸条与牛分枝杆茵分离培养的符合率为85%,与TST的符合率为79.73%,与韩国试纸条的符合率为98.75%。结论:快速检测牛结核抗体的胶体金免疫层析试纸条具有敏感、特异、简便、快速的特点,适用于对牛结核病进行普查和检疫,也可作为TST的辅助诊断方法,在牛结核根除计划中具有良好的应用前景。     

奶牛结核病两种检测方法的比较试验

采用自制的牛结核病PCR快速诊断试剂盒,对某奶牛场100头份奶牛奶样进行检测,检出阳性牛16头;采用结核菌素皮内注射法（PPD）检出阳性牛17头,结果符合率为94.11％.用牛结核病PCR快速诊断试剂盒检测所需时间为6h,显示其快速、特异等优点,为今后牛结核病的检疫工作提供了1个新方法.