性成熟期辽宁绒山羊与子午岭黑山羊睾丸发育比较

本研究旨在探究性成熟期辽宁绒山羊与子午岭黑山羊睾丸发育是否存在差异,并对两品种繁殖性能进行比较。选取性成熟期健康的辽宁绒山羊和子午岭黑山羊各5只,采集睾丸组织,通过大体解剖和苏木精-伊红（HE）染色石蜡切片,比较两品种山羊睾丸组织发育及形态学差异;ELISA检测雄激素浓度;实时荧光定量PCR （real time quantitative PCR,RT-qPCR）、蛋白免疫印迹（Western blot）检测两品种山羊睾丸组织中死盒多肽4（DEAD box polypeptide 4,DDX4）和类无精症缺失基因（deleted in azoospermia-like gene,DAZL）的表达情况。结果显示,辽宁绒山羊睾丸总重和睾丸长周径极显著高于子午岭黑山羊（P<0.01）,而睾丸短周径、睾丸脏体比和睾丸胴体比均差异不显著（P>0.05）;辽宁绒山羊生精上皮厚度显著高于子午岭黑山羊（P<0.05）,而两者精细管面积、直径和单位面积内精细管数量均无显著差异（P>0.05）;两品种山羊睾丸中雄激素分泌无显著差异（P>0.05）;辽宁绒山羊DDX4 mRNA及蛋白表达量均显著高于子午岭黑山羊（P<0.01或P<0.05）,DAZL mRNA表达量极显著高于子午岭黑山羊（P<0.01）,而蛋白表达量差异不显著（P>0.05）。以上结果表明,性成熟期辽宁绒山羊性腺发育程度与子午岭黑山羊一致,但生精上皮较子午岭黑山羊厚,生殖标记基因表达量存在差异,推测可能会影响两品种的生精能力。     

日粮添加不同水平芦丁对热应激小鼠睾丸组织的影响

本试验旨在探讨日粮添加不同水平芦丁对缓解热应激小鼠睾丸组织损伤的影响。将30只5周龄体重相近（20～22 g）的ICR系雄性小鼠随机分为5组,各组小鼠分别饲喂基础日粮添加0（CON组）、0（HS组）、250（HS+R250）、500（HS+R500）和1 000（HS+R1000） mg·kg^-1芦丁的日粮,饲养10 d后,除对照组（CON）外,所有小鼠在每天10：00至14：00之间置于42℃恒温箱中连续处理8 d后屠宰取样分析。结果显示：1）与CON组相比,HS组小鼠睾丸指数无显著变化（P>0.05）,而日粮添加250 mg·kg^-1芦丁显著提高热应激小鼠睾丸指数（P<0.05）;小鼠睾丸组织切片结果显示,与CON组相比,HS组小鼠生精小管直径和横截面积显著降低（P<0.05）,生精细胞脱落比率显著增加（P<0.05）;与HS组相比,HS+R250组小鼠生精小管横截面积显著增加（P<0.05）,生精细胞脱落比率显著降低（P<0.05）,HS+R500组生精细胞脱落比率也显著降低（P<0.05）,HS+R1000组小鼠生精小管直径显著增加（P<0.05）;小鼠睾丸指数、生精小管直径及生精小管脱落比率在芦丁处理组与CON组之间无显著差异（P>0.05）,但HS+R250组小鼠睾丸生精小管横截面积显著高于CON组（P<0.05）。2）与CON组相比,HS组小鼠睾丸组织丙二醛（MDA）含量显著升高（P<0.05）,总抗氧化能力（T-AOC）与还原型谷胱甘肽（GSH）含量以及血红素酶-1（HO-1） mRNA的表达量均显著降低（P<0.05）;日粮添加250 mg·kg^-1芦丁显著降低热应激小鼠睾丸组织中MDA含量（P<0.05）,提高T-AOC与GSH含量（P<0.05）,并增强核因子E2相关因子2（Nrf2）、HO-1和谷胱甘肽过氧化物酶（GSH-Px） mRNA的表达量（P<0.05）,而添加500和1 000 mg·kg^-1芦丁也显著提高了GSH含量（P<0.05）;与CON组相比,除HS+R250组Nrf2 mRNA表达量显著高于CON组（P<0.05）外,芦丁组热应激小鼠睾丸组织抗氧化相应基因与酶活指标均无显著性变化（P>0.05）。3）热应激小鼠睾丸中核因子-κB （NF-κB）、TOLL样受体4（TLR-4）和Bax的mRNA表达量显著增加（P<0.05）,而Bcl-2表达量显著降低（P<0.05）;日粮添加250 mg·kg^-1芦丁显著降低NF-κB、TLR-4、髓样分化因子88（MyD88）、白细胞介素-Iβ（IL-1β）和Bax mRNA表达量（P<0.05）,增强Bcl-2的表达水平（P<0.05）;添加500 mg·kg^-1芦丁显著降低NF-κB和TLR-4表达量（P<0.05）,而1 000 mg·kg^-1芦丁能够显著增加Bcl-2的表达（P<0.05）;小鼠睾丸组织中免疫和增值凋亡相关基因的表达量在添加芦丁组及CON组之间无显著性差异（P>0.05）。结果提示,日粮添加适宜剂量芦丁具有改善热应激小鼠睾丸组织形态及功能的效果,其机制可能与芦丁通过Nrf2信号通路缓解氧化应激,通过TLR-4/NF-κB信号通路抑制炎症反应及调控Bax/Bcl-2 mRNA的表达密切相关。本试验条件下日粮添加250 mg·kg^-1芦丁的效果较好。     

饲喂水平对冬毛生长期雄性北极狐生产性能、器官发育及机体能量沉积的影响

旨在研究不同饲喂水平对冬毛生长期雄性北极狐生产性能、器官发育及机体能量沉积的影响。本试验选取46只161日龄,平均体重为（7 285±5.77）g健康的雄性北极狐,其中6只北极狐作为试验初屠宰试验对照,另外40只北极狐随机分成4组（每组10个重复,每个重复1只）,分别按照自由采食组（AL,I组）、自由采食量的80%组（IR80,II组）、自由采食量的60%组（IR60,III组）和自由采食量的40%组（IR40,IV组）4个水平饲喂,预饲期7 d,试验期67 d,通过饲养试验、屠宰试验并结合化学分析方法来评定生长性能、毛皮品质、器官发育及机体能量沉积的各项指标。结果表明：1）随饲喂水平降低,平均干物质采食量（ADFI）呈极显著降低（P<0.01）,II组平均日增重（ADG）极显著高于IV组（P<0.01）,显著高于III组（P<0.05）,与I组差异不显著（P>0.05）;饲喂水平对北极狐末重和料重比（F/G）无显著影响（P>0.05）,但II组末重略高于其他组,F/G略低于其他组。2）饲喂水平极显著影响了北极狐鲜皮长（P<0.01）,I组极显著高于III和IV组,与II组无显著差异（P>0.05）;随饲喂水平降低,体长、干皮长、针毛长和绒毛长均呈降低趋势,但各组间均无显著性差异（P>0.05）。3）饲喂水平显著影响了北极狐心脏重和心脏指数（P<0.05或P<0.01）,II组心脏重显著高于III组（P<0.05）,与I组和IV组差异不显著（P>0.05）,IV组心脏指数极显著高于I组（P<0.01）,显著高于III组（P<0.05）,与II组差异不显著（P>0.05）,而饲喂水平对肝、肾、肺和脾重及其脏器指数均无显著影响（P>0.05）。4）随饲喂水平降低,毛皮增重、毛皮脂肪沉积及其能量沉积、毛皮沉积总能量、胴体脂肪沉积及其能量沉积、胴体蛋白沉积及其能量沉积和胴体沉积总能量均呈降低趋势,但饲喂水平对毛皮、胴体能量沉积各项指标均无显著性影响（P>0.05）。采用适当限饲（IR80）不影响冬毛生长期北极狐机体器官的正常发育,能够保证其体重增长及毛皮品质,提高了饲料转化效率,且还降低了机体能量沉积过度带来的肥胖风险。     

褪黑素合成酶AANAT/ASMT基因过表达绵羊生物安全评价研究

旨在研究乳腺过表达褪黑素合成酶基因AANAT和ASMT（HIOMT）绵羊的生物安全性,基于本实验室前期建立的乳腺过表达褪黑素合成酶基因AANAT和ASMT（HIOMT）绵羊模型,追踪阳性转基因绵羊的生长性状数据,分析血液及尿液生理生化指标,对肠道微生物、乳中褪黑素水平及乳成分进行检测。结果表明：1）阳性转基因绵羊0、6和12月龄的体重、体长、身高和胸围4项生长指标与普通绵羊均无显著差异（P>0.05）;2）阳性绵羊血液总蛋白、白蛋白、球蛋白、胆固醇含量和各类型细胞数量以及尿液中亚硝酸盐、蛋白质和葡萄糖含量等指标均属正常,且与普通绵羊均无显著差异（P>0.05）;3）菌群测序结果表明,阳性绵羊及普通绵羊肠道微生物群落组成及优势菌群均无显著差异（P>0.05）;4）转基因绵羊血液褪黑素表达水平与普通绵羊无显著差异（P>0.05）,夜间褪黑素水平显著高于白天（P<0.05）;乳中褪黑素水平极显著高于普通绵羊（P<0.01）,乳糖含量显著高于对照羊（P<0.05）,体细胞数极显著低于普通绵羊（P<0.01）。综上所述,乳腺过表达AANAT和ASMT（HIOMT）转基因绵羊的生长发育、诸多生理生化指标、肠道微生物菌群等与对照组绵羊相比均无显著差异。此外,转基因绵羊乳中褪黑素和乳糖含量较高,体细胞数含量较低,可能是乳腺中褪黑素发挥抗炎作用,降低了乳中体细胞数。     

母猪妊娠期不同能量水平对后代公猪生长性能、睾丸发育与免疫的影响

试验旨在研究母猪妊娠期能量水平对后代睾丸发育与免疫的影响及其作用机理。选取30头体重、背膘相近的7~9胎长白×约克夏（LY）经产母猪,按照体重和胎次随机分为2组,每组15个重复,每个重复1头母猪,从妊娠当天分别饲喂正常能量（CON）和低能量饲粮（LE,12.55 MJ/kg）,直到分娩,所有母猪哺乳期均饲喂同一饲粮。分娩后,分别从CON和LE组中挑选体重为平均体重±0.05 kg的后代公猪各15头,断奶后所有公猪按阶段饲喂相同饲粮,于仔猪120日龄时结束试验。记录公猪每个月的体重并计算阶段平均日增重和平均日采食量;采集28和120 d的血液进行血清生化指标和免疫相关细胞因子检测,采集28和120 d的睾丸进行睾丸细胞计数和睾丸免疫相关基因检测。结果表明,与对照组相比,LE组0~59 d平均日增重极显著降低（P<0.01）,28~89 d平均日采食量和0 d睾丸重显著降低（P<0.05）,28 d睾丸指数显著增加（P<0.05）;LE组0和120 d睾丸组织内间质细胞数目、120 d生殖细胞数目、28和120 d支持细胞数目均显著降低（P<0.05）;LE组血清中28 d甘油三酯（TG）和120 d睾酮（T）含量均极显著升高（P<0.01）、雌二醇（E₂）含量极显著降低（P<0.01）,TG、T和E₂含量均存在时间和能量的交互作用（P<0.01）;LE组血液中胆固醇（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）的含量120 d时极显著降低（P<0.01）,低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）、TC、HDL-C三者均无时间和能量的交互作用（P>0.05）。随着公猪日龄增加,血液中白细胞介素-1α（IL-1α）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-1β（IL-1β）、免疫球蛋白（IgG）浓度均极显著增加（P<0.01）,其中TNF-α和IL-1β有能量和时间的交互作用。与对照组相比,LE组28 d时TNF-α含量显著降低（P<0.05）,120 d时IL-1β水平显著升高（P<0.05）。LE组28 d紧密连接蛋白1（ZO1）及0和28 d闭合蛋白（Occludin）基因相对表达量均显著降低（P<0.05）,28和120 d时连接黏附分子1（JAM1）基因相对表达量显著增加（P<0.05）。LE组0 d时CCL4基因和28 d时IL-1α基因相对表达量均显著降低（P<0.05）,0和120 d时趋化因子2（CCL2）基因及28 d时细胞间黏附分子1（ICAM1）和酪氨酸激酶2（JAK2）基因相对表达量均显著增加（P<0.05）。与对照组相比,28 d时Toll样受体1（TLR1）基因、0 d时肿瘤坏死因子受体超家族成员Ⅰ型（TNFRSF1A）基因相对表达量均显著降低（P<0.05）,0 d时B细胞κ轻肽基因增强子核因子抑制因子（NFKBIA）、IL-1β和干扰素（IFNG）基因相对表达量均显著增加（P<0.05）。综上所述,母猪妊娠期摄入12.55 MJ/kg能量水平饲粮可降低后代公猪日增重、平均日采食量和睾丸重;降低后代公猪睾丸内生殖细胞数量及免疫相关细胞因子和睾丸免疫相关基因的表达,从而对后代成年后的免疫能力和繁殖性能产生深远影响。     

GnIH过表达载体构建及其对小鼠睾丸间质细胞的作用研究

本试验通过构建GnIH过表达载体,探究其对小鼠睾丸间质细胞（TM3细胞系）的凋亡效应及睾酮合成的调节作用。从6~8周雄性小鼠睾丸组织中提取RNA,反转录获得cDNA样本,利用PCR扩增并纯化GnIH基因,应用T4连接酶将其连入PLVX-IRES-ZsGreen1载体,进一步转化到感受态菌中,通过PCR、双酶切及测序鉴定后提取质粒。随后将构建好的重组质粒转染TM3细胞系72 h,分为空质粒组和GnIH过表达组,通过显微镜观察细胞荧光、实时荧光定量PCR（qRT-PCR）法、ELISA法和流式细胞术检测GnIH表达水平、细胞凋亡率及相关凋亡基因表达变化、睾酮分泌水平和睾酮合成酶基因表达水平。结果显示,GnIH扩增片段序列与参考序列一致,将GnIH过表达质粒转染至TM3细胞系72 h后,可见高强度绿色荧光,过表达组中GnIH基因水平极显著升高（P<0.01）,表明GnIH过表达载体构建成功且在TM3细胞系中高表达。转染72 h后,与空质粒组相比,过表达组中细胞凋亡率极显著升高（P<0.01）,凋亡基因P53和Bax/Bcl-2表达量比值也极显著升高（P<0.01）。与空质粒组相比,过表达组中睾酮浓度极显著降低（P<0.01）。与此同时,睾酮合成相关酶基因P450 scc mRNA表达量极显著降低（P<0.01）,StAR、3β-HSD和P450c17 mRNA表达量显著降低（P<0.05）,17β-HSD mRNA表达量在两组间无显著性差异（P>0.05）。综上所述,在体外培养的TM3细胞中过表达GnIH能诱导TM3细胞凋亡、抑制睾酮分泌且降低睾酮合成相关酶的基因表达水平,推断GnIH在小鼠睾丸间质细胞生长和睾酮合成过程中发挥负调控作用。本研究可为揭示GnIH在雄性哺乳动物生殖调控过程中的作用提供科学理论依据。     

饲喂水平对育成生长期雄性北极狐生长性能、血液生化指标及机体能量沉积的影响

本试验旨在研究不同饲喂水平对育成生长期雄性北极狐生长性能、血清生化指标及机体能量沉积的影响。试验选取46只85日龄,平均体重为（3 198±281）g的健康雄性北极狐,其中6只北极狐作为试验初屠宰试验对照,另外40只北极狐随机分成4组（每组10个重复,每个重复1只）,分别为自由采食组（AL）（I组）、自由采食量的80%组（IR80）（II组）、自由采食量的60%组（IR60）（III组）和自由采食量的40%组（IR40）（IV组）。预试期7 d,试验期55 d,通过饲养试验、血清学试验、屠宰试验并结合化学分析方法来评定生长性能、血清生化指标及机体能量沉积的各项指标。结果表明：1）IV组100日龄体重极显著低于I和II组（P<0.01）,与III组差异不显著（P>0.05）,IV组115日龄、130日龄、145日龄体重和平均日增重（ADG）极显著低于其他3组（P<0.01）,3组间差异不显著（P>0.05）。随饲喂水平降低,平均干物质采食量（ADMI）呈极显著降低趋势（P<0.01）,III组料重比（F/G）极显著低于I和II组（P<0.01）,与IV组差异不显著（P>0.05）。2）IV组血清葡萄糖（GLU）显著高于III组（P<0.05）,与I和II组差异不显著（P>0.05）;IV组血清胆固醇（CHO）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）极显著高于其他3组（P<0.01）,I、II和III组间差异不显著（P>0.05）;IV组血清总蛋白（TP）和白蛋白（ALB）显著高于I和III组（P<0.05）,与II组差异不显著（P>0.05）;对血清甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）、球蛋白（GLOB）、免疫球蛋白A（IgA）、M（IgM）和G（IgG）、补体3（C3）和补体4（C4）、胰岛素（INS）均无显著影响（P>0.05）。3）随饲喂水平减少,毛皮脂肪沉积及其产热显著降低,I和II组显著高于III和IV组（P<0.05）,II组毛皮增重和沉积总能量显著高于IV组（P<0.05）,与I和III组间差异不显著（P>0.05）;IV组胴体增重极显著低于其他3组,3组间差异不显著（P>0.05）;对毛皮蛋白沉积及其产热、胴体脂肪沉积及其产热、蛋白沉积及其产热和胴体沉积总能量均无显著影响（P>0.05）。采取适当限饲（IR60）降低了育成生长期北极狐血清中糖脂类指标含量,保证了机体正常的生长和健康状态,提高了饲料转化效率,进而增加了养殖生产效益。     

玉米赤霉烯酮对后备母猪子宫和卵巢抗氧化和炎症指标及相关基因表达的影响

试验旨在研究玉米赤霉烯酮（zearalenone,ZEA）对后备母猪子宫和卵巢抗氧化和炎症指标及相关基因表达的影响。选择胎次和体重（（23.20±0.68）kg）相近的长×大二元后备母猪48头,随机分为4组,每组设12个重复,每个重复1头母猪。对照组（CON组）饲喂基础饲粮,试验组（T1、T2、T3组）饲喂在基础饲粮中分别添加200、800、1600 μg·kg^-1ZEA的试验饲粮。预试期7 d,正试期40 d。结果如下：1）与CON组相比,T3组血清T-AOC和SOD活性显著降低（P<0.05）,MDA水平显著升高（P<0.05）。2）与CON组相比,子宫组织中,T2和T3组T-AOC活性显著降低（P<0.05）,T3组SOD活性极显著降低（P<0.01）,卵巢组织中,T3组T-AOC活性、T2组GSH-Px和SOD活性显著降低（P<0.05）,T3组MDA水平显著升高（P<0.05）。3）与CON组相比,T2组血清TNF-α和IL-4水平显著升高（P<0.05）,T1~T3组血清IL-10水平显著降低（P<0.05）。4）与CON组相比,子宫组织中,T2组IL-1β水平显著升高（P<0.05）,T1和T3组IL-10水平显著降低（P<0.05）。卵巢组织中,T2组TNF-α水平显著升高（P<0.05）,T1~T3组IL-4水平显著升高（P<0.05）。5）子宫组织中,T3组Cu/Zn-SOD mRNA的相对表达显著低于CON组（P<0.05）,T2组IL-1β mRNA的相对表达显著高于CON组（P<0.05）。6）卵巢组织中,T3组GSH-Px mRNA的相对表达显著低于CON组（P<0.05）,T2组IL-1β mRNA的相对表达显著高于CON组（P<0.05）。综上所述,ZEA能通过抑制SOD和GSH-Px的表达与合成,降低后备母猪子宫和卵巢的抗氧化性能,并引起氧化应激。ZEA能通过促进TNF-α和IL-1β表达与合成引起子宫和卵巢的炎症反应,抑制IL-10的表达与合成从而抑制两组织的抗炎反应。     

阿勒泰羊生长速度与主要血液生化指标含量及尾脂Leptin基因表达关系

试验通过研究不同生长速度阿勒泰羊主要血液生化指标含量和尾脂中瘦素（Leptin）基因的表达水平，探讨阿勒泰羊生长速度与脂肪沉积之间的关系。选取300只出生时间相近的阿勒泰羊公羔，正常饲喂至6月龄，记录日增重，取平均日增重排前10%和后10%的公羔各30只，分为生长快速组（HBW）和生长慢速组（LBW），从生长快速组随机选12只分为抑制生长组（饲喂低能量饲粮以抑制其生长，HBW-75%，n=6）和生长快速对照组（饲喂标准饲粮，HBW-100%，n=6），生长慢速组随机选12只分为促进生长组（饲喂高能量饲粮以促进生长，LBW-125%，n=6）和生长慢速对照组（饲喂标准饲粮，LBW-100%，n=6）；预饲期7 d，正饲期30 d，试验结束后称重并采集血液，屠宰后采集尾部脂肪。检测血液TG、CK、TSH、T3、T4、S.S、GH、INS、PG、Leptin含量或活性及尾部脂肪Leptin mRNA和蛋白表达量，并观察尾部脂肪细胞形态学变化。结果显示，HBW-100%和LBW-100%组初体重与末体重均差异显著（P<0.05），HBW-75%和HBW-100%组初体重与末体重均无显著差异（P>0.05）；LBW-100%和LBW-125%组初体重差异显著（P<0.05），末体重无显著差异（P>0.05）。LBW-100%组的T4、S.S、Leptin、TSH、T3含量显著低于HBW-100%组（P<0.05）；LBW-125%组T3含量显著高于LBW-100%组（P<0.05）；HBW-75%组GH、PG和Leptin含量显著低于HBW-100%组（P<0.05）。LBW-125%组尾部脂肪细胞面积大于LBW-100%组，HBW-75%组小于HBW-100%组（P<0.05）。Leptin mRNA和蛋白表达量检测结果表明，HBW-100%组的Leptin mRNA表达量与LBW-100%组无显著差异（P>0.05），Leptin蛋白表达量极显著高于LBW-100%组（P<0.01）。LBW-125%组Leptin mRNA和蛋白的表达量均显著高于LBW-100%组（P<0.05）。HBW-75%组Leptin mRNA的表达量极显著低于HBW-100%组（P<0.01），Leptin蛋白表达量显著低于HBW-100%组（P<0.05）。综上所述，生长快速组与生长慢速组中，Leptin的表达量与体重和体脂有一定关联；在生长慢速组促进生长后体重和体脂显著增加，Leptin的表达量呈上升趋势；在生长快速组抑制生长后体重和体脂减少，Leptin的表达呈下降趋势。改变生长速度对Leptin的表达量会产生影响，从而改变机体的脂肪沉积状况。     

促性腺激素抑制激素对SD大鼠性腺生殖功能与糖代谢的影响

【目的】 探究促性腺激素抑制激素（GnIH）对SD大鼠性腺生殖功能和糖代谢的影响,以及SD大鼠性腺生殖功能和糖代谢之间的相关性。【方法】 将36只SD大鼠随机均分为对照组（0.9％生理盐水）、1 μg/100 μL GnIH组（Ⅰ组）、10 μg/100 μL GnIH （Ⅱ组）,每组12只（雌雄各半）。每天07：00和19：00注射生理盐水或GnIH （200 μL/次）,连续注射14 d后测量大鼠体重,计算肥胖程度,麻醉处死后采集卵巢和睾丸,称重并计算卵体比和睾体比;运用阴道涂片法观察雌性大鼠发情周期的变化;显微镜下观察并计算雄性大鼠精子活力;HE染色观察卵巢和睾丸组织变化;用实时荧光定量PCR法检测卵巢和睾丸中糖代谢基因胰岛素受体（IR）、葡萄糖转运蛋白4（GLUT4）和炎症相关因子肿瘤坏死因子（TNF-α）、白介素1β（IL-1β）的表达水平,并用SPSS 22.0软件分析生殖功能和糖代谢之间的相关性。【结果】 与对照组相比,Ⅰ组雌性SD大鼠和Ⅱ组雄性SD大鼠肥胖程度均显著升高（P<0.05）;Ⅱ组卵巢大小/重量、卵体比显著升高,睾丸重量、睾体比显著下降（P<0.05）。HE染色结果显示,与对照组相比,Ⅱ组雌性大鼠卵泡呈囊性扩张,颗粒细胞层减少,卵泡腔变大;Ⅰ、Ⅱ组雄性大鼠的生精小管均出现空泡样改变,生精细胞排列紊乱、层次减少。与对照组相比,Ⅱ组大鼠发情前期的持续时间显著延长（P<0.05）、精子活力显著下降（P<0.05）。实时荧光定量PCR结果显示,与对照组相比,Ⅰ、Ⅱ组雌性大鼠GLUT4基因的表达量极显著下降（P<0.01）、Ⅱ组中IR基因的表达量显著降低（P<0.05）,Ⅰ、Ⅱ组雄性大鼠GLUT4基因的表达量均极显著降低（P<0.01）;Ⅰ组雌性大鼠TNF-α、IL-1β基因和雄性大鼠IL-1β基因的表达量均显著升高（P<0.05）,Ⅱ组雌、雄大鼠TNF-α基因的表达量均极显著升高（P<0.01）。相关性分析结果显示,腹腔注射GnIH后,雌性大鼠的卵体比与GLUT4基因表达水平呈极显著正相关（P<0.01）,与IR基因的表达水平呈显著正相关（P<0.05）;雌性大鼠的发情周期与GLUT4基因表达水平呈极显著负相关（P<0.01）;雄性大鼠睾体比与GLUT4基因表达水平均呈显著正相关（P<0.05）,而精子活力与GLUT4基因表达水平均呈极显著正相关（P<0.01）。【结论】 腹腔注射GnIH能够抑制大鼠的生殖功能和导致糖代谢功能紊乱,而且GnIH可能参与性腺能量代谢与生殖功能的交叉对话,是能量代谢与生殖功能的新型联络因子。     

外源性RFRP-3和MLT对雄鼠初情期生长及繁殖性能的影响

【目的】探究外源性RF-酰胺相关肽3(RF-amide related peptide 3,RFRP-3)和褪黑素(melatonin, MLT)对雄性昆明小鼠初情期生长、繁殖性能的影响及两者之间的关系。【方法】以初情期雄性昆明小鼠为研究对象,单独给予雄鼠生理盐水、外源性RFRP-3或MLT以及混合给予RFRP-3、MLT,检测其对雄鼠平均增重、平均采食量、料重比、睾丸发育情况,血清生长激素(growth hormone, GH)、黄体生成素(luteinizing hormone, LH)水平,以及生长、生殖相关基因表达的影响。【结果】外源性RFRP-3能抑制雄鼠GH基因表达,并抑制体重增长,提高料重比;而外源性MLT促进雄鼠GH基因表达,使体重增长较快,料重比降低;RFRP-3和MLT共同处理下,GH基因表达增加,体重增长速度与单独给予MLT组接近。RFRP-3可抑制褪黑素受体1A(melatonin receptor 1A,Mtnr1A)、LH基因表达及睾酮分泌,小鼠睾丸各级生精细胞和间质细胞数量减少;MLT可促进Mtnr1A、LH基因表达及睾酮分泌,睾丸间质细胞密度极显著增加(...     

Protective Effect of Sulforaphane on Reproductive Function of Male Mice with Cadmium Poisoning

The study was aimed to explore the protective effect of sulforaphane (SFN) on the reproductive function of male mice with cadmium poisoning.40 healthy clean grade male Kunming mice were randomly divided into four groups:control group (H₂O),cadmium chloride group (2.3 mg/kg CdCl₂),sulforaphane group (10 mg/kg SFN),sulforaphane + cadmium chloride group (10 mg/kg SFN+2.3 mg/kg CdCl₂),and continuous administration for 10 d,all mice were executed by dislocated cervical vertebra at 2 d after the last administration,and then the pathologic changes of testicular tissues,organ coefficient of testicle and epididymis,sperm quality and concentration of testosterone were tested.Additionally,the contents of GSH and MDA,and the activities of T-SOD in testis were also detected at the same time. Compared with the control group,pathology damages were observed in cadmium chloride group,organ coefficient of testis and epididymis,sperm quality and levels of testosterone extremely significantly decreased (P<0.01),the activities of T-SOD and GSH content were extremely significantly decreased (P<0.01),and the concentration of MDA was extremely significantly enhanced (P<0.01).Compared with the control group,the activity of T-SOD and concentration of GSH in sulforaphane group were significantly increased (P<0.05),and the concentration of MDA was not significant different between the control group and sulforaphane group (P>0.05).While compared with the cadmium chloride group,the sperm motility rate and sperm total count in sulforaphane and cadmium chloride group were extremely significantly increased (P<0.01),the organ coefficient of testicle and epididymis was increased significantly (P<0.05),the concentration of GSH and activity of T-SOD in testicular tissue were extremely significantly increased (P<0.01),and the concentration of MDA was extremely significantly decreased (P<0.01).The results indicated that sulforaphane had the protection effect on reproduction function of male mice with cadmium poisoning.     

莱菔硫烷对镉中毒雄性小鼠生殖机能保护作用的研究

本试验旨在研究莱菔硫烷(SFN)对染镉雄性小鼠生殖机能的保护作用.选择健康的清洁级雄性昆明系小鼠40只,随机分成4组,分别为对照组(H₂O)、镉组(2.3 mg/kg CdCl₂)、莱菔硫烷组(10 mg/kg SFN)、镉+莱菔硫烷组(10 mg/kg SFN+2.3 mg/kg CdCl₂),连续给药10 d,于最后一次给药2 d后脱颈处死,检测小鼠睾丸组织病理学变化、小鼠睾丸及附睾的脏器系数、精液品质及血清睾酮浓度.同时检测睾丸组织内丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)含量及总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性的变化.结果表明,与对照组相比,镉组小鼠的睾丸组织发生病理学损伤,睾丸及附睾的脏器系数、精液品质及血清睾酮浓度均极显著降低(P<0.01),睾丸组织T-SOD活性、GSH含量也极显著降低(P<0.01),MDA含量极显著提高(P<0.01);莱菔硫烷组T-SOD活性和GSH含量显著升高(P<0.05),MDA含量与对照组相比差异不显著(P>0.05).与镉组相比,镉+莱菔硫烷组小鼠的精子活率、精子总数极显著增加(P<0.01),睾丸与附睾的脏器系数显著增加(P<0.05),小鼠睾丸组织GSH含量、T-SOD活性极显著提高(P<0.01),MDA含量极显著降低(P<0.01).以上结果指出莱菔硫烷对镉中毒雄性小鼠的生殖机能具有保护作用.     

干扰PTEN基因对奶山羊乳腺上皮细胞脂质合成相关基因的转录及脂肪酸组成的影响

旨在通过RNA干扰技术揭示蛋白酪氨酸磷酸酶（phosphatase and tensin homolog deleted on chromosome 10，PTEN）基因在奶山羊乳腺上皮细胞中对乳脂合成及脂肪酸组成的影响。利用RT-PCR方法扩增到西农萨能奶山羊乳腺组织中PTEN基因（GenBank登录号：MK158074.1）的CDS区，进行序列分析和不同泌乳时期差异转录分析。合成靶向该基因的siRNA，由RT-qPCR结果筛选出有效siRNA，将其转染至奶山羊的乳腺上皮细胞，进一步检测干扰该基因后对脂质合成相关基因转录水平及脂肪酸组成的影响。结果表明：本研究首次克隆到奶山羊（Capra hircus）PTEN基因的CDS区，全长为1 212 bp；经序列比对发现，山羊的PTEN基因核苷酸序列同牛（Bos taurus）、猪（Sus scrofa）和人（Homo sapiens）的相似度分别为99%、98%和97%，编码氨基酸序列相似性均在99%以上；蛋白质结构预测发现：其蛋白不存在跨膜结构域，亚细胞定位于细胞质中，N端具有保守的磷酸酶功能区；该基因在奶山羊泌乳盛期乳腺组织中的转录量较干奶期下降51.5%；合成的siRNA转染至乳腺上皮细胞后，成功筛选出理想的siRNA，干扰效率达到94%（P<0.01）；与对照组相比，干扰PTEN基因后显著上调SREBP1、FASN、ACACA、SCD1基因转录量（P<0.01或P<0.05），显著下调LPL、FABP3、ACOX1、CPT1B、GPAM、DGAT2和HSL基因转录量（P<0.01或P<0.05）。脂肪酸检测分析发现：干扰该基因能够显著上调C16：1的去饱和指数（P<0.05），但对C18：1的去饱和指数没有显著影响。综上所述，PTEN基因能够调控乳腺上皮细胞中脂质合成相关基因的转录及脂肪酸组成，在奶山羊乳脂代谢中发挥重要作用。     

SMAD1基因对黔北麻羊卵巢颗粒细胞的影响及组织表达分析

旨在验证SMAD1基因在转录组测序中单羔组对多羔组上调的结果,并探究SMAD1基因对黔北麻羊产羔性状的影响。本试验选取健康、体重45 kg、4岁左右的单、多羔黔北麻羊母羊为研究对象,采用qRT-PCR法检测SMAD1基因在单、多羔组黔北麻羊母羊子宫、输卵管、垂体、下丘脑及卵巢组织的表达水平,PCR扩增黔北麻羊SMAD1基因CDS区,构建pEGFP-N3-SAMD1重组质粒,利用脂质体转染法转染pEGFP-N3-SAMD1重组质粒进入卵巢颗粒细胞,分为超表达SMAD1试验组和pEGFP-N3空载体对照组,通过检测培养基中雌二醇和孕酮的浓度,利用CCK-8法和Annexin V-FITC法检测超表达SMAD1基因对卵巢颗粒细胞增殖、凋亡的影响,qRT-PCR检测超表达SMAD1基因对SAMD1、GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3基因mRNA表达的影响,来探究SMAD1基因对卵巢颗粒细胞的影响。结果表明,SMAD1基因在黔北麻羊各组织中均有表达。组间比较可知,卵巢和下丘脑组织单羔组极显著高表达于多羔组（P<0.01）,输卵管组织中单羔组显著高表达于多羔组（P<0.05）,其他组织未达到差异显著性（P>0.05）。本研究成功克隆了SMAD1基因CDS序列,未发现突变位点,并将pEGFP-N3-SAMD1重组质粒转染进入卵巢颗粒细胞,转染试验组培养基中E2含量在12、48 h显著高于对照组（P<0.05）,P4含量在12 h显著高于对照组（P<0.05）;超表达SMAD1基因对细胞增殖在24 h达到显著促进作用（P<0.05）,48、72 h达到极显著促进作用（P<0.01）,并且发现超表达SMAD1基因对卵巢颗粒细胞的凋亡具有抑制作用,与SMAD1基因对卵巢颗粒细胞增殖具有促进的结果是相符的。SMAD1基因超表达后繁殖相关基因GnRHR、FSHR、BMP4、TIMP3 mRNA的表达极显著降低（P<0.01）。综上表明,SMAD1基因超表达可提高E2、P4的生成,有助于黔北麻羊发情及妊娠的维持,促进细胞增殖,抑制细胞凋亡,也极显著抑制繁殖相关基因mRNA的表达,而这些繁殖相关基因都能够调控卵泡数、卵泡的发育与形成以及排卵。因此,SMAD1基因能够抑制这些基因的表达,致使黔北麻羊单羔组受胎率低,进而降低产羔数,这为产羔性状相关基因的研究提供了理论基础,初步认为SMAD1基因可作为探究影响山羊产羔性状的候选基因。