四株外生菌根真菌的生物学分类鉴定

外生菌根真菌是森林土壤生态系统中的主要类群,它可以和植物根系形成菌根,在建立健康的森林生态系 统以及促进林木生长发育、荒山绿化和土壤的生物修复方面具有重要的生态学意义.本文以四株外生菌根真菌为 研究材料,用子实体及菌丝形态学鉴定方法与rDNAITS区段序列分析相结合,对菌根真菌进行菌种鉴定.研究结 果表明:Bo15,Ld2,Cg04和Pt715分别为Suillusbovinus,Lactariusdeliciosus,Cenococcumgeophilum 和Pisolithustinctorius.     

ITS序列分析在真菌分类鉴定中的应用

综述了ITS序列分析技术的原理、特点及近年来在痛原真茵分类鉴定上的应用,同时对ITS序列分析技术在真菌分类鉴定研究领域中的前景进行了展望.     

一株野生大型真菌的菌种分离及ITS序列鉴定

[目的]寻找适宜杨树林下栽培的野生食用菌菌种。[方法]对采集自辽宁省阜新市蒙古族自治县银中杨林下的野生大型真菌进行菌种分离,同时研究不同分离部位对菌丝生长的影响,并对获得菌丝进行了rDNA ITS序列分析。[结果]菌盖与菌柄连接处为菌种最佳分离部位。对分离株rDNA ITS片段进行PCR扩增,扩增产物长度为692 bp,登录NCBI与GenBank中已知的菌种进行Blast比对,序列与Agaricus bitorquis(Quél.)Sacc的Query cover为97%~100%,ident均为99%。[结论]鉴定分离菌种为蘑菇科、蘑菇属、大肥菇。该研究可为下一步开展杨-食用菌复合经营提供菌种准备。     

1株大蒜内生真菌的分离鉴定及抗病原真菌活性

大蒜(Allium sativum L.)为百合科葱属多年生草本植物,富含生物活性成分及营养物质。采用组织分离法对新鲜健康的大蒜蒜瓣进行内生真菌的分离纯化,获得一株乳白色真菌KLBMPGC013;通过形态特征和ITS序列分析鉴定该菌株为白地霉(Geotrichum candidum);将该菌株菌悬液接种在健康大蒜蒜瓣上进行培养,大蒜蒜瓣未出现明显病斑,说明该菌株对大蒜无致病性影响;以4种植物病原真菌为指示真菌检测该菌株的抑菌活性,结果显示,该菌株能抑制2种指示真菌的生长;采用蒽酮硫酸法检测该菌株产胞外多糖含量,结果显示,其胞外多糖浓度为2.89 mg/mL。通过提取该菌株胞外粗多糖并检测其抑菌活性发现,该内生真菌粗多糖对大蒜白腐小核菌的抑制作用较好,对西瓜壳二孢稍有抑制作用。     

一种白蜡树真菌病害的分离与鉴定

为鉴定湖南省怀化市芷江县白蜡树叶真菌病害,对采集的病叶进行菌种分离,得到菌丝浓密,菌丝表面光滑,背面前期呈黄色后期呈黑色的单一菌落。对分离株DNA ITS片段进行PCR扩增,扩增产物长度为585 bp,将ITS序列与GenBank数据库进行Blast比对,序列与Alternaria alternata的query cover为100%,per. ident为100%,经对比最终确定侵染白蜡树的病原菌为Alternaria alternata（黑斑病菌）。     

一株产巴卡亭Ⅲ红豆杉内生真菌的分离与鉴定

[目的]分离鉴定产巴卡亭Ⅲ红豆杉内生真菌。[方法]采用常规分离方法,从东北红豆杉（TaxuscuspidataSieb.etZucc.）树皮中分离并筛选内生真菌35株;通过高效液相色谱（HPLC）技术对菌株发酵物进行检测,并结合选择性离子质谱（MS）进行确认,从中获得1株能产紫杉醇前体物质巴卡亭Ⅲ的菌株Z-1;利用ITSrDNA通用引物对产紫杉烷类物质的内生真菌进行分子生物学鉴定,并结合菌落特征、孢子与分生孢子梗的形态特征进行分类鉴定。[结果]在未经诱导的情况下,Z-1产巴卡亭Ⅲ的量约为39μg/L;形态和分子鉴定分析判定Z-1属于木霉属（Trichoderma sp.）真菌。[结论]该研究可为植物内生真菌产紫杉烷类化合物的种类多样性和产紫杉烷类内生真菌的生物多样性提供依据。     

一株抗辣椒疫病真菌的筛选及鉴定

从56份辣椒连作土壤中分离微生物782株,采用平板对峙法筛选出5株对辣椒疫病菌具有明显抑制作用的菌株,其中ASD菌株平板对峙试验结果表现最好,抑菌带宽11.7 mm,盆栽防效为75.12％,优于化学药剂代森锰锌和烯酰吗啉,有较好的应用开发前景.ASD菌株分生孢子头初为辐射形,后期为柱形；产孢结构双层,有明显的瓶梗及多育现象；分生孢子球形或近球形、壁滑,未见壳细胞；其rDNA- ITS序列与GenBank中已知序列比对,相似度97％,确定该菌株为黄柄曲霉(Aspergillus flavipes).     

茶叶中23株真菌的分离鉴定

我国茶叶特别是发酵茶叶中含有许多有益真菌,其代谢产物具有抗菌、抗癌、降脂、降压的功能。目前,关于茶叶中真菌功能的研究很多,但在畜牧业中尚无相关应用研究。取湖南安化金花茯砖茶、天福南糯山熟饼、天福茗茶、天福白茶、安吉普洱茶、天福普洱、祁门红茶和金茯茶共8种茶叶进行真菌分离、纯化,共得到23株菌株,通过形态学和ITS基因序列的鉴定,共得到拟茎点霉菌1株,变色栓菌1株,枝状枝孢菌1株,黑曲霉2株,曲霉菌1株,冠突曲霉2株,阿姆斯特丹曲霉6株,棕曲霉2株,格孢菌1株,扩展青霉菌1株,拟盘多毛孢菌1株,球孢枝孢菌2株,变色曲霉2株。结果为这些真菌的进一步研究和在生产实践中的应用提供了物质基础。并且将其中的优势菌属冠突散囊菌进行扩大培养,为后期的生产实践做好准备。     

贵州道地药材杜仲内生真菌的分离及鉴定

[目的]开发有地域特色的杜仲内生真菌资源,为杜仲内生真菌多样性和内生真菌的开发利用提供参考。[方法]采用传统的组织培养法从毕节市杜仲中分离内生真菌,对得到的内生真菌进行形态学和真菌rDNA的居间序列(internal transcribed spacer,ITS)鉴定。[结果]从毕节市杜仲中分离得到93株真菌,经鉴定分为拟茎点霉属(Phomopsis sp.)、间座壳属(Diaporithe sp.)、黑孢属(Nigrospora sp.)、粪壳菌属(Sordariales sp)、黑附球菌(Epicoccum rnigrum)、小光壳属(Leptosphaerulina sp.)、锐顶炭角菌(Xylaria apiculata)、刺盘孢属(Colletotrichum sp.)和大白栓菌(Trametes lactinea)共9属,其中拟茎点霉属和间座壳属为优势菌属,分别占54.83%和26.88%。[结论]贵州杜仲内生真菌多样性丰富,杜仲内生真菌炭角菌属、大白栓菌为我国首次报道。     

气肿疽梭菌HLJ-1株分离鉴定及系统进化分析

2015年6月,内蒙古某牛场爆发疑似气肿疽疫病,为了有效防控该病,无菌采集炎性气肿的肌肉进行需氧和厌氧菌的分离鉴定和药敏试验,结果在厌氧条件下从患病牛肌肉内分离出无荚膜,革兰氏染色呈阳性两端钝圆的杆菌。经表型特征和生化鉴定表明分离菌株与气肿疽梭菌相符,进一步对16S rDNA通用引物扩增得到的基因测序结果分析表明,其与气肿疽梭菌株同源性最高达95.8%,毒素检测表明含有α毒素。以上结果证明该菌株为气肿疽梭菌。分离菌株对蒽诺沙星、环丙沙星等药物高度敏感。为该病的防制提供了理论依据和物质基础。     

一株高效秸秆纤维素降解真菌的分离、鉴定及系统发育分析

通过刚果红染色法初筛,结合产酶活性测定复筛,从奶牛、山羊瘤胃内容物中分离到一株纤维素高效降解菌NL-3,克隆了该菌的18SrDNA序列,并以其同源性为基础构建了相关属种的系统发育树。结果表明,18SrDNA序列全长504bp,Blast显示该菌株与青霉菌属同源;NL-3菌株在进化关系上也与青霉菌属（Penicillium）聚成一族。特别是与Penicillium decumbens strain JU - A10的同源性最高,序列相似性达99％。结合菌株形态学及18SrDNA基因序列分析结果对菌株进行鉴定,初步鉴定为青霉属的斜卧青霉（Penicillium decumbens）。     

中国主要野生毛皮物种识别检索表

为了更加方便、准确地鉴定毛皮,根据东北林业大学毛皮标本室收藏的标本,编制了毛皮形态学检索表,该表可以准确鉴定食肉目和啮齿目8个科的58个物种的毛皮。本检索表尽量采用可以明显确认的形态特征进行编制,并尽量避免使用在剥皮鞣制过程中容易丢失的特征。表中绝大多数物种的特征均从5张以上的皮张总结而来,主要适用于未经过染色、剪绒、拔针等处理的生皮或鞣制过的皮张。     

宁夏水稻种质资源主要抗稻瘟病基因的鉴定和评价

针对宁夏地区水稻抗稻瘟病主要基因尚不清楚的现状,采用已克隆抗稻瘟病基因的功能标记对143份宁夏水稻种质资源进行抗稻瘟病基因的分子扫描。同时,利用宁夏地区致病性强且致病力频率高的10个稻瘟病菌菌株混合悬浮液进行人工接种与自然诱发相结合的方法鉴定其抗病性。进而开展稻瘟病抗性性状与抗性基因的关联分析。结果表明:在宁夏水稻种质资源中表现主要的抗病基因有Pikm、 Pi9、 Pi2、 Pi5和 Pid2。在此基础上,对主要抗病基因在宁夏水稻品种中的应用进行评价,发现Pikm、 Pi9、 Pi5、和 Pid2基因在宁夏水稻种质资源中的分布频率比较低,分别为0.56、0.35、0.30、和0.11。所以这些基因是今后改良宁夏水稻稻瘟病抗性的主要抗病基因。     

安徽省水稻潜根线虫种类鉴定及分布研究

对黄山、屯溪等１１个县市的调查采样鉴定结果表明：我省共潜根线虫１１个种。其中Ｈ．ｍａｒｉｎａ,Ｈ．ｄｕｂｉａ,Ｈ。ｂｅｌｌｉ,Ｈ．ｄｉｖｅｒｓａ等５个种为安徽省首次记录,Ｈ．ｏｒｙｚａｅ和Ｈ．ｃａｕｄａｃｒｅｎａ出现频率最高,数量最大。     

水稻2种细菌性病害的识别与防治

介绍了水稻2种细菌性病害———水稻细菌性褐条病和水稻细菌性褐斑病的发生规律、危害症状,并从农业防治和化学防治2方面提出了综合防治措施。农业防治措施包括因地制宜选择抗病、耐病品种,合理搭配施用氮、磷、钾肥,采用浅—湿—干间歇灌溉,适时晒田等;化学防治可进行种子处理和药剂喷施。     

水稻主要病害拮抗细菌的筛选与鉴定

从稻种、稻叶、稻田土壤、稻田菌核和菜地土壤共 1 0 5份样品中共分离细菌菌株 2 6 72株 ,经拮抗性能测定 ,对水稻纹枯病菌 (Rhizoctoniasolani)、水稻恶苗病菌 (Fusari ummoniliforme)、水稻稻瘟病菌 (Maganporthegrisea)、水稻白叶枯病菌 (Xanthomonasoryzaepv .oryzae)和水稻细菌性条斑病菌 (Xanthomonasoryzaepv .oryzicola)有拮抗作用的菌株分别有 5 0 0、6 7、45、1 1和 9个。根据NA平板上菌落的形态特征 ,将 6 7株稻恶苗病拮抗细菌初步分为 7个类群 ,每一类群中选拮抗性能最强的一个菌株进行鉴定 ,结果有 4支菌株为Bacillussubtilis,另 3支菌株分别为B .pumillus、B .polymyxa和Pseudomonassp     

水磨年糕中微生物的分离纯化与鉴定

通过对年糕内部和表面的微生物进行分离纯化,并通过形态观察、生化测定的方法来鉴定微生物的组成,结果表明:年糕表面的微生物主要有6种细菌、3种霉菌和2种酵母菌。细菌中4种是芽孢杆菌,分别为巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和短芽孢杆菌(Bacillus brevis),2种是非芽孢杆菌,分别为乙酰短杆菌(Brevibacterium acetylicum)和乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus);霉菌分别为米根霉(Rhizopus oryzae)、构巢曲霉(Aspergillus nidulans)和米曲霉(Aspergillus oryzae);酵母菌分别为茁芽丝孢酵母(Trichosporon pullulans)和白色假丝酵母(Candida albicans)。年糕内部的微生物有巨大芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、短芽孢杆菌和白色假丝酵母,无霉菌。     

瓜类作物枯萎病病原菌的分类鉴定及其ITS序列差异性分析

 【目的】鉴定福建省几种重要瓜类作物枯萎病菌,比较和分析它们的ITS序列差异和种内群体分化状况。【方法】通过分子鉴定结合形态鉴定,确定瓜类作物枯萎病菌的种类;通过它们的ITS序列亲缘关系和多重比较分析,分析该病原菌种内群体分化特点。【结果】供试的26个菌株属于两种镰孢菌：尖孢镰孢（Fusarium oxysporum）和串珠镰孢（Fusarium moniliforme）,其中F.oxysporum占54%,为优势种;这两种类型菌株的ITS序列差异较大,且主要表现在ITS2区间,差异达20.4%,而ITS1区间的序列完全相同或只有1个碱基的差异;F.oxysporum种内存在3类ITS序列,类型I与类型Ⅱ在376 bp处有1个碱基（C/T）的差异,类型Ⅱ比类型Ⅲ少1个碱基（A）;F.moniliforme种内也存在3类,类型Ⅰ与类型Ⅱ在320 bp处有1个碱基差异（T/C）,类型Ⅰ与类型Ⅲ有3个碱基的差异,分别是在38 bp处有1个碱基差异（A/C）,在395 bp处有1个碱基差异（T/C）,在429 bp处有1个碱基的差异（T/A）。【结论】福建省瓜类作物枯萎病菌为F.oxysporum和F.moniliforme。这两种镰孢菌种间的ITS序列差异较大且主要差异在ITS2区间,但是这两种类型镰孢菌种内ITS序列差异却很小。     

降解水稻秸秆的好氧性丝状真菌菌株的分离筛选与初步鉴定

[目的]对特定生态环境（腐烂的稻草）中的微生物进行分离筛选,并就这些微生物菌株对水稻秸秆的降解能力进行研究和分析.[方法]利用以微晶纤维素粉等只含纤维素成分的原料作唯一碳源的培养基对从稻草秸秆中分离筛选到的7株可降解稻草秸秆的丝状真菌菌株进行分离和筛选,通过形态学观察和生理生化特性2个层次对其进行鉴定.同时,对这些菌株降解水稻秸秆的能力进行了研究.[结果]试验发现,筛选出的7株菌株中有2株属于多轮青霉组,2株属于烟色曲霉组,1株小孢根霉组,1株梨卵形孢组以及1株总状枝毛霉组.其中1株烟色曲霉组和1株卵形孢组降解秸秆纤维素能力较强,另有1株烟色曲霉组和1株卵形孢组降解秸秆半纤维素能力较强.[结论]研究可为微生物菌种降解水稻秸秆的能力研究提供参考.     

水稻种子休眠性基因座的定位和分析

 水稻种子休眠性是关系到稻米品质和稻种质量的重要农艺性状,与穗发芽抗性直接相关。DNA标记和水稻连锁图谱的发展,为定位种子休眠性的基因位点、研究单个基因的"剂量效应"和剖析各基因位点对环境的敏感性等方面提供了可能性。迄今,利用分子标记,对不同的遗传群体,已初步定位了多个与水稻种子休眠性有关的QTL。本文简要介绍了水稻种子休眠性传统遗传学研究概况,重点对已报道的种子休眠性数量性状基因位点（QTL）进行比较分析,探查稳定表达的种子休眠性QTL,讨论了水稻种子休眠性研究存在的问题和进一步研究的途径。