重组鸡α干扰素抑制H9N2禽流感病毒在鸡胚中增殖的研究

为检测重组鸡α干扰素(rChIFN-α)抑制H9N2禽流感病毒(AIV)在鸡胚中的增殖效力,本研究将rChIFN-α按其抗病毒效价高低分为4个组(10~7 U/mL、10~6 U/mL、10~5 U/mL和10~4 U/mL),同时设置阴性对照组和病毒对照组。各实验组再依次按照给药时间不同又分为"先给药再接种病毒组"、"同时给药和接种病毒组"及"先接种病毒再给药组"3个小组进行试验,通过检测H9N2 AIV血凝效价的变化、H9N2 AIV HA基因拷贝数以及各组EID_(50)评价rChIFN-α对H9N2 AIV增殖抑制效力。结果显示,除低剂量组以外,各剂量组与病毒对照组相比,结果均可以显著降低鸡胚尿囊液中H9N2 AIV的血凝效价(p0.01),同时能够显著减少H9N2 AIV基因的拷贝数(p0.01)及显著降低EID_(50)(p0.01)。表明中等剂量(10~5 U/mL)及更高剂量的rChIFN-α在鸡胚中能够显著抑制H9N2 AIV的增殖。本研究为rChIFN-α今后在临床中抗AIV治疗的实际应用提供了相关实验依据。     

中药制剂"瘟毒杀"对IBDV、NDV和AIV的抑制试验

选10日龄SPF鸡胚,进行了瘟毒杀煎液对鸡胚人工感染NDV、IBDV和AIV抑制试验.结果显示,瘟毒杀药液(1g/ml)2倍、4倍和6倍稀释,对感染NDV强毒的鸡胚保护率达到100%、75%和62.5%,比NDV强毒对照组分别提高87.5、62.5和50个百分点;对感染AIV强毒的鸡胚保护率达到87.5%、62.5%和50%,比AIV强毒对照组分别提高75、50和37.5个百分点;对感染IBDV强毒的鸡胚保护率达到100%、87.5%和62.5%.比IBDV强毒对照组分别提高75、62.5和37.5个百分点.NDV强毒接种组鸡胚尿囊液NDV血凝效价极显著高于NDV强毒+瘟毒杀药液组尿囊液NDV血凝效价;AIV强毒接种组鸡胚尿囊液AIV血凝效价极显著高于AIV强毒+瘟毒杀药液组尿囊液AIV血凝效价.结果表明,瘟毒杀对NDV、AIV和IBDV有较强的抑制作用.     

禽流感病毒H9亚型灭活油乳剂疫苗的免疫试验

以低致病性禽流感病毒（AIV）H9N2亚型株的鸡胚适应毒经尿囊腔接种10日龄鸡胚，从24h后死亡胚及96h后4℃致冷死亡胚收集尿囊液，尿囊液的血凝价约7log2，每毫长约含10^8.6个ELD50的病毒。将尿囊液经0.1%福马林灭活后，用超滤器将尿囊液浓缩5倍后分别制成双联灭活疫苗。对4周龄SPF鸡肌肉注射0.5ml或0.3ml单联H9亚型AIV灭活苗，在接种后2、3、4、5周后，血清中对H9亚型AIV的血凝抑制（HI）抗体效价分别是5.1、7.2、8.3、10log2或3.8、6.5、6.3、8.31log2。注射0.5ml的H9亚型AIV和NDV二联油乳苗的鸡，在接种后2、3、4、5周对H9亚型AIV及Lasota株NDV的HI滴度分别是4.6、5.6、6.7、8log2及7、7.6、6.7、7log2。显然，二联苗对H9亚型AIV及NDV均产生了理想的免疫效果。     

海藻硫酸多糖和中药复方对鸡胚接种H9N2亚型禽流感病毒的作用

为探讨海藻硫酸多糖(sulfated polysaccharide from algae,SPA)及中药复方提取液(compound extracts of Chinese medicine,CECM)对H9N2亚型禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)的作用,将SPA及CECM以3种不同加药方式作用于接种了H9N2亚型AIV的10日龄SPF鸡胚中,无菌收集鸡胚尿囊液,测定血凝效价,检测2种药液对H9N2亚型AIV的预防、治疗及直接灭活作用。结果显示,SPA及CECM的最大安全浓度分别为50和200mg/mL;3种不同加药方式下,不同浓度SPA及CECM均能极显著降低鸡胚尿囊液中H9N2亚型AIV的血凝效价(P0.01),以直接灭活作用组的血凝效价降低幅度最大,预防作用组和治疗作用组次之。预防作用组,CECM高剂量组(200mg/mL)的抗病毒效果显著优于SPA各剂量组(12.5、25和50mg/mL)及CECM低、中剂量组(50和100 mg/mL)(P0.05);治疗作用组,SPA高剂量组(50 mg/mL)及CECM中、高剂量组(100和200mg/mL)抗病毒效果显著优于SPA低剂量组(12.5mg/mL)(P0.05);直接灭活作用组,SPA及CECM的抗病毒效果均佳,CECM各剂量组的抗病毒效果与SPA各剂量组差异极显著(P0.01)。结果表明,SPA和CECM对10日龄鸡胚几乎无毒副作用;SPA及CECM均能显著抑制H9N2亚型AIV在鸡胚尿囊液中的增殖,以直接灭活作用组的抗病毒效果最佳,其抗H9N2亚型AIV作用的强弱与药物浓度、用药和病毒的感染时间顺序密切相关。     

海藻硫酸多糖和中药复方对鸡胚接种H9N2亚型禽流感病毒的作用

为探讨海藻硫酸多糖（sulfated polysaccharide from algae,SPA）及中药复方提取液（compound extracts of Chinese medicine,CECM）对H9N2亚型禽流感病毒（avian influenza virus,AIV）的作用,将SPA及CECM以3种不同加药方式作用于接种了H9N2亚型AIV的10日龄SPF鸡胚中,无菌收集鸡胚尿囊液,测定血凝效价,检测2种药液对H9N2亚型AIV的预防、治疗及直接灭活作用。结果显示,SPA及CECM的最大安全浓度分别为50和200 mg/mL;3种不同加药方式下,不同浓度SPA及CECM均能极显著降低鸡胚尿囊液中H9N2亚型AIV的血凝效价（P<0.01）,以直接灭活作用组的血凝效价降低幅度最大,预防作用组和治疗作用组次之。预防作用组,CECM高剂量组（200 mg/mL）的抗病毒效果显著优于SPA各剂量组（12.5、25和50 mg/mL）及CECM低、中剂量组（50和100 mg/mL）（P<0.05）;治疗作用组,SPA高剂量组（50 mg/mL）及CECM中、高剂量组（100和200 mg/mL）抗病毒效果显著优于SPA低剂量组（12.5 mg/mL）（P<0.05）;直接灭活作用组,SPA及CECM的抗病毒效果均佳,CECM各剂量组的抗病毒效果与SPA各剂量组差异极显著（P<0.01）。结果表明,SPA和CECM对10日龄鸡胚几乎无毒副作用;SPA及CECM均能显著抑制H9N2亚型AIV在鸡胚尿囊液中的增殖,以直接灭活作用组的抗病毒效果最佳,其抗H9N2亚型AIV作用的强弱与药物浓度、用药和病毒的感染时间顺序密切相关。     

禽流感病毒单克隆抗体的研制

用低致病性禽流感病毒H9N2亚型(Mildly Pathogenic Avian Influenza Virus,MPAIV)F株全病毒作为抗原,制备能够用于建立ELISA检测AIV的特异性单抗;以间接ELISA和HI试验筛选出阳性克隆,并经有限稀释法三次亚克隆之后,共获得三株稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞株,在Dot-ELISA试验中三株单抗中的两株与13个AIV H9N2国内分离株、4个AIV H5N1国内分离株都反应,而与10个NDV国内分离株,IBV、IBDV、EDSV-76、SPF鸡胚尿囊液不反应.一株与13个AIV H9N2国内分离株反应,与4个AIV H5N1分离株、NDV、IBV、IBDV、EDSV-76、SPF鸡胚尿囊液不反应.     

抗H9N2亚型禽流感病毒单克隆抗体的制备及初步鉴定

利用纯化的H9N2亚型禽流感尿囊液病毒免疫原免疫Balb/c小鼠,应用杂交瘤技术将免疫鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0)融合,用间接ELISA方法检测培养上清是否对H5N1亚型AIV及NDV反应,筛选只针对H9N2亚型AIV的阳性细胞株,经克隆获得2株较高亲和力的杂交瘤细胞株,用其制备的腹水ELISA效价达到2×105。     

H9N2亚型禽流感病毒中和单克隆抗体的制备与应用

为建立H9N2亚型禽流感病毒（Avian influenza virus,AIV）免疫层析快速检测技术,本研究以差速离心法纯化H9N2亚型AIV免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行细胞融合和HAT选择性培养;以H9N2亚型AIV感染MDCK细胞建立异源免疫过氧化物酶单层细胞试验（IPMA）的单克隆抗体检测方法,通过对杂交瘤细胞的IPMA筛选和连续克隆化筛选鉴定抗H9N2亚型AIV中和性单克隆抗体;以胶体金标记HA单克隆抗体,配对HA单克隆抗体和羊抗小鼠IgG为检测线和质控线,制备H9N2亚型AIV快速检测试纸条,测定其特异性和敏感性。结果显示,获得了11株稳定分泌抗H9N2亚型AIV单克隆抗体的杂交瘤细胞,其单克隆抗体腹水IPMA效价在1.28×10^-4至2.56×10^-5之间。单克隆抗体3A2、5H6、6B8、7E10和9G12血凝抑制试验（HI）显示血凝抑制活性,其（HI）效价在6log2~9log2之间。单克隆抗体3A2、6B8和9G12在病毒中和试验中对H9N2亚型AIV有显著病毒中和活性,中和效价分别1∶6 400、1∶25 600和1∶25 600。Western blotting结果提示,该中和单克隆抗体识别HA蛋白线性抗原表位。利用配对单克隆抗体3A2和9G12研制的H9N2亚型AIV检测试纸条检测H9N2亚型AIV尿囊液的效价为9log2,灵敏度与经典血凝试验（HA）相当,与其他亚型AIV （H1、H3、H5、H7）,以及新城疫病毒和鸡传染性法氏囊病病毒等相关病毒均无交叉反应。本研究制备了具有病毒中和活性的抗H9N2亚型AIV单克隆抗体,并初步研制了H9N2亚型AIV检测试纸条,为H9N2亚型AIV新型疫苗研制和快速检测奠定良好的研究基础。     

H9N2亚型猪流感病毒诱导小鼠肺急性损伤模型的研究

本试验采用100 μLA/swine/HeBei/012/2008/(H9N2)猪流感病毒(H9N2 SIV)经鼻腔接种6～8周龄的BALB/c小鼠,通过定时称量小鼠的采食量和体质量、观察肺病理组织学变化以及测量肺系数、肺湿质量/干质量、动脉血气和支气管肺泡灌洗液内炎性细胞等拟建立H9N2 SIV感染诱导小鼠急性肺损伤模型.结果显示:(1)感染后第2天试验组小鼠出现精神沉郁、被毛松乱、采食量和体质量下降.感染后的第3天开始感染小鼠采食量和体质量显著下降(P＜0.01);(2)试验组小鼠在感染后的第3天末出现死亡,死亡率约为62.5%,剖检可见肺部明显水肿、出血,肺泡内有大量的炎性细胞渗出;肺系数和湿质量/干质量比显著增加(P＜0.01);(3)与对照组相比感染组小鼠动脉血中氧分压从第2天开始降低,第4天出现明显的差异(P＜0.01),第6天最低时仅为(6.79士1.27)kPa,呈现严重的低氧血症,同时,二氧化碳分压显著上升;(4)支气管灌洗液(BALF)内炎性细胞在感染后第4-8天增加显著,尤其以肺泡巨噬细胞和多核型白细胞增加最为明显(P＜0.01).本研究证实采用A/Swine/HeBei/012/2008/(H9N2)病毒感染小鼠引起肺组织弥漫性急性渗出性炎症为主的病理过程和严重的低氧血症,表明成功建立了H9N2 SIV诱导小鼠的肺损伤模型,为进一步研究其对哺乳动物肺损伤的致病机理奠定基础.     

悬浮培养和鸡胚尿囊液抗原制备的H9亚型禽流感疫苗免疫效力比较试验

为了探讨悬浮培养和鸡胚尿囊液培养得到的H9亚型禽流感病毒(AIV)抗原制备的疫苗的免疫效力,试验用3株H9亚型AIV株分别接种微载体悬浮培养的MDCK细胞制备3种悬浮培养的细胞疫苗抗原,以3株H9亚型AIV株接种10日龄SPF鸡胚制备3种鸡胚尿囊液抗原,测定6种抗原液HA效价和鸡胚半数感染量(EID50);分别使用6种抗原液制备灭活疫苗,免疫21日龄SPF鸡,并在免疫后第21天采血测定HI抗体水平,采血后进行攻毒并在攻毒后第5天进行病毒分离试验。结果表明:两种方式制备的AIV抗原HA效价为7~9 lb,鸡胚半数感染量为1×106.9~7.9EID50,疫苗免疫后第21天用同源毒株作为工作抗原测定的免疫鸡HI效价差异不大,用异源毒株测定时有一定差异;两种方法得到的抗原制备的疫苗均能获得很好攻毒保护。     

The occurrence and transmission characteristics of airborne H9N2 avian influenza virus

To better understand the transmission route of H9N2 avian influenza virus (AIV), two duplicate trials were conducted to observe the process of aerosol infection and direct contact in specific pathogen free chickens. Fifteen chickens (G1) were inoculated with H9N2 AIV and housed together with another 15 chickens (G2) in the same positive-negative-pressure isolator (A). Fifteen chickens (G3) were bred in another isolator (B) which was connected with A so that air could flow unidirectionally from A to B. Air, oropharyngeal and cloacal swabs, and blood samples were collected for the detection of aerosolized virus, virus shedding, and seroconversion. AIV aerosols were initially detected at day 2-3 post inoculation (dpi), reaching peak concentrations at 7 dpi. Virus shedding was detected in all chickens of G2, but only in a part in G3 (T1: 87%, T2: 80%). Antibodies were initially detected at 4-5 dpi, peaking at 14-21 dpi. The results showed that H9N2 AIV could be transmitted by both aerosol exposure and direct contact.     

灌胃和腹腔注射鼠李糖乳杆菌对妊娠期小鼠粪便菌群多样性的影响

【目的】研究灌胃和腹腔注射鼠李糖乳杆菌(Lactobacillus rhamnosus,LGG)对妊娠期小鼠粪便菌群多样性的影响,为动物妊娠期生理及肠道健康提供理论依据。【方法】选择体重相近(23.33 g±1.55 g)、配种日期相同的SPF级妊娠昆明小鼠45只,随机分为3组,分别为对照组、试验Ⅰ组和试验Ⅱ组,每组15只。在相同饲养管理和饲粮营养水平下,从妊娠的第2天开始,对照组饲喂基础饲粮;试验Ⅰ组腹腔注射0.5 mL含有0.125 g LGG的灭菌生理盐水(连续14 d);试验Ⅱ组灌胃0.5 mL含有0.125 g LGG的灭菌生理盐水(连续18 d),试验期21 d。所有小鼠于临产前1 d解剖,采集大肠粪便样品,提取各组粪便样本的基因组DNA,PCR扩增后进行文库构建,对合格文库应用NovaSeq 6000测序平台进行测序,采用Uparse软件(v 7.0.1001)以97%的一致性将序列聚类成为操作分类单元(OTUs)并筛选代表序列。采用Mothur方法与SILVA 132的SSUrRNA数据库进行物种注释分析,并统计门、科和属水平上的群落组成。使用QIQME 1.7.0软件...     

不同蛋白源日粮添加乳酸链球菌素对育肥湖羊瘤胃发酵及微生物菌群结构的影响

本试验旨在探究不同蛋白源日粮条件下添加乳酸链球菌素（nisin）对育肥湖羊瘤胃发酵及微生物菌群结构的影响。试验采用2×2因子设计,两因子分别为蛋白源[豆粕（SBM）、干玉米酒精糟及其可溶物（DDGS）]和nisin （添加水平为0或30.5 mg·kg^-1 DM）,两两组合,配制4种等氮等能日粮。选取32只体重（23±2） kg的断奶湖羊公羔,按照随机区组设计,根据体重分为2个区组（低体重组,16只;高体重组,16只）,每个区组的湖羊随机分配到4个组并分别饲喂对应日粮,单栏饲喂。试验预饲期1周,正式期9周,试验期结束时每组从高、低体重区组中各随机选取3只湖羊（共24只）进行屠宰,采集瘤胃内容物,提取微生物基因组DNA,利用Illumina MiSeq测序和Real-time qPCR方法分析瘤胃微生物菌群结构。研究结果表明,除Ruminococcaceae NK4A214 group和Unclassified Bacteroidetes相对丰度外,日粮蛋白源与nisin对其他所有测定指标（瘤胃发酵参数、瘤胃菌群数量、瘤胃细菌多样性及相对丰度等）均不存在交互作用（P>0.05）。日粮添加nisin对所有测定指标均无显著影响（P>0.05）。与饲喂豆粕湖羊相比,饲喂DDGS湖羊瘤胃乙酸、氨态氮浓度及总支链脂肪酸（BCVFA）浓度显著降低（P<0.05）。qPCR结果显示,饲喂不同蛋白源日粮湖羊瘤胃总菌、真菌及甲烷菌数量均无显著差异（P≥0.053）,但相对于饲喂豆粕湖羊而言,饲喂DDGS湖羊瘤胃内原虫和嗜氨梭菌（C.aminophilum）数量显著降低（P<0.05）。Illumina-MiSeq测序结果表明,饲喂DDGS湖羊瘤胃内细菌Chao1指数和ACE指数显著升高（P<0.05）。不同日粮处理组在门水平上的优势菌门均为Bacteroidetes及Firmicutes;在属水平各处理组的主要优势菌属为Prevotella 1、Christensenellaceae R-7 group和Ruminococcaceae NK4A214 group。饲喂不同蛋白源湖羊瘤胃细菌在门水平上并未产生显著影响（P≥0.14）;在属水平上,饲喂DDGS湖羊瘤胃Pseudobutyrivibrio和Roseburia丰度均显著高于饲喂豆粕湖羊（P<0.05）,而Butyrivibrio 2以及Ruminococcaceae UCG-005的相对丰度显著低于饲喂豆粕湖羊（P<0.05）。综上所述,使用DDGS作为日粮蛋白源改变了湖羊瘤胃发酵参数及微生物菌群结构,原虫和C.aminophilum数量的降低可能是导致瘤胃氨态氮浓度显著降低的主要原因;日粮添加30.5 mg·kg^-1 DM的nisin对育肥期湖羊瘤胃发酵参数及微生物菌群结构均无显著影响。     

检测禽流感病毒抗体的重组核蛋白间接ELISA方法的建立

以大肠杆菌系统表达的H9N2亚型禽流感病毒（AIV）核蛋白（NP）为抗原，建立了禽流感间接酶联免疫吸附试验抗体检测技术（NP—ELISA）。对263份待检血清（包括临床收集的243份血清和20份H9N2亚型AIV免疫鸡阳性血清）进行检测，NP—ELISA与琼脂免疫扩散试验（AGP）的总符合率为83．3％，与血凝抑制试验（HI）的总符合率为92％。特异性试验表明，NP—ELISA方法可以检测H5、H7和H9亚型AIV特异性抗体，检测为阳性的血清样品能够被阳性鸡胚尿囊液阻断。敏感性试验证实，NP—ELISA最早可以检测鸡感染后7d的血清样品，并于感染后10d确定100％血清阳性，而AGP检测直到首免后21～28d才出现部分血清阳性，HI检测直到10～14d才出现部分血清阳性，并且NP-ELISA要比HI敏感4～40倍。试验证明，NP—ELISA是检测AIV血清型特异性抗体的一种特异、敏感、快速、经济的血清学检测技术。     

哺乳期幼驼与成年母驼粪便菌群多样性分析

【目的】探究准噶尔双峰驼哺乳期幼驼和成年母驼粪便菌群结构组成及多样性变化,为幼驼肠道健康发育提供重要依据。【方法】选取6～7岁体况相近的健康成年母驼12峰,以及出生日期相近(3月龄)的哺乳期母幼驼12峰,母驼与幼驼在相同饲养环境下饲养。采用直肠取粪法采集粪样,用于粪便内容物细菌16S rDNA的V3-V4区测序,并对测序数据进行相应分析。【结果】母驼粪便菌群Chao1和Shannon指数均显著高于幼驼(P<0.05);在门水平上,母驼和幼驼粪便中位于前十的菌均为厚壁菌门、拟杆菌门、疣微菌门、变形菌门、软壁菌门、螺旋体门、TM7、放线菌门、蓝藻菌门和纤维杆菌门,其中幼驼粪便中变形菌门和软壁菌门丰度均极显著高于母驼(P<0.01);在科水平上,母驼与幼驼粪便中位于前十的菌均为瘤胃球菌科、消化链球菌科、毛螺菌科、梭菌科、克里斯滕森菌科、理研菌科、疣微菌科、拟杆菌科、艰难杆菌科和普雷沃氏菌科,其中母驼粪便中消化链球菌科和梭菌科的丰度均极显著高于幼驼(P<0.01),而幼驼粪便中毛螺菌科的丰度极显著高于母驼(P<0.01);在属水平上,母驼与幼驼粪便中位于前十的菌属均为梭...     

核桃青皮及其提取物对黄羽肉仔鸡肠道形态、黏膜抗氧化性能及微生物多样性的影响

试验旨在探究添喂核桃青皮及其25%乙醇溶液提取物对黄羽肉仔鸡肠道形态、黏膜抗氧化性能及微生物多样性的影响。选取144只1日龄雄性黄羽肉鸡,随机分为3组,每组12个重复,每个重复4只鸡。对照组饲喂基础饲粮,试验Ⅰ和Ⅱ组分别在基础饲粮中添加1%的核桃青皮原粉和核桃青皮提取物,饲养至70日龄。试验结束后从每个重复中随机挑选1只,屠宰后取小肠,分别测定十二指肠、空肠和回肠绒毛高度和隐窝深度;刮取十二指肠黏膜,测定总超氧化物歧化酶（T-SOD）、铜锌型超氧化物歧化酶（CuZn-SOD）、锰型超氧化物歧化酶（Mn-SOD）、总抗氧化能力（T-AOC）、过氧化氢酶（CAT）及谷胱甘肽还原酶（GR）活性;取回肠内容物,采用16S rDNA高通量测序技术分析肠道微生物多样性及相对丰度的差异。结果显示,与对照组相比,添加核桃青皮及其提取物对黄羽肉鸡十二指肠、空肠和回肠绒毛高度、隐窝深度以及绒毛高度/隐窝深度比值均无显著影响（P>0.05）;对十二指肠黏膜T-SOD、CuZn-SOD、Mn-SOD、CAT的活性及T-AOC均无显著影响（P>0.05）;添加核桃青皮及其提取物后,回肠微生物物种数显著提高（P=0.05）,微生物多样性指数和物种丰富度指数明显增加,但差异不显著（P>0.05）。对照组黄羽肉仔鸡回肠菌群在门水平上主要是厚壁菌门,超过总细菌的99%。添加核桃青皮粉及其提取物使厚壁菌门丰度明显下降,而拟杆菌门的丰度明显增加,但均差异不显著（P>0.05）。乳杆菌属是对照组黄羽肉仔鸡回肠菌群最主要的属,平均占71%。添加核桃青皮及其提取物后,肠道中的乳杆菌属的相对丰度有所下降（P>0.05）,对照组黄羽肉仔鸡回肠中以鸟乳杆菌、唾液乳杆菌、敏捷乳杆菌、果囊乳杆菌和罗伊氏乳杆菌为主要的已知菌种,添加核桃青皮原粉及其提取物后鸟乳杆菌的丰度显著增加（P<0.05）,添加核桃青皮提取物后敏捷乳杆菌的丰度显著增加（P<0.05）。由此可见,在黄羽肉仔鸡饲粮中添加1%核桃青皮或其提取物不影响肠道形态结构和黏膜抗氧化能力,但肠道微生物多样性和物种丰富度提高,有益菌鸟乳杆菌和敏捷乳杆菌丰度增加。     

鸭疫里默氏菌感染对鸭肠道菌群结构的影响

试验旨在分析鸭疫里默氏菌（RA）感染不同时期鸭肠道菌群结构变化规律，探讨鸭疫里默氏菌对鸭肠道微生物的影响及引起鸭致病的可能机制。采用细菌16S V4-V5区扩增通用引物，扩增鸭疫里默氏菌未感染组（鸭疫里默氏菌感染0 d组），鸭疫里默氏菌感染后1、2、3、5、9和14 d的鸭直肠内容物样本DNA，将扩增得到的产物进行DNA建库后基于Ion S5^TMXL测序平台测序。测序得到的Raw Reads数据总量为4 710 688条序列，平均每个样本84 119条序列。共注释到数据库的操作分类单元（OTUs）数目为4 528。Alpha多样性分析结果表明，菌群多样性指数Shannon和Simpson在鸭疫里默氏菌感染组和未感染组间差异不显著（P>0.05），菌群丰富度指数Chao1、Ace、Observed-species和PD-whole-tree在鸭疫里默氏菌感染后0~5 d逐渐降低，从5~14 d又逐渐增加，尤其在鸭疫里默氏菌感染后3和5 d均显著低于未感染组（P<0.05）。Beta多样性分析表明，未感染组与6个时间点的感染组间菌群差异均显著（P<0.05），其中，未感染组与感染后3 d的物种差异最大，之后依次为感染后2、5、9、1和14 d。物种丰度聚类热图显示，在未感染组和不同时间感染组，物种丰度相对较高的微生物菌属均不同。在门水平，鸭疫里默氏菌感染组主要以厚壁菌门（Firmicutes）、unidentified-Bacteria、拟杆菌门（Bacteroidetes）、梭杆菌门（Fusobacteria）及变形菌门（Proteobacteria）为主；在属水平，Bacteroides在感染组和未感染组均为优势菌属，感染组中弯曲杆菌属（Campylobacter）和梭杆菌属（Fusobacterium）明显增加。本试验分析了鸭疫里默氏菌未感染组和感染不同时间组肠道菌群的差异，寻找到一些特征菌属，可为鸭疫里默氏菌的致病性研究提供理论依据。     

饲粮添加黄芪和葡聚糖硫酸钠盐刺激对羔羊后肠道发酵和微生物组成的影响

本试验旨在评估饲粮添加黄芪和葡聚糖硫酸钠盐（dextran sulfate sodium,DSS）刺激对羔羊后肠道发酵和微生物组成的影响。试验分为DSS刺激前和刺激后2个阶段。在第1阶段,选取36头42日龄健康、体重相近（5.2 kg±2.0 kg）的断奶湘东黑山羊,随机分配到对照组（CON,n=16;饲喂基础饲粮）和黄芪组（AP,n=20;饲喂基础饲粮＋10 g/（d·头）黄芪根粉）,饲喂36 d后（包括7 d预饲期）屠宰（除去第2阶段各组选取的6只羔羊外,剩余的均屠宰）,收集盲肠组织和食糜样品用以评估饲粮添加黄芪对羔羊后肠道发酵和微生物组成的影响;第2阶段,在试验第36天,从CON组和AP组中分别随机选取6只羔羊进行DSS刺激（4%体重剂量口服）,持续8 d后屠宰,收集盲肠组织和食糜样品用以评估羔羊后肠道发酵和微生物在DSS刺激后的变化情况。结果表明：①与CON组羔羊相比,AP组羔羊盲肠发酵参数及微生物组成均无显著差异（P>0.05）;②与DSS刺激前羔羊相比,DSS刺激后羔羊盲肠微生物发酵所产生乙酸含量降低,丁酸含量显著升高（P<0.05）;③与DSS刺激前羔羊相比,DSS刺激后羔羊盲肠黏附总细菌（total bacteria）和梭菌XIVa （Clostridium cluster XIVa）数量显著增加（P<0.05）,食糜中梭菌XIVa和乳酸杆菌（Lactobacillus）含量显著降低（P<0.05）;④16S rDNA测序结果显示,在门水平上,不同处理羔羊厚壁菌门（Firmicutes）和拟杆菌门（Bacteroidetes）占80%以上,其次是变形菌门（Proteobacteria）和软壁菌门（Tenericutes）;不同处理羔羊肠道微生物组成无显著差异（P>0.05）;⑤短链脂肪酸浓度与碳水化合物代谢菌之间存在显著相关性。上述结果表明,饲粮中添加黄芪根粉对羔羊盲肠微生物发酵能力和微生物组成无显著影响,DSS刺激会降低盲肠微生物发酵乙酸能力和有益微生物的数量,改变细菌在属水平相对丰度。     

禽流感病毒HA1蛋白的原核表达及其免疫原性的初步研究

从H9N2亚型禽流感病毒感染的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,RT-PCR克隆全长血凝素(Hemagglutinin,HA)基因,并进一步克隆HA的主要抗原区HA1基因.将HA1克隆到原核表达载体pGEXKG,与谷胱苷肽(GST)融合表达,表达的融合蛋白GST-HA1以包涵体形式存在.包涵体经变性、复性处理,Western blot分析表明,表达蛋白具有良好的免疫学活性.ELISA检测发现,GST-HA1只能与H9亚型禽流感病毒抗体发生反应,而与H5和H7亚型禽流感病毒抗体无交叉反应.进一步将纯化的融合蛋白与佐剂混合后免疫Balb/c小鼠,免疫小鼠体内产生了较高滴度的特异性抗体.制备的HA1蛋白特异性强,具有良好的免疫原性,为禽流感病毒的鉴别诊断和禽流感疫苗开发奠定了基础.