高乙酰乙酸诱导中性粒细胞胞外诱捕网的形成

中性粒细胞胞外诱捕网(NETs)是几年前才发现的一种重要的先天免疫防御机制,目前NETs的发生机制尚不清楚,但是当缺乏有效抗衡调节时,它又能损伤组织、引发自身免疫等疾病。本试验为了研究作为酮病奶牛高酮血症的主要成分之一的乙酰乙酸(ACAC)对NETs表达量的影响,体外添加不同浓度ACAC处理中性粒细胞,运用免疫荧光技术和激光共聚焦显微成像定性评价NETs的生成;采用PicoGreen~dsDNA染料定量检测细胞上清游离DNA和Western blot反映NETs生成量。结果显示,高ACAC组产生NETs的量显著高于对照组组(P0.05),表明高ACAC可以体外成功诱导中性粒细胞产生NETs。     

5种中药对猪霍乱沙门菌的抑菌作用

为研究黄连、黄芩、五倍子、黄柏和鱼腥草提取物对猪霍乱沙门菌的抑菌效果,采用超声波处理,乙醇回流,水浴加热的方法提取5种中药的有效成分,采用2倍稀释法分别测定提取物对猪霍乱沙门菌的最小抑菌质量浓度(mini-mum inhibitory concentration,MIC)和最小杀菌质量浓度(minimum bactericidal concentration,MBC),采用肉汤稀释棋盘法,测定提取物对猪霍乱沙门菌的联合抑菌效果。结果显示,黄连单独抑菌时的MIC值较其他中药的MIC值低,且与黄芩、五倍子联合用药时MIC值由7.81×103 mg/L降到3.91×103 mg/L。而黄芩与黄连、黄柏、五倍子、鱼腥草联合用药时MIC值均降低。黄芩与其他4种药联合用药后抑菌效果增强,且与五倍子联合用药时FICI值小于0.5表现为协同作用,并且2种药物的MIC降低明显。结果表明,黄连、黄芩、五倍子对猪霍乱沙门菌有较好的抑菌作用,黄连、黄芩、五倍子联用时,抑菌效果为协同或相加作用;黄芩与鱼腥草联用时抑菌效果为无关作用;黄柏与鱼腥草联用时抑菌效果也为无关作用。     

食源性病原菌激发固有免疫细胞胞外诱捕网的研究进展

固有免疫细胞在外源物质刺激后向细胞胞外环境释放由染色质DNA和多种胞内颗粒蛋白组成的纤维样网状物质,称为胞外诱捕网(extracellular traps,ETs).ETs是一种新型的宿主防御机制,能够捕获或杀灭病原菌,有效控制病原菌的扩散,从而使机体免受感染.大肠杆菌、沙门菌等食源性人兽共患病病原体引发的疾病是全球广...     

中性粒细胞胞外诱捕网与病原体的相互作用及其机制

中性粒细胞作为机体天然免疫系统的重要组成部分,发挥至关重要的防御病原体感染的作用。中性粒细胞发挥防御作用的机制之一是通过释放中性粒细胞胞外诱捕网（neutrophil extracellular traps,NETs）捕获并消灭病原体。然而有些病原体已进化出逃避NETs的机制,从而对机体造成持续损伤。此外,NETs的异常状态也会对机体造成一些损伤。近年来,NETs已成为中性粒细胞功能研究的热点,受到了国内外学者的广泛关注。有学者在禽的异嗜性粒细胞中也发现了类似NETs功能的网状结构,并将其命名为异嗜性粒细胞胞外诱捕网（heterophil extracellular traps,HETs）。作者主要对NETs抵御病原体入侵和病原体逃避NETs的机制并引起宿主致病等过程进行综述。     

猪霍乱沙门菌裂解性噬菌体的分离鉴定及生物学特性研究

以药敏试验筛选出的多重耐药猪霍乱沙门菌为宿主,经双层琼脂纯化法从健康猪粪便中获得裂解性噬菌体SP3383。电镜观察发现该噬菌体为长尾病毒科成员;酶切分析表明其基因组为大于47.4 kb的双链DNA,可被限制性内切酶Nco I和BamH I酶切;生物学特性研究表明SP3383对温度和酸碱环境耐受力较好;最佳感染复数为0.1,潜伏期约为30 min,爆发期约60 min,平均爆发量为48 PFU/cell。本研究可为应用噬菌体治疗耐药猪霍乱沙门菌感染提供参考。     

猪霍乱沙门菌菌蜕的制备及免疫保护力研究

为制备猪霍乱沙门菌菌蜕并研究其免疫保护力,本实验克隆噬菌体phiX174裂解基因E,与pBV220连接,构建温控溶菌表达载体,将该载体转入猪霍乱沙门菌TTB1中,制备菌蜕并对其裂解率、安全性以及对小鼠的免疫保护力进行了研究。结果显示：成果克隆了裂解基因E、片段大小274bp,构建了温控溶菌质粒载体pBVE,制备了猪霍乱沙门菌菌蜕,其裂解率最高为99.46%、经冻干灭活残余活菌,安全性试验检测证实其安全后,对小鼠进行了免疫保护试验,其保护率为70%、与弗氏佐剂灭活苗保护率相当、优于甲醛灭活苗。研究结果为猪霍乱沙门菌引发疾病的防治奠定了基础。     

沙门菌SptP调控巨噬细胞MAPK-CDK6-RB通路的初步分析

本研究旨在探讨沙门菌毒力因子SptP对猪巨噬细胞MAPK-CDK6-RB通路及外陷网(METs)形成的影响。首先比较Salmonella 13312(猪霍乱沙门菌)和Salmonella 14028(鼠伤寒沙门菌)、Salmonella 13314(亚利桑那沙门菌)诱导的METs水平的差异,然后生物信息学预测参与METs调控的沙门菌基因,最后采用ChIP和MALDI-TOF试验进行验证。结果表明,Salmonella 13312和Salmonella 14028诱导的METs水平显著低于Salmonella 13314(P<0.05),提示沙门菌基因可能通过某种途径调控METs释放的某些关键步骤。Domain—Domain相互作用生物信息学预测结合ChIP、MALDI-TOF试验验证表明沙门菌基因SptP参与了该过程,其作用的宿主靶分子可能为MAPK通路下游基因ABL1和CDK6,SptP可能通过调节ABL1和CDK6的去磷酸化而参与MAPK-CDK6-RB通路的调控,该通路可能与METs的生成有关。SptP-MAPK-CDK6-RB通路可能是沙门菌逃避宿主免疫系统的重要途径,该...     

迟缓爱德华氏菌胞外产物的细胞毒性和动物致病性

分析了２８株迟缓受德华氏菌（Ｅdwardwiella tarda,Ｅt）胞外产物（extracellular puodrcts,ＥＣＰ）的致病性。将Ｅt用覆有玻璃纸的ＴＳＡ培养,１８株（６９．２３％）的 ＥＣＰ使ＨＥp－２细胞产生病认,认圆,脱落。这种细胞毒作用能被ＡＴＣＣ１５９４７株的ＥＣＰ抗体作为探 针进行免疫转印分析,结果显示,不同来源的９株Ｅt的ＥＣＰ在 转印膜上出现３条共同蛋白条带,相对分子质量分别约１４４００、３２、３００、７９、     

减毒猪霍乱沙门菌C500作为基因疫苗运载体的研究现状

基因疫苗具有众多的优点,被誉为疫苗研究的第3次革命,但是在畜牧生产的使用中存在系列亟待解决的问题,其中关键的问题就是如何将基因疫苗表达质粒导入到动物机体免疫细胞,减毒胞内寄生菌的应用很好的解决这一问题.目前我国仔猪副伤寒弱毒活疫苗使用的基本都是C500株,以其作为猪群重要传染病基因疫苗运载体的应用研究具有重要临床应用价值,对猪霍乱沙门菌疫苗株C500作为基因疫苗运载体的研究现状予以概述.     

表达乳铁蛋白肽的猪源罗伊氏乳酸杆菌对断乳仔猪抗霍乱沙门菌感染的效果分析

旨在分析表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21作为饲用微生态制剂对仔猪促生长与抵抗猪霍乱沙门菌感染的作用。将该重组菌连续饲喂28日龄断乳仔猪21 d,并设立空菌组、对照组以及抗生素组。第21天时对断乳仔猪连续口服感染猪霍乱沙门菌3 d,并设置7 d的观察期;仔猪感染后采集试验组与对照组血清、肠黏液及肠组织。检测结果显示重组菌组仔猪平均日增重与免疫器官指数均显著提高（P<0.05）,料重比极显著降低（P<0.01）。感染猪霍乱沙门菌后,相对于对照组,重组菌组仔猪日增重提高,腹泻率降低;重组菌组仔猪血液中IgG以及肠黏液中IL-4、sIgA的量极显著提高（P<0.01）,IL-2、IL-12、IL-6的量显著降低（P<0.05）;重组菌组仔猪肠道紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-1的基因转录水平和TLR4、Myd88和MLCK的基因转录水平极显著提高（P<0.01）,仔猪肠道内猪霍乱沙门菌的数量极显著降低（P<0.01）;重组菌组与抗生素组无明显差异（P>0.05）。以上结果表明,表达牛乳铁蛋白肽的重组猪源罗伊氏乳酸杆菌pPG-LFCA-E/LR-CO21可以提高断乳仔猪的生长性能、促进肠道形态发育、增强肠道屏障功能,并且在一定程度上可以保护仔猪免受猪霍乱沙门菌的感染,表明重组菌作为微生态制剂替代断乳仔猪的饲用抗生素具有一定的应用前景。     

Evaluation of Salmonella enterica serovar Typhimurium and Choleraesuis slyA mutant strains for use in live attenuated oral vaccines

SlyA protein plays a key role in virulence in Salmonella enterica. In this study, we evaluated the ability of the slyA mutant strain of S. enterica serovar Choleraesuis (S. choleraesuis) to protect against swine salmonellosis. Using a murine model infected with S. enterica serovar Typhimurium (S. typhimurium), we showed that the Salmonella strain with a deletion of slyA could be used as a highly immunogenic, effective and safe vaccine in mice. Based on these data, a slyA mutant of S. enterica serovar Choleraesuis strain RF-1 was constructed, and the ability of this mutant to protect immunized pigs from S. choleraesuis infection was examined. As with the S. typhimurium slyA mutant, immunization of pigs with the S. choleraesuis slyA mutant strain provided significant protection against subsequent challenge by the wild-type RF-1. These results demonstrate that SlyA is a potential target in the development of a novel live attenuated vaccine against S. enterica.     

Detection of mutations in the gyrA gene and class I integron from quinolone-resistant Salmonella enterica serovar Choleraesuis isolates in Taiwan

The quinolone resistance-determining regions (QRDRs) of the gyrA gene of quinolone-resistant Salmonella enterica serovar Choleraesuis isolates were sequenced. Four types of point mutation, Ser-83-to-Phe (TCC→TTC), Ser-83-to-Tyr (TCC→TAC), Asp-87-to-Gly (GAC→GGC), and Asp-87-to-Asn (GAC→AAC), were found. PCR-RFLP and MAS-touch down PCR were performed on fifty swine clinical isolates of S. enterica serovar Choleraesuis (Nal^R) collected during 1997–2002. The analysis indicated seven isolates with point mutations in codon 83, 13 with point mutations in codon 87, and 30 with double mutations in both codons 83 and 87. The MICs of enrofloxacin of the isolates with a single mutation in codon 83 or 87 were <2 μg/ml, while the MICs of the isolates with double mutations in both codon 83 and 87 ranged from 2 to 64 μg/ml. A class I integron comprised of dhfr, orfF and aad2 was also identified in both human and swine S. enterica serovar Choleraesuis isolates. These results indicate that PCR-RFLP and MAS-touchdown PCR assays can be used for surveillance of gyrA gene mutations, which are important for fluoroquinolone resistance in Salmonella. Isolates with double mutations in gyrA codons 83 and 87 are the major type of quinolone-resistant Salmonella isolated from swine in Taiwan. A surveillance system may be applied to the swine industry to monitor the emergence of fluoroquinolone and/or multi-drug-resistant S. enterica serovar Choleraesuis in Taiwan.     

上海市零售禽肉制品和活禽中沙门氏菌血清型与耐药性研究

为掌握上海市沙门氏菌在农贸市场和超市禽肉制品和活禽中的污染状况、流行血清型和耐药情况,本试验从320份2012年采集的禽肉样本(240份)和活禽泄殖腔棉试子(80份)中共分离鉴定出沙门氏菌70株,阳性率为21.9%。血清型鉴定结果表明,共鉴定出11种不同的血清型,其中肠炎沙门氏菌占47.1%、印第安纳沙门氏菌占17.1%、鼠伤寒沙门氏菌和德尔卑沙门氏菌均占8.6%。通过纸片法对这70株沙门氏菌进行了16种常用抗菌药物的药敏试验,结果表明,沙门氏菌对奈啶酸耐药率最高,达75.7%,对磺胺异唑、链霉素和氨苄西林耐药率较高,分别为60.0%、60.0%和51.4%。除亚胺培南外,其他药物均有不同程度的耐药菌株。有40株(57.1%)沙门氏菌呈多重耐药表型,耐药性最强的菌株可以对14种抗菌药产生耐药性。本研究对沙门氏菌病的防控及指导临床合理用药具有重要的现实意义。     

广西畜禽产品中沙门氏菌血清型、耐药性及耐药基因调查

试验旨在了解广西部分地区畜禽产品中沙门氏菌血清型分布和耐药状况,以及β-内酰胺酶bla_TEM、bla_CTX-M基因和氟喹诺酮类抗生素耐药基因qnrA、oqxA、oqxB、aac（6'）-Ⅰ b-cr的流行情况。对沙门氏菌进行分离鉴定与血清型分型,采用K-B纸片法对其中随机挑选的80株分离株进行24种抗菌药物敏感性试验,并采用PCR方法进行耐药基因检测。结果显示,从零售生鲜畜禽肉中分离的176株沙门氏菌分属5个血清群,共26种血清型,主要优势血清群为B群60.23%（106/176）、E群18.75%（33/176）和C群15.91%（28/176）,主要优势血清型为德尔卑沙门氏菌35.23%（62/176）、鼠伤寒沙门氏菌11.93%（21/176）和伦敦沙门氏菌9.66%（17/176）。80株分离株对24种抗菌药物均产生不同程度的耐药,其中对复方新诺明、林可霉素、利福平的耐药率最高,均高于90.00%,对青霉素、氨苄西林、阿莫西林、强力霉素、头孢拉啶、头孢氨苄、头孢曲松、头孢他啶、头孢噻肟、阿奇霉素的耐药率介于50.00%~90.00%之间,对环丙沙星、氧氟沙星、氟苯尼考的耐药率小于10.00%;所有分离株均为多重耐药株,其中最少为2重耐药,最多为17重耐药,多重耐药性主要集中在10~16重耐药,共占总数的78.75%（63/80）。PCR结果显示,80株分离株各基因的检出率分别为：bla_TEM 98.75%（79/80）、bla_CTX-M 26.25%（21/80）、oqxA 26.25%（21/80）、oqxB 21.25%（17/80）、qnrA 16.25%（13/80）、aac（6'）-Ⅰb-cr 50.00%（40/80）。结果表明,广西畜禽产品源沙门氏菌血清型呈多样性分布,分离株的耐药情况严重,临床日益严重的耐药现象与耐药基因的普遍存在有很大的关系。     

合成绵羊抗菌肽NK-Lysin抗菌活性及其对雏鸡沙门氏菌攻毒的治疗效果研究

为了研究绵羊抗菌肽NK-Lysin主要活性区的生物学功能,试验设计并合成了3对功能区多肽片段,并利用径向扩散试验和最小抑菌浓度对其抗菌活性进行检测,分析了合成多肽对鸡血红细胞的毒性作用,筛选出抗菌效果最好的多肽对沙门氏菌攻毒的雏鸡进行治疗,检测其治疗效果。结果表明,合成多肽对大肠杆菌、沙门氏菌具有抑制活性,多肽片段长度、多肽C-端有无酰胺化及多肽内的二硫键是否成环对多肽的抗菌活性均有影响;筛选出的2个多肽在治疗雏鸡沙门氏菌攻毒的过程中能够明显降低死亡率,对雏鸡心脏、肝脏、肾脏的病理损伤也明显小于对照组。本研究结果为绵羊抗菌肽NK-Lysin作为候选抗菌药物的开发奠定了基础。     

细胞外基质蛋白mindin的原核表达及对日本血吸虫Sjc23抗原的免疫增强作用研究

根据GenBank中公布的鼠源spon2基因序列,合成全长基因片段,用BamH Ⅰ和Hin dⅢ双酶切后将目的片段插入表达载体pET-22b(+)中,构建pET-22b-mindin重组质粒,并转入大肠埃希菌BL21(DE3)后用IPTG进行诱导表达,产物经SDS-PAGE、Western blot进行检测.将表达蛋白...     

Antimicrobial Activity of Synthesized Sheep NK-Lysin Peptides and Its Treatment for Chicken Salmonella Challenge

In order to study the biological function of the main active region of sheep antimicrobial peptide NK-Lysin, three pairs of functional domain peptide fragments were designed and synthesized the antibacterial activity was detected by radial diffusion test and minimal inhibitory concentration. We analyzed the toxic effects of chicken red blood cells and screen the best peptides for treatment chicken challenged by Salmonella pullorum in this study. The rusults showed that synthesized peptides were inhibitory to Escherichia coli and Salmonella pullorum. Fragment length of peptides, C-terminal amidation and peptide inner loop were essential to antibacterial activity. Two of synthesized peptides were used to treat chichen challenged by Salmonella pullorum which obviously decreased the mortality of chicken. The pathological damage of heart,liver,kidney were less than that of control group. This study laid a foundation for the development of the sheep NK-Lysin peptides as candidate antimicrobial agents.