基因芯片技术及其在植物研究中的应用

基因芯片是一种高通量、快速、平行核酸序列测定及定量分析技术,它是将大量特定序列的核酸片段有序地固定在载体上作为探针与标记核酸分子进行杂交,检测杂交信号的强弱,进而判断样品中靶分子的组成及数量。本文主要综述了基因芯片技术的原理特点及其在植物上的应用。     

农药小分子化合物检测新方法被国际著名学术期刊Biosensors and Bioelectronics全文录用

<正>近日,江苏省农科院食品质量安全与检测研究所刘贤金研究团队与南昌大学-食品科学与技术国家重点实验室合作,利用SELEX技术建立了农药小分子化合物检测新方法。该研究工作利用SELEX技术获得对多个家族类农药小分子具有广谱识别作用的核酸适配体,利用DNA剪切与拼接技术改造获得了广谱性与特异性均提高的重组     

RPA技术及其在食品检测中的应用

重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification,RPA)是以T4噬菌体的核酸复制机制为基本原理,模仿细胞内的核酸复制机制的一种新兴恒温核酸扩增技术。在多种酶的辅助下,31℃~37℃下恒温20 min即可完成核酸的体外扩增。它具有反应快速、高敏感性、高特异性、低设备依赖性等传统体外核酸扩增技术所不具备的优点。利用RPA技术可以在简易实验设备甚至野外条件下实现对核酸的快速扩增,结合侧流层析试纸技术或荧光检测装置即可对扩增结果进行快速定性或定量检测。但是,RPA技术作为一门新兴技术,在研究方面的应用鲜有提及,尤其在国内。本综述了RPA技术的原理、使用条件、优缺点及其在食品安全检测方面的应用,旨在为该技术今后的深入研究和应用提供一定的参考。     

沙门氏菌乳胶凝集方法与常规方法的比较分析

以沙门氏菌乳胶凝集试剂盒为研究对象,通过与《GB 4789.4—2016食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》方法的比较,分析沙门氏菌乳胶凝集试剂盒在沙门氏菌检测中的作用及有效性评价。通过研究发现,沙门氏菌乳胶凝集试剂盒能够快速检测样品中的沙门氏菌,与《GB 4789.4—2016食品安全国家标准食品微生物学检验沙门氏菌检验》方法相比,缩短了检测时间。但沙门氏菌乳胶凝集试剂盒能检测大部分的沙门氏菌,对于有些沙门氏菌无法检测出,因此只能作为沙门氏菌检测的辅助方法。     

桑花叶萎缩类病毒滚环扩增检测技术体系的建立

为建立一种快速、灵敏、简单的检测类病毒的方法,以桑花叶萎缩类病毒为研究对象,根据其基因组设计了1条特异性连接环化的寡核苷酸链探针和2条PCR扩增检测引物,对收集到的6份桑花叶型萎缩类病毒样品进行了滚环扩增。结果所有样品的RCA扩增产物的核酸电泳,条带呈阶梯状分布,但大部分聚集于上样孔附近,与理论分析相符,表明该方法适用于桑花叶萎缩类病毒的快速检测。进一步利用人工合成的模拟DNA分子测试该检测方法的灵敏度,研究显示,利用RCA技术可以成功检测到10~3拷贝的模式DNA分子。     

沙门氏菌检测的研究进展

沙门氏菌是一种能引起人畜共患病的病原菌,由其引起的食物中毒事件屡居首位,在食品致病菌的检测中,沙门氏菌的检测尤为重要。沙门氏菌的传统检测方法耗时较长,虽然成本较低,但检测过程也比较复杂,影响事件的结果。近几年随着科学技术的发展及分子生物学的兴起,各种试剂盒和PCR技术用于沙门氏菌的检测,还包括荧光定量法、基因芯片技术等。对沙门氏菌的检测方法进行综述。     

转基因水稻PA110-15基于RPA等温扩增及DNA试纸条联检的品系特异性检测方法

水稻作为最重要的粮食作物之一,其转基因安全性一直受到各国政府和人民的广泛关注。为了保障和引导公众对转基因水稻的正确而全面的认识,转基因生物安全检测工作必不可少。在目前的转基因检测工作中,核酸扩增技术是最为常用的检测方法。PCR技术是最成熟、应用最广泛的一种核酸扩增技术。然而,PCR技术对温控条件的极度依赖性制约它在田间的现场快速检测。本研究以转基因水稻PA110-15为对象,建立了重组酶聚合酶等温扩增及DNA试纸条联检的品系特异性检测方法,减少了对专用仪器的依赖,为快速现场转基因检测提供了新的解决方案。     

基于二阶校正方法的牛乳中沙门氏菌快速检测

牛奶中富含丰富的营养物质,但其在生产、加工及运输过程中易受到病原微生物的污染。沙门氏菌是牛奶污染最常见的食源性病原菌,轻者会引起感染者腹痛、腹泻,重者引起生命危险,因此建立牛奶中沙门氏菌残留快速、高效检测方法尤为重要。三维荧光光谱检测具有灵敏度高、选择性强和快速无污染等优点。利用三维荧光光谱技术,结合基于交替三线性分解(ATLD)的二阶校正算法,对牛奶中沙门氏菌进行快速定量分析。当组分数确定为2时,ATLD获得的平均回收率为93.5%±2.3%,同时分析品质因子包括灵敏度(SEN)、选择性(SEL)、检出限(LOD)对ATLD算法进行性能评估。结果表明,ATLD算法可成功用于分析检测牛奶中的沙门氏菌,且方法简单,解析准确可靠。     

猪肉中沙门氏菌污染情况及检测方法进展

沙门氏菌作为引起食源性疾病的重要致病菌,在猪肉及猪肉制品中的污染率很高,因此肉类产品的质量安全成为社会关注的重大问题。快速准确地检测食物中的沙门氏菌是防止和控制沙门氏菌传播的重要手段。综述了沙门氏菌对猪肉的污染途径及沙门氏菌的几种检测方法,以引起人们对猪肉沙门氏菌污染和检测方法的关注。     

梨病毒病及无病毒化栽培概述

概述了中国梨的几种重要病毒病：梨环纹花叶病毒病(PRPMV)、梨脉黄病毒病(PVYV)、榅桲矮化病毒病(QSV)、苹果茎沟病毒病(ASGV)、梨石痘病毒病（PSPV）及其危害性,较全面地介绍了目前梨病毒病的几种检测方法。现在研究认为,以PCR技术和核酸分子杂交技术为基础的分子生物学方法结合较成熟的ELISA检测以及电镜观察能比较准确、快速地检测出中国梨的病毒病;热处理、茎尖培养、微体嫁接、化学制剂处理及其联合应用为梨病毒的脱毒提供了有效途径;并根据梨无毒苗的生长特点提出了梨无病毒化栽培的管理技术。     

梨病毒病及无病毒化栽培综述

概述了中国梨的几种重要病毒病:梨环纹花叶病毒病(PRPMV)、梨脉黄病毒病(PVYV)、榅桲矮化病毒病(QSV)、苹果茎沟病毒病(ASGV)、梨石痘病毒病(PSPV)及其危害性,较全面地介绍了目前梨病毒病的几种检测方法。现在研究认为,以PCR技术和核酸分子杂交技术为基础的分子生物学方法结合较成熟的ELISA检测以及电镜观察能比较准确、快速地检测出中国梨的病毒病;热处理、茎尖培养、微体嫁接、化学制剂处理及其联合应用为梨病毒的脱毒提供了有效途径;并根据梨无毒苗的生长特点提出了梨无病毒化栽培的管理技术。     

实时荧光定量PCR技术及其在水产上的应用

摘要：实时荧光定量PCR技术是在PCR技术基础上结合荧光染料发展起来的一种核酸定量技术,能快速、灵敏,并有效地对核酸进行定量检测,已被广泛应用于生命科学的各领域。本文就实时荧光定量PCR的检测原理、荧光染料,管家基因以及其在水产上的应用作一阐述。     

玉米种子纯度快速分子检测技术研究

种子纯度检测是产品质量检测的中心，检验种子纯度是促进农业发展和维护种业秩序的必经之路。随着信息化发展，种子纯度快速分子检测技术不断更新优化，如何使用现代化纯度快速分子检测技术验证玉米种子纯度是值得思考的问题。文章阐述了机器视觉技术、分子标记技术、DNA快速提取法，分析了玉米种子纯度快速分子检测技术应用方法，结合试验结果得出玉米种子纯度快速分子检测技术步骤以及梯度要求。     

食品鸡蛋及死胚蛋中沙门氏菌的检测

为了解我国食品鸡蛋和死胚蛋(毛蛋)中沙门氏菌的感染情况,分别对130颗食品蛋的蛋壳表面、蛋内容物以及70颗完整死胚蛋(毛蛋)和66颗破壳死胚蛋的肝、肠、卵黄囊进行了沙门氏菌的检测。结果表明,在所检测的130颗食品鸡蛋中蛋壳表面及蛋内容物细菌的检出率分别为76.92%和4.83%,其中沙门氏菌的检出率分别为0.76%和0;70颗完整毛蛋肝、肠、卵黄囊细菌的检出率分别为:47.1%,42.9%,48.6%,其中沙门氏菌的检出率为:4.29%,4.29%,1.42%;66颗破壳毛蛋中肝、肠、卵黄囊细菌的检测率分别为:83.3%,93.9%,84.8%,其中沙门氏菌的检出率为:19.7%,18.2%,16.7%。研究表明,我国市场上鸡蛋的沙门氏菌检出率较低,但为了防止蛋壳表面的细菌和沙门氏菌渗入蛋内容物而对人类的健康造成危害,有必要进行洁蛋加工。对于毛蛋中沙门氏菌的检测,发现破壳毛蛋沙门氏菌的检出率显著高于完整毛蛋。因此,蛋壳在防止沙门氏菌入侵的过程中起到了重要作用。此外,由于毛蛋中沙门氏菌的检出率较高,在鸡蛋生产过程中需要加强孵化场的环境控制以降低雏鸡感染沙门氏菌所造成的危害。     

定量PCR快速检测动物食品中沙门菌污染

摘 要： 沙门氏菌是动物性食品中的重要食源性致病菌,建立其快速检测方法对动物性食品的质量控制具有重要作用。本研究根据沙门氏菌16srDNA、 dT fermentation等基因或DNA功能区序列设计PCR引物, 通过比较3种不同的基因组DNA提取方法,提取待检样品总DNA, 进行多基因定量PCR检测。结果表明,该方法简单快速且灵敏度高,在动物食品中的检测灵敏度可达10 CFU/g,整个检测时间在10h 以内。说明本方法对检测动物中沙门氏菌具有特异性高且灵敏、快速等特点,适用于快速、准确地检测动物中沙门氏菌的需要。     

植物分子标记高通量快速检测技术的研究进展

分子标记是 DNA 水平遗传变异的直接反映,被广泛应用于分子育种、物种多样性分析及亲缘关系鉴定、杂种优势分析等研究。以高通量植物样本采集、高通量提取植物基因组 DNA 以及高通量快速检测技术这三大关键环节为主,全面梳理分子标记检测的完整流程,并深入剖析当前各个环节的现状与挑战。同时,对植物分子标记的高通量快速检测过程进行了归纳与展望,旨在为未来检测流程的优化与创新提供有力的理论支撑,推动相关技术的不断进步与完善。     

铁皮石斛灰霉病多菌灵高抗菌株的LAMP快速检测体系的建立

为了建立一种新型的能够快速、准确、高效地检测铁皮石斛灰霉病菌对多菌灵抗药性的检测技术,利用环介导的等温扩增技术(Loop-mediated isothermal amplification)通过对临安3个铁皮石斛基地的灰霉病菌进行抗性分析发现,本地铁皮石斛灰霉病菌对多菌灵表现出高水平抗药性的菌株编码β-微管蛋白的198位氨基酸由E(GAG)突变为V(GTG)。根据高抗菌株第198位密码子的突变位点设计了特异性检测引物,对高抗灰霉菌株E198V基因型进行分子检测。结果表明:使用钙黄绿素染料作为反应指示剂,在等温条件下(65℃)进行核酸扩增反应40 min后,以抗药性菌株DNA为模板的反应液呈阳性(变为亮绿色),而敏感菌株的为阴性(仍为橙色),灵敏度试验发现最低检测限为10 pg/μL,琼脂糖凝胶电泳结果与LAMP检测结果一致。该方法的建立为快速检测铁皮石斛灰霉病菌抗多菌灵菌株及科学合理的防治铁皮石斛灰霉病奠定了基础。     

果树病毒核酸检测技术研究进展

病毒的核酸检测技术发展非常迅速,主要有PCR技术、分子杂交技术、dsRNA技术、NASBA技术和基因芯片技术。综述了这些技术的原理、特点及其在果树病毒检测中的应用情况。基于PCR技术的检测方法是目前果树病毒检测的主要方法,许多果树病毒的PCR检测体系已经建立。NASBA技术也已开始用于果树病毒的检测。     

鸡蛋清洁前后蛋壳表面沙门氏菌污染检测

为了解使用鸡蛋清洁技术能否减少蛋壳表面沙门氏菌污染,取清洁前后的鸡蛋各60枚,分别置于保鲜袋中相互隔离。用无菌棉拭子采集蛋壳表面细菌,经前增菌和选择性增菌后,提取细菌DNA进行PCR检测。清洁后的鸡蛋表面未检出沙门氏菌,未清洁的鸡蛋表面检出沙门氏菌,进一步检测,均不是肠炎沙门氏菌和伤寒沙门氏菌。说明鸡蛋清洁技术可以有效减少蛋壳表面沙门氏菌污染。     

核酸检测在植物检疫性病害诊断中的应用

随着中国与世界各国动植物及其产品贸易的不断增加,加强出入境动植物有害生物的检疫,建立高效、灵敏、准确的检验技术,对保护我国农产品安全有着重要的意义.核酸检测技术(Nucleic Acid Testing)以DNA为检测对象,能够对生物进行快速精确的鉴定.它操作简单、成本低、效率高,在检验检疫领域有着广阔的应用前景.本文将对核酸检测在植物病害检验检疫领域中的应用进行综述.