碱解法快速提取菠菜基因组DNA方法的优化

为了优化碱解法提取菠菜基因组DNA的方法,并为大批量育种材料的分子标记筛选奠定基础,本试验以菠菜幼嫩叶片为试材,以PCR扩增效果为主要依据,研究NaOH浓度、水浴温度与方法、吐温20浓度对菠菜DNA提取质量的影响。结果表明：以0.4 mol/L NaOH为提取液研磨后沸水浴1 min提取的菠菜DNA的PCR扩增效果明显好于常温处理。样品不经研磨、可直接用PCR扩增仪99℃、4 min代替沸水浴加温并省去离心步骤,此时以0.4 mol/L NaOH+0.5%吐温20为提取液时PCR扩增效果最佳。提取DNA的A₂₆₀/A₂₃₀比值较高时PCR扩增效果较好,因此A₂₆₀/A₂₃₀比值是评价提取DNA质量的最优指标。本试验优化了碱解法简便快速提取菠菜DNA的技术规程,达到了理想的PCR扩增效果。     

普洱茶发酵样品细菌和真菌DNA同时提取方法研究

本研究的目的是建立提取普洱茶发酵样品中微生物DNA的方法。首先比较了3种发酵样品中菌体收集方法,其次改进了omega小量植物DNA提取试剂盒的提取方法,以DNA的纯度、提取率和细菌16S rDNA、真菌?-微管蛋白基因PCR扩增为指标,评价提取DNA质量。实验发现茶样（5 g）加Tween-NaCl缓冲液（50 mL）,静置30 min,超声波振荡10 min,离心（10 min,12000 r/min）的菌体收集方法和在omega小量植物DNA提取试剂盒中引入液氮研磨、溶菌酶和破壁酶联合裂解细胞的方法提取的DNA纯度好,可以分别扩增出细菌16SrDNA和真菌?-微管蛋白基因。建立了普洱茶发酵样品细菌和真菌DNA同时提取方法,为开展普洱茶固态发酵过程微生物多样性的分子生物学研究奠定了基础。     

玉米单株幼芽DNA快速提取新方法

为了攻克利用DNA指纹技术进行玉米种子纯度鉴定中存在的技术难关,对玉米单株幼芽DNA快速提取方法进行了研究,结果表明：利用新方法提取DNA,不用液氮、不用研磨、不用离心、不用沉淀,不用SDS、不用CTAB、不用氯仿,并且提取的DNA不降解、完全可以满足利用SSR分子标记进行DNA指纹分析的需要。一个人提取100株幼芽(1个检测样品)DNA只需30min左右,1d可以提取2000株幼芽(20个检测样品)的。DNA,为DNA指纹技术在玉米种子纯度及真伪快速鉴定中的广泛应用解决了关键性技术难题。     

低次烟叶中绿原酸与芸香苷提取工艺的研究

旨在获得合适的绿原酸与芸香苷提取工艺,提高低次烟叶的经济附加值。笔者采用单因素试验和响应面设计,高效液相色谱法检测提取量,选择乙醇浓度、料液比、提取时间、提取温度4个因素优化提取工艺。结果表明,绿原酸与芸香苷最佳提取工艺条件为：乙醇浓度67%,料液比1:16 (g:mL),提取温度61℃,提取时间150 min。此条件下,绿原酸与芸香苷理论提取量之和为43.59 mg/g,相对误差0.36%。使用Design-Expert 软件对4 个因素进行分析,其影响大小顺序依次为：乙醇浓度>提取时间>料液比>提取温度。本研究获得了从低次烟叶中提取绿原酸与芸香苷的工艺条件,为更好利用低次烟叶提供了新思路。     

焙烤预处理对光皮树籽油水代法提取工艺的影响

以焙烤预处理条件作为主要因素,对水代法制取光皮树籽油工艺进行研究。在单因素试验的基础上,通过正交试验探讨焙烤预处理条件对水代法制取光皮树籽油提取率的影响。确定以焙烤条件为主要因素的水代法提取光皮树籽油的最佳工艺条件为液料比5∶1,焙烤温度170℃,焙烤时间30 min和提取时间150 min。在此优化条件下,光皮树籽油提取率可达17.65%。     

甜菜细胞质雄性不育系与其保持系线粒体DNA的RAPD分析

本文对甜菜线粒体DNA的提取方法进行了改进,在不需密度梯度离心条件下即可获得高纯度的DNA。优化了甜菜线粒体的RAPD的反应条件,对细胞质雄性不育甜菜的不育系及其保持系的线粒体DNA(mtDNA)进行了RAPD(随机扩增多态DNA,randomly amplified polymorphic DNA)分析,结果表明：甜菜细胞质雄性不育系和保持系线粒体DNA之间存在丰富的多态性。     

芝麻高纯度线粒体DNA提取技术研究

以2个芝麻品种黄化苗为试验材料,通过比较植物线粒体DNA(mtDNA)提取过程中的关键影响因素DNase处理时间,建立了一种经济、快速、高效的芝麻mtDNA提取方法.该方法分别通过匀浆化处理、2 400 g离心15min结合12 000 g离心12 min的差速离心方法分离获得粗制线粒体,再经过DNase酶切处理1.5...     

甜菜细胞质雄性不育系及保持系叶绿体DNA的RAPD分析

对细胞质雄性不育甜菜的不育系及其保持系的叶绿体DNA(ctDNA)进行了RAPD分析,结果表明：在所选的70个引物中,甜菜细胞质雄性不育系和保持系叶绿体DNA之间不存在差异性。与此同时,对叶绿体DNA的提取方法进行了改进,在不需密度梯度离心条件下即可获得高纯度的DNA;优化了甜菜叶绿体的RAPD的反应条件。     

烤烟烘烤中烟叶淀粉降解的研究进展

综述了烤烟烘烤中烟叶淀粉降解对烟叶品质的影响、降解的生化过程及影响降解程度与速率的因素。烘烤中,烟叶淀粉的降解程度和产物均影响烟叶品质,降解是在多种酶的催化下以水解和磷酸解2种方式实现的。影响烟叶淀粉降解的内部因素为烟叶淀粉粒属性、烟叶成熟度、烟叶微生物等,外部因素为烘烤设备及其参数、人工添加酶和微生物制剂等。可为烤烟烘烤工艺的优化、烘烤中促进烟叶淀粉降解措施的制定提供参考。     

肉牛血红素提取工艺的研究

肉牛血红素的提取的三种方法，即醋酸钠法、鞣酸法、蒸馏法，进行了比较，通过对比得出鞣酸法较好。对鞣酸法的提取条件分别进行了单因素试验和正交试验。结果表明，鞣酸法提取血红素的最佳工艺条件：离心转速为3000r/min，离心时间为15min，加水量为1倍，鞣酸用量为5%。     

皱边石杉内生真菌DNA快速有效提取的研究

为了选择一种省时省力、简单有效的皱边石杉内生真菌菌丝体总DNA提取方法,采用氯化苄法提取其总DNA,对比研究石英砂研磨与超声波振荡2种破壁方式对其DNA的提取效能。结果表明,采用石英砂研磨法提取的DNA,其点样孔附近残余杂质较多、拖尾现象严重;超声波破壁法提取的DNA质量总体较好,DNA条带在23.1 kb处集中,多糖、蛋白质等杂质污染少,拖尾现象轻微。比较而言,超声波破壁法可快捷、高效提取皱边石杉内生真菌菌丝体DNA,适于植物内生真菌DNA大规模快速提取,尤其对质地坚硬的菌落较石英砂研磨更有效。提取的DNA经琼脂糖凝胶电泳、ITS序列扩增,表明超声波破壁法提取的DNA与石英砂研磨法一样,均可获得良好的PCR扩增结果。     

木耳菜果实红色素的提取工艺研究

以木耳菜果实为原料,对其红色素的提取工艺条件进行了优化:将原料清洗后,用压滤机榨汁,以3倍的纯水将滤渣于常温下浸提2次,每次30min,浸提液与滤液一起经高速离心后过滤,再在温度50℃以下真空浓缩,经冻干后得暗红色色素粉末。实验条件下的色素干粉最高得率为3.72%。     

正交试验法优化提取油茶籽饼粕多糖工艺

优化油茶籽饼粕多糖酶水解与传统热水浸提相结合的提取工艺,提高油茶籽饼粕多糖的得率。以油茶籽饼粕为考查对象,对提取温度、提取时间、料液比3种提取工艺条件进行单因素试验,并在此基础上进行三因素三水平的正交试验,以优化提取的工艺参数。结果显示,最优的提取油茶籽饼粕多糖的工艺条件为提取温度80℃,料液比1∶20(g∶m L),提取时间30 min,在此条件下油茶籽饼粕粗多糖的平均得率为18.5%。此优化提取工艺具有合理性、可操作性,且提取效率高,是一种高效提取油茶籽饼粕多糖的方法。     

基于TksGlfex DNA聚合酶SSR扩增的棉花DNA一步提取法

DNA提取是SSR-PCR检测的前提,但因棉花中富含多酚、多糖和蛋白质等干扰物质,使得提取棉花DNA较其他植物困难,这也导致棉花分子辅助育种明显滞后。本研究探索出适用于SSR技术的一步快速提取棉花DNA的方法。该方法 DNA提取液成份包括0.1 mol/L Na OH、0.7 mmol/L NaCl、20 mmol/Lβ-巯基乙醇、2%SDS和2%PVP。该方法的具体步骤是:将液氮下研磨成粉状的棉花幼嫩叶片,放入含0.5 m L DNA提取液的离心管中。热裂解后加入盐酸离心,取上清,直接用于SSR-PCR扩增。将该方法提取的DNA片段较大,质量较好,能很好地用于TksGlfex DNA聚合酶的SSR-PCR扩增,扩增电泳条带清晰。此棉花DNA提取操作简单、高效,相比传统的棉花DNA提取而言,显著地节约DNA提取时间。     

紫色甘薯花青素的提取工艺研究

对超声波辅助提取紫色甘薯花青素的工艺条件进行了研究,以花青素的提取率为评价指标,在单因素试验的基础上,利用响应面法对提取工艺条件进行优化。在分析了各因素的显著性和交互作用后,得出超声波辅助提取紫色甘薯花青素的最佳提取工艺:提取时间40 min,提取温度75℃,液料比10∶1,在此条件下,所得花青素提取率为1.70%。     

基于响应面优化大麦若叶粉中总黄酮超声波提取工艺研究

利用单因素试验研究提取温度(35,45,55,65,75℃)、提取时间(30,40,50,60,70 min)、乙醇浸泡时间(30,60,90,120,150 min)、乙醇体积分数(55%,65%,75%,85%,95%)、料液比(1∶10,1∶15,1∶20,1∶25,1∶30)对提取大麦若叶粉总黄酮的影响。根据单因素试验结果,综合考虑实际条件及能源消耗,最终选取提取温度(55,65,75℃)、提取时间(30,40,50 min)、乙醇浸泡时间(60,90,120 min)为自变量,以总黄酮提取量为响应值,设计三因素三水平的响应面试验方法。结果表明,大麦若叶粉总黄酮的最佳超声波提取工艺条件为超声波提取温度75℃,超声波提取时间45 min,乙醇浸泡时间60 min。在响应面优化得到的最佳条件下对大麦若叶粉进行3次超声波辅助提取的平行试验,得到大麦若叶粉总黄酮提取量的平均值为4.39 mg/g,与理论最优值4.40 mg/g基本一致。响应面试验分析结果表明,优化的工艺条件稳定可行,可以为大麦若叶粉总黄酮的提取提供一定的参考依据。     

植物基因组DNA提取试剂盒提取玉米基因组DNA的条件优化

利用DNA提取试剂盒提取玉米基因组DNA,对其操作步骤进行改良优化,从而获得一种快速、简便的提取玉米基因组DNA的方法。在原试剂盒的操作步骤基础上,对实验材料用量、是否加入β-巯基乙醇、裂解时间、洗脱液用量等条件进行了优化,并使用两对引物所提取到的基因组DNA进行扩增,根据扩增效果确定DNA质量。优化后的方法可以在保证基因组DNA质量的前提下节省实验试剂和操作时间。     

Plackett-Burman联用响应面法优化酶法-超声波提取葛根中葛根素工艺

为优化酶法-超声波提取葛根中葛根素的工艺条件,以单因素试验为基础,采用Plackett-Burman试验得出液料比、乙醇体积分数、超声时间、超声温度为葛根素提取的4个影响显著的因素;利用最陡爬坡试验,使结果接近最大响应值;最后运用Box-Behnken试验对葛根素提取工艺进行响应面优化。结果表明,葛根中葛根素提取的最佳工艺条件为:纤维素酶添加量0.4%,酶解时间70 min,液料比30∶1(mL/g),乙醇体积分数52%,超声时间31 min,超声温度64℃;在此工艺条件下葛根素得率为8.78 mg/g。以上结果说明,Plackett-Burman试验联合Box-Behnken分析能较好地优化酶法-超声波提取葛根中葛根素的工艺条件。     

响应面法优化小麦面粉水溶性阿拉伯木聚糖提取条件

为了提高小麦面粉水溶性阿拉伯木聚糖的提取率,以小麦面粉为原料,探讨提取温度、提取时间和和料液比对小麦面粉中水溶性阿拉伯木聚糖提取率的影响。在单因素实验的基础上选取实验因素和水平,采用三因素三水平的响应面分析方法,分析各个因素及其交互作用对阿拉伯木聚糖提取率的影响,并对提取条件进行优化。所得最佳提取条件为：提取温度46℃,提取时间103 min,料液比1:9,在此条件下,阿拉伯木聚糖提取率为0.689%。     

响应面法优化超声辅助提取蓝靛果多糖的工艺研究

为优化超声辅助提取蓝靛果多糖的工艺,提高蓝靛果多糖得率,以干燥后的蓝靛果为原料,以热水浸提法为基础,在单因素试验的基础上,利用Design-Expert软件进行三因素响应面设计,探究超声辅助提取蓝靛果多糖的最佳工艺条件。单因素试验选取超声时间、超声温度和超声功率3个因素进行研究,并设计三因素的响应面试验。结果表明,单因素试验中的最佳条件为超声时间60 min,超声温度40℃,超声功率175 W;通过响应面法得到的最终提取工艺为超声时间67 min,超声温度41℃,超声功率175 W,在此条件下蓝靛果多糖得率为24.324%,与预测值相近,表明响应面法优化的提取条件可行。