梅花鹿体外胚胎生产关键技术研究进展

随着梅花鹿产业的发展,体外胚胎生产已成所需。为进一步了解该繁殖技术,文章从体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)和体外培养(IVC)三方面综述梅花鹿体外胚胎生产现状,以供相关研究借鉴。     

不同培养体系对延边黄牛胚胎体外发育的影响

近年来,随着卵母细胞体外成熟(IVM)、体外受精(IVF)以及细胞核移植技术的发展,胚胎体外培养(IVC)的方法也不断完善,使胚胎体外生产(IVP)成为可能。IVC体系的建立不仅是胚胎工程发展最基本的条件之一,而且有助于研究早期胚胎的发生、合     

线虫的体外培养

寄生虫的体外培养(The cultivation of parasites in vitre)即指人工模拟宿主体内环境条件从而使虫体在离体(离宿主)状况下完成其寄生阶段的生长发育。体外培养是一重要的寄生虫学研究方法,尤其在以下几个方面具有独特的意义     

动物精原干细胞体外培养研究进展北大核心

精原干细胞(SSCs)作为成体干细胞之一,可将遗传信息向子代传递,在雄性动物的精子发生过程中起到至关重要的作用。根据SSCs的生物学特征并通过有效的细胞分离手段将睾丸中的SSCs进行分离,进一步纯化并体外培养,才能更加深入地研究其相关机制。随着测序技术及基因编辑技术的发展和成熟,对于SSCs的研究手段和应用范围也在不断扩展。因此,文章主要对SSCs的生物学特征、鉴定、分离、纯化、体外培养以及与SSCs研究中联合使用的新技术进行了总结,以期为SSCs体外培养方法选择及其相关研究提供参考。     

IGF-1和EGF对辽宁绒山羊初级毛囊体外培养的影响

为研究不同剂量的IGF-1和EGF对辽宁绒山羊毛囊体外生长及毛囊形态的影响,采用显微分离法分离绒山羊初级毛囊,分别测定不同浓度IGF-1(0.1、1、10和100 ng/mL)、不同浓度EGF(0.2、2、20和100 ng/mL)、联合添加IGF-1和EGF(分别添加10 ng/mL和20 ng/mL)对毛囊生长和形态变化的影响.结果表明,IGF-1和EGF对毛囊体外生长均具有正向调节作用,作用大小与剂量有关,最适宜浓度IGF-1为10 ng/mL;EGF为20 ng/mL.IGF-1(10ng/mL)和EGF(20 ng/mL)联合添加对毛囊生长促进作用优于单独添加.IGF-1刺激毛乳头和毛母质细胞分裂增殖;EGF促进毛囊外根鞘细胞分化;联合添加刺激毛球部增大.     

不同培养条件对牛卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场采集的牛卵巢,研究了培养时间和不同激素组合对卵母细胞体外成熟的影响,结果表明:在成熟培养液中添加10μg/mLFSH、1μg/mLE_2的Ⅰ组(成熟率77.78%、卵裂率64.37%)和同时添加10μg/mLFSH、10μg/ mLLH、1μg/mLE_2的Ⅱ组(成熟率82.76%、卵裂率67.26%)与对照组(成熟率45.46%、卵裂率52.29%)相比,卵母细胞成熟率和卵裂率差异极显著(P<0.01),Ⅰ、Ⅱ两组之间,卵母细胞抽检成熟率、卵裂率虽无显著差异(P>0.05),但Ⅱ组卵母细胞成熟率、卵裂率分别比Ⅰ组提高了5.02%和2.89%。卵母细胞培养<20h、20h、24h、28h,成熟率分别为53.33%、77.77%、78.57%和71.43%,卵母细胞成熟率20h、24h、28h组与<20h组相比差异显著(P<0.05)。卵裂率20h、24h组(51.79%、58.16%)明显高于<20h组(38.24%)、28h组(36.98%)(P<0.05),但20h、24h组卵裂率差异不显著(P>0.05)。     

不同培养条件对牛卵母细胞体外成熟的影响

利用屠宰场采集的牛卵巢,研究了培养时间和不同激素组合对卵母细胞体外成熟的影响,结果表明:在成熟培养液中添加10 μg/mL FSH、1 μg/mL E2的Ⅰ组(成熟率77.78%、卵裂率64.37%)和同时添加10 μg/mL FSH、10 μg/mL LH、1 μg/mL E2的Ⅱ组(成熟率82.76%、卵裂率67.26%)与对照组(成熟率45.46%、卵裂率52.29%)相比,卵母细胞成熟率和卵裂率差异极显著(P＜0.01),Ⅰ、Ⅱ两组之间,卵母细胞抽检成熟率、卵裂率虽无显著差异(P＞0.05),但Ⅱ组卵母细胞成熟率、卵裂率分别比Ⅰ组提高了5.02%和2.89%.卵母细胞培养＜20 h、20 h、24 h、28 h,成熟率分别为53.33%、77.77%、78.57%和71.43%,卵母细胞成熟率20 h、24 h、28 h组与＜20 h组相比差异显著(P＜0.05).卵裂率20 h、24 h组(51.79%、58.16%)显著高于＜20 h组(38.24%)、28 h组(36.98%)(P＜0.05),但20 h、24 h组卵裂率差异不显著(P＞0.05).     

添加月桂酸和亚麻酸对非动态人工瘤胃发酵、甲烷生成和微生物区系的影响

本研究比较了添加亚麻酸(C18:3)和月桂酸(C12)后对体外培养瘤胃发酵、甲烷生成和微生物区系变化的影响.采用压力读取系统(RPT)测定产气量,气相色谱仪测定甲烷产量,培养24 h后取培养液测定挥发性脂肪酸、氨态氮和pH,并用实时定量PCR技术测定瘤胃微生物区系.研究发现,添加该2种脂肪酸能极显著降低甲烷产量(P<0.01),对产气量、乙酸产量和pH也有抑制作用(P<0.01),同时极显著提高丙酸含量(P<0.01).与对照组相比C12和C18:3能显著降低氨态氮的含量(P<0.05).添加脂肪酸后瘤胃真菌、原虫和甲烷菌含量极显著低于对照组(P<0.01),并且C18:3的抑制作用强于C12(P<0.01).上述结果表明,亚麻酸对瘤胃发酵的改变程度、甲烷生成和微生物生长抑制作用强于月桂酸.     

牛的体外受精技术研究进展

本文阐述了体外受精技术在牛胚胎工程和育种研究中的意义,介绍了牛体外受精技术的研究历史和目前的研究进展,对牛IVF技术的技术指标现状及经济效益进行了评估,并就牛的体外受精技术当前研究存在的问题作了评述,对其前景做了展望。     

牛卵泡卵母细胞体外成熟的研究

研究了卵泡大小、卵泡液和卵丘细胞对牛卵泡卵母细胞体外成熟的影响。结果表明 :直径 2～ 6mm卵泡中的卵母细胞成熟率 ( 72 1%)最高 ,与直径小于 2mm( 5 8 4%)、6～ 8mm( 5 6 4%)及大于 8mm ( 3 5 0 %)卵泡中的卵母细胞组差异显著 ;成熟培养基中添加 10 %的新鲜牛卵泡液 (bFF)对牛卵母细胞的体外成熟有促进作用 ,但高浓度的bFF( 2 0 %、3 0 %)则抑制牛卵母细胞的体外成熟 ;卵丘 -卵母细胞复合体的质量影响卵母细胞的体外成熟 ,A、B、C三级卵母细胞成熟率分别为 86 1%、66 3 %、3 5 6%,卵裂率分别为 42 8%、3 1 9%、10 5 %,差异均显著 (P <0 0 5 )。     

猪卵巢卵母细胞的收集和体外成熟培养

实验对猪卵母细胞的采集和体外成熟培养(IVM)以及培养液进行研究。结果表明，在卵母细胞的采集过程中，机械破碎法平均每个卵巢所获得的A、B级细胞数(7.00，20.50)要显著多于抽吸法(1.48，2.73)(P＜0.05)。但抽吸法中平均每个卵巢所用的时间(1.05min)却显著少于机械破碎法(15.6min)(P＜0.05)。NCSU-23与TCM-199两种培养液对卵母细胞体外成熟率无显著差异(P＞0.05)。添加10μg／LrpGH比20μg／LrpGH更有利于卵母细胞的成熟(71.5％，45.5％)，两者差异显著(P＜0.05)。     

鹅胚胎体外培养的研究

以蛋重为 (12 4 .90± 0 .91) g(A组 )、(130 .30± 0 .99)g(B组 )、(134.5 6± 1.0 1) g(C组 )的豁鹅蛋壳作为代用蛋壳 ,将第 1次换壳后的鹅胚转移至其中进行孵化 ,记录孵化第 3～ 4 .5天和第 6 ,15 ,31天的活胚数 ,同时分析代用蛋壳大小对孵化效果的影响。结果表明 :在整个孵化过程中 ,C组代用蛋壳优于B组和A组 ,尤其在孵化中期 (第 6～ 15天 ) ,A组与C组对照差异显著 (P <0 .0 5 )。结果表明 ,在鹅胚体外操作中 ,第 2次换壳所用的代用蛋壳的大小以大于或等于(134.5 6± 1.0 1) g为宜。     

牛的体外受精技术研究进展

本文阐述了体外受精技术在牛胚胎工程和育种研究中的意义,介绍了牛体外受精技术的研究历史和目前的研究进展,对牛IVF技术的技术指标现状及经济效益进行了评估,并就牛的体外受精技术当前研究存在的问题作了评述,对其前景做了展望。     

β-激动剂对体外培养的瘤胃微生物活力的影响

β-激动剂在提高反刍动物饲料转化率和胴体瘦肉率等方面比对其它动物的作用更明显。为探讨其作用是否与瘤胃代谢有关 ,本实验研究了 β-激动剂对瘤胃微生物活力的影响。实验选用了3种 β-激动剂———盐酸肾上腺素、克伦特罗(Clenbuterol)和塞曼特罗(Cimaterol) ,各设5个不同剂量(0.125 ,0.250 ,0.500 ,1.000 ,2.000mg/kg) ,研究不同剂量的β-激动剂对体外培养的瘤胃微生物产气量、微生物蛋白含量、底物消失率的影响。结果表明 :产气量、微生物蛋白含量和底物消失率与 β-激动剂之间存在着显著的量效关系。盐酸肾上腺素在0.5mg/kg 时微生物蛋白浓度最高(0.0917mg/ml) ,底物消失率最大(37.79 %) ,气体累计产量最大(269.06ml)。克伦特罗在0.5mg/kg 时微生物蛋白浓度最高(0.1167mg/ml),底物消失率最大(39.63 %) ,气体累计产量最大(269.38ml)。塞曼特罗在0.5mg/kg时 ,微生物蛋白浓度最高(0.1125mg/ml) ,1mg/kg 时气体累计产量最大(265.39ml)。3种 β-激动剂都显著促进了瘤胃微生物体外培养的活力(对照组微生物蛋白浓度为0.087mg/ml,底物消失率31.53 %,气体累计产量209.3ml) ,其中克伦特罗的作用最显著。本实验提示瘤胃微生物细胞本身可能存在 β-受体。     

体外评估一种新型蛋白原料-麻疯树脱毒浓缩蛋白的营养价值

利用体外批次培养技术,评估了新型蛋白饲料原料麻疯树脱毒浓缩蛋白用作山羊蛋白饲料的可能性。试验设对照组及处理组,其中对照底物组成包括苜蓿、玉米、豆粕及棉粕(6∶2∶1∶1),各处理组中分别以麻疯树脱毒浓缩蛋白替代对照组日粮组成蛋白的25%(T1)、50%(T2)和75%(T3)。结果发现接种24 h后,与对照组相比,以麻疯树脱毒蛋白替代原日粮中的蛋白的处理组中累积产气量、干物质及有机物消失率、微生物蛋白产量、丙酸、丁酸浓度显著增高(P0.05),而乙丙比显著降低(P0.05),但对pH值、NH3-N、乙酸及TVFA浓度无显著影响(P0.05)。说明德国脱毒麻疯树种仁粕是一种优质的蛋白饲料,可以部分替代山羊日粮中的蛋白原料。但由于本研究采用体外批次培养技术,其测定结果与体内试验虽具有良好的相关性,但仍需要进行动物代谢和生长试验,才能最终确定该饲料产品的饲用价值。     

花生油对绵羊体外瘤胃发酵指标的影响

本研究采用体外批次培养技术,选择3只安装有永久性瘤胃瘘管的绵羊为瘤胃液供体,以微晶纤维素为培养底物,培养瓶中花生油的添加量分别为0、5、10、15 mg培和20 mg,每个水平做3个重复,在培养4、8、16、24、36 h和48 h各时间.占'测定培养液中pH值、氨氮(NH3-N)浓度、总挥发性脂肪酸(TVFA)浓度和48 h纤维素消失率,从而筛选花生油在体外培养中适宜的添加量.结果表明:随着花生油添加水平的逐渐增加,培养液中pH值呈上升趋势,NH3-N浓度、TVFA浓度和48 h纤维素消失率逐渐降低.本试验中,在不影响瘤胃发酵的情况下花生油的最适宜添加量为5 mg.     

牛卵巢卵母细胞体外培养成熟条件的建立

研究不同犊牛血清浓度、培养时间和不同类型血清对牛卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,添加体积分数为10%,15%和20%的FBS时,各组间卵母细胞成熟率差异不显著(p>0.05);培养时间为16h时卵母细胞成熟率与培养时间为20h和24h时的差异极显著(p<0.01),而培养时间为20h和24h时卵母细胞成熟率差异不显著(p>0.05);培养基添加OCS对卵母细胞成熟的影响效果与添加FBS的无显著差异(p>0.05),二者的卵母细胞的核成熟率均达到80%以上。     

手工克隆小鼠胚胎的研究

与传统克隆相比,手工克隆使用较为简单的仪器设备和技术操作即可生产克隆动物。小鼠作为模式实验动物在多领域得以应用。本研究中采用杂交胎鼠细胞系提供核供体细胞,在含细胞松弛素(Cytochalasin B,CB)和链蛋白酶(Pronase)及2%血清的M199 hepes缓冲液滴(CBMP)中消化透明带并切割去核,电融合后1 h,重构胚置于含Sr Cl2及CB(5μg/m L)的无钙体外培养液(Ca2+-free IVC)中激活6 h,体外培养液(IVC)中清洗3遍后,移入WOW系统培养,培养至小鼠HMC囊胚阶段。研究发现:1)CBMP液中Pronase的浓度相比20μg/m L和100μg/m L,卵母细胞透明带在10μg/m L组需要更长时间消化至消失,较有利于操作;2)直流电(DC)80 V,持续40μs,融合率达60%。3)含10 mmol/L Sr Cl2的化学激活液处理的重构胚与5mmol/L组相比,囊胚更高(29±3%∶13±3%,P0.05),差异显著;4)两种体外培养液,CZB与m PZM,在IVC囊胚率上无显著差异(29±3%∶24±5%,P0.05),而使用CZB可获得较高的囊胚率。本实验首次采用HMC方法体外条件下生产小鼠克隆胚胎,通过摸索透明带消化时间、电激活参数、化学激活试剂及培养液,尝试小鼠体外生产克隆胚胎的新方法,并取得了初步成果,技术优化及效率提高问题仍需要更进一步的研究。     

牛卵母细胞体外成熟的培养体系及影响因素研究

目前牛卵母细胞体外成熟培养（IVM）技术体系已经建立起来，并在不断的探索与完善当中。国内外的研究热点主要集中在各种因素对体外生产步骤的影响上，尤其是对卵母细胞IVM和胚胎发育阻滞的研究，突破这些难点将有利弄清卵母细胞成熟的机理，促进胚胎操作技术和商业化胚胎IVP快速发展，在奶牛与肉牛的扩繁与母畜资源利用方面发挥巨大作用。本文将就现阶段牛卵母细胞体外成熟培养体系及影响因素的研究情况加以综述。     

牛卵母细胞体外成熟培养研究进展

作为胚胎生物工程技术研究的基础之一的牛卵母细胞体外成熟培养技术自上世纪30年代起至今,许多科学研究人员在牛卵母细胞体外生长、发育领域做了大量工作,对牛卵母细胞培养条件进行了广泛而深入地研究,并取得了较大的进展,目前牛卵母细胞体外成熟培养技术体系已建立,但在卵母细胞成熟机理、成熟调控方面尚存在许多尚未阐明的问题和一些亟待解决的问题。本文从卵母细胞的来源、卵母细胞体外培养条件、培养液的完善及卵母细胞成熟判定方法等方面详尽介绍了当前牛卵母细胞体外培养技术的研究进展。