猪传染性胸膜肺炎的实验分析

为了减少猪传染性胸膜肺炎给养猪业带来的经济损失,本试验对某猪场送检病料采取细菌分离、培养、镜检、PCR鉴定、动物试验和药敏试验等一系列措施,诊断该病料中的胸膜肺炎放线杆菌为该病的病原。药敏试验表明,头孢噻呋钠、磺胺嘧啶和恩诺沙星为治疗该病的首选药物,能够为规模化猪场传染性胸膜肺炎病的科学防控和合理用药提供科学参考。     

猪病治疗中的机体发热及其处理方法分析

猪的体温在猪病治疗和诊断中起着重要的作用。基于此,介绍了测量病猪体温的方法,深入分析了机体发热的生理作用,然后提出了注射和药物处理的治疗方案,期望能提高治疗的效果,减少病猪死亡率,减少农户的经济损失。     

猪胸膜肺炎放线杆菌环介导等温扩增检测方法的建立与应用

本文建立了敏感、特异的胸膜肺炎放线杆菌环介导等温扩增检测方法。以1型胸膜肺炎放线杆菌ApxIV基因片段为靶序列设计了一组引物,并建立了LAMP反应体系,在63℃等温条件下反应45min,最低能检测到102个拷贝的目的基因,敏感性是PCR方法的10倍。通过对1～10型胸膜肺炎放线杆菌、多杀巴氏杆菌、链球菌、支原体等18种病原微生物的检测,证明该法具有很强的种特异性。另外,通过对8头实验感染猪和127份临床发病猪的鼻拭子的检测发现,该法对鼻拭子中胸膜肺炎放线杆菌的检出率为100%,优于PCR方法。     

猪传染性胃肠炎预防和治疗的研究进展

目的研究猪传染性胃肠炎预防和治疗的进展。方法 2015年1月-2016年1月,以本罗平县罗雄街道某养殖场中养殖的猪中60头猪作为研究对象。按照随机原则分为观察组(全面防治)和对照组(普通防治)各组30头猪。1a后比较各组预防和治疗的效果。结果 1a后通过对效果的对照可知,观察组的猪传染性胃肠炎发病率比普通防治组的明显降低。结论全面防治的措施能提高猪群抗病能力,对养殖环境的改善,能有效提高对猪传染性胃肠炎的防治效率。     

猪蓝耳病的预防及治疗探讨

在猪养殖过程中,猪蓝耳病是一种十分普遍的病症,其特点是传染性较强、起病较急等,使猪的生长受到一定的抑制,进而导致猪的安全性及其质量受到很大的危害,最终造成猪饲养户的经济损失。基于此,结合猪蓝耳病病症的表现简要阐述猪蓝耳病,提出有针对性的措施实施预防工作,并且提出有针对性的治疗方法对病猪进行有效的治疗,希望能有效地控制猪蓝耳病的传播,确保猪只生长的安全性与健康性。     

山羊支原体山羊肺炎亚种SYBR GreenⅠqRT-PCR检测方法的建立

山羊支原体山羊肺炎亚种(Mycoplasma capricolum subsp.capripneumoniae,Mccp)是山羊传染性胸膜肺炎(contagious capri pleuropneumonia,CCPP)的病原。本研究根据GenBank公布的Mccp F38株(No.LN515398.1)arcD(MCCPF38_00114)基因序列设计1对特异性引物,建立了针对Mccp的SYBR GreenⅠ qRT-PCR方法。结果显示,该方法能特异性检测Mccp,与丝状支原体山羊亚种(Mycoplasma mycoides subsp.capri,Mmc)、副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,HPS)、绵羊肺炎支原体(Myplasma ovipenumoniae,Mo)、羊传染性脓疱毒(Orf virus,ORFV)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,SA)、多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)、大肠杆菌(Escherichia coli,Ec)等羊常见病原均无交叉反应,表明该方法具有良好的特异性;该方法的最低检测限为279 copies/μL,组内和组间变异系数均小于1%,说明该方法灵敏度高、重复性好。本研究建立的检测Mccp arcD基因的SYBR GreenⅠ qRT-PCR方法为CCPP的临床早期诊断及定量分析Mccp感染水平提供了更准确的方法。     

重组猪胸膜肺炎放线杆菌NLPI蛋白诱导小鼠抗攻击感染的免疫保护力研究

猪传染性胸膜肺炎(porcine contagious pleuropneumonia,PCP)是猪(Sus scrofa)的一种呼吸道疾病,影响世界养猪业,其病原菌为猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP),现有疫苗由于保护效果不甚理想,因此有必要寻找新的疫苗候选分子。本研究检测了猪APP重组NLPI蛋白(recombinant NLPI,rNLPI)的免疫保护作用。根据Gen Bank中已报道的APP nlpi基因序列设计引物对,然后以APP的基因组为模板PCR扩增nlpi基因,测序后进行生物信息学分析,发现该基因(Gen Bank No.:MH027649)由900 bp组成,编码1个含299个氨基酸的蛋白质,为一外膜脂蛋白,此外膜蛋白在多种APP血清型之间具有很高同源性。将nlpi基因亚克隆至p ET32a(+)载体,转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3),用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,IPTG)诱导表达APP rNLPI,并经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDSPAGE)和蛋白质印迹(Western blot,WB)确认。结果表明,在34 k D处有特异性条带,可被相应的阳性血清识别。动物保护实验采用BALB/c小鼠(Mus musculus)进行,酶联免疫吸附法(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)用于测定免疫球蛋G(immunoglobulin G,IgG)抗体滴度。结果表明,弗氏不完全佐剂+50μg rNLPI、弗氏不完全佐剂+30μg rNLPI、弗氏不完全佐剂+10μg rNLPI、30μg rNLPI免疫后,可诱导小鼠分别产生40%、20%、10%和20%的存活率;佐剂组和生理盐水对照组存活率为0。幸存小鼠慢慢恢复健康,并正常采食。可见,rNLPI皮下免疫可诱导小鼠产生免疫应答和较高的抗攻击感染的免疫保护力。该研究结果为进一步筛选猪传染性胸膜肺炎分子疫苗积累了基础资料。     

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxIV-ELISA鉴别诊断试剂盒的研制与应用

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae, APP)是一种严重危害世界养猪业的重要病原菌，至少有15种血清型，根据所有血清型菌株仅在感染猪体内产生外毒素ApxIV的特点，建立了一种能够区分感染猪与免疫猪的鉴别诊断方法ApxIV-ELISA。本研究将该诊断方法进一步研制成试剂盒，对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进行了测试，与间接血凝试验及IDEXX公司的CHEKIT-APP-APXIV试剂盒进行了对比研究，并用该试剂盒检测了来自中国、英国、丹麦、美国、加拿大和澳大利亚的临床猪血清1453份。结果表明ApxIV-ELISA试剂盒具有很高的特异性和敏感性，与CHEKIT-APP-APXIV试剂盒的检测符合率为91.37％；三批试剂盒的批内和批间的重复性良好（变异系数均<15%）；试剂盒在2～8℃保存9个月内稳定性良好；ApxIV-ELISA试剂盒能够有效区分APP感染猪与三价灭活疫苗或亚单位疫苗免疫猪。     

盐酸多西环素长效注射液与恩诺沙星治疗猪喘气病试验

观察盐酸多西环素长效注射液治疗猪喘气病的实际效果,探讨其临床应用价值。选取2012年01月至2014年1月猪喘气病病猪100例,按随机数字表法将其分成试验组50例,对照组50例,应用盐酸多西环素长效注射液治疗试验组,应用恩诺沙星治疗对照组,观察临床疗效。与对照组相比,试验组病猪喘气病的治疗效果更佳,试验组总有效率为92.0%,显著高于对照组的84.0%,组间差异有统计学意义(P0.05)。治疗后,试验组平均体重为(39.9±6.4)kg,日均增重为(605.9±106.5)g,均优于对照组(P0.05)。盐酸多西环素长效注射液治疗猪喘气病,效果显著,值得进一步应用、推广。     

实时荧光定量PCR检测胸膜肺炎放线杆菌方法的建立及应用

研究建立检测胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)的实时荧光定量PCR方法,并运用建立的检测方法对临床病料进行应用检测.根据GenBank报道的胸膜肺炎放线杆菌apxⅣA基因3'端391 bp核苷酸保守序列,设计1对特异引物扩增117 bp核苷酸片段,建立检测APP的实时荧光定量PCR方法和标准曲线,并利用该方法对收集肺脏组织和人工感染组织材料进行APP核酸定量检测.结果表明,构建的实时荧光定量PCR检测方法具有良好敏感性、特异性、重复性和临床应用性.该方法的建立为APP的临床高效诊断和APP感染的发生、发展和转归研究提供了一种有效手段.     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失毒素1激活基因C(ApxIC)同时嵌合副猪嗜血杆菌外膜蛋白P2基因(ompP2)复合突变株的构建

猪胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)以及副猪嗜血杆菌(Haemophilusparasuis,Hps)是引起猪发病的2种病菌。本研究以APP血清5型分离株(SW1)为基础材料,通过构建重组转移载体pBOSKΔIC-1和pBOSKΔIC/ompP2,构成卡那霉素抗性基因(Kanr)和枯草芽胞杆菌(Bacillussubtilis)的果聚蔗糖酶基因(sacB)的正负双向筛选表达盒,并筛选获得SW1株缺失毒素I的激活基因C(ApxIC),同时嵌合Hps外膜蛋白P2基因(ompP2)的复合突变株SW1ΔApxIC/ompP2。该突变株经鉴定,与SW1亲本株相比,其缺失了大小为475bp的apxIC基因,同时嵌合有大小为1107bp的Hps ompP2基因,其基本生长特性与亲本株(SW1)没有显著区别;同时在体外,连续传代10代之后缺失的apxIC基因不会发生回复突变,嵌入的ompP2基因仍能够稳定遗传。本研究成功构建了猪传染性胸膜肺炎放线杆菌缺失apxIC基因并嵌合有Hps ompP2基因复合突变株,为今后研究APP和Hps新型二联疫苗打下基础。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌毒素apxⅡA基因的真核表达及其核酸疫苗

利用PCR从自行分离鉴定的猪传染性胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneuromoniae,APP）血清7型菌株基因组DNA中扩增apxⅡA基因，构建了一个利用人类巨细胞病毒（Human cytomegalo virus，HCMV）启动子表达apxⅡA基因的真核表达质粒pCDapxⅡA，体外转染PK-15细胞，处理后的样品进行SDS-PAGE和Western blot分析，证实了免疫原性蛋白apxⅡA在细胞中表达。用表达质粒pCDapxⅡA作为核酸疫苗免疫BALB／c小鼠酶联免疫吸附试验，ELISA检测小鼠血清中特异性抗猪胸膜肺炎放线杆菌的抗体，结果第2次免疫后其抗体滴度都在1：128以上。初步证实，用apxⅡA作为核酸疫苗免疫动物可以激活机体产生免疫应答反应。     

猪霉形体肺炎细胞免疫的研究——病猪转移因子的作用和病猪细胞免疫动态的观察

从人工感染猪肺炎霉形体后的第二周起,病猪外周血 Ea 花环形成细胞的百分率比健康对照猪显著降低(P<0.01或P<0.05);Et 花环形成细胞百分率至感染后第五周才显著降低(P<0.05);病、健猪外周血白细胞总数无显著差异(P>0.05)。这些结果证实病猪的细胞免疫呈抑制状态。从人工感染后三周的病猪血白细胞提取转移因子(TF),给正常陆川猪腹腔注射1单位。24小时后,受体猪外周血 Ea 花环百分率比对照猪显著降低(P<0.05),而 Et 花环百分率、白细胞总数与对照猪相比,无显著差异(P>0.05)。TF 受体猪不但表现出与病猪类似的免疫状态,而且在人工感染强毒后死亡较少(1/3),死亡时间延长(6周),而对照组有6/7死亡,5周内死亡的占4/6。TF 受体猪表现出较强的抵抗力,从而证实了猪霉形体肺炎的细胞免疫与免疫保护力有关。     

新发PDCoV和TGEV双重RT-PCR检测方法的建立及初步应用

猪Delta冠状病毒(Porcine deltacoronavirus,PDCoV)是一种新发现的冠状病毒,临床上主要引起感染仔猪出现水样腹泻、呕吐和脱水等症状,和猪传染性胃肠炎病毒(Porcine transmissible gastroenteritis virus,TGEV)感染引起的临床症状极为类似,且临床上PDCoV和TGEV混合感染时有发生,单靠临床诊断很难区分两种疾病,因此建立同时检测且区分PDCoV和TGEV的检测方法具有重要的临床意义.本研究根据GenBank中收录的PDCoVN基因和TGEVN基因序列设计了2对引物,在同一反应体系中同时扩增PDCoV的N基因片段和TGEV的N基因片段,通过对RT-PCR反应条件的优化,建立了同时检测PDCoV和TGEV的双重RT-PCR方法,并对该方法进行了特异性、灵敏性和重复性研究.结果显示,所建立的双重RT-PCR对PDCoV和TGEV的最低检测量分别是3.14×102 copies/μL和3.68× 103 copies/μL,利用该双重RT-PCR方法对猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)、猪博卡病毒(Porcinebocavirus,PBoV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine respiratory and reproductive syndrome virus,PRRSV)和猪伪狂犬病毒(P.pseudorabiesvirus,PRV)的扩增结果均为阴性,显示出较好的特异性.为了解所建立的双重RT-PCR方法的临床应用效果,对252份临床样品进行了检测.结果表明,双重RT-PCR检出PDCoV阳性样品31份(阳性率为12.30％),TGEV阳性样品12份(阳性率为4.76％),同时感染PDCoV和TGEV的阳性样品2份(阳性率为0.79％),且检测结果与单一PDCoV和TGEV RT-PCR相符.因此,本研究所建立的双重RT-PCR方法可用于PDCoV和TGEV的临床检测,为进一步研究PDCoV和TGEV的临床鉴别诊断和流行病学调查提供了理论依据和技术支持.     

基于Wi-Fi无线感知技术的猪呼吸频率监测

监测和及时发现猪呼吸异常是养猪产业管理中的重要课题。为了克服人工监测方式效率低下、穿戴式设备监测方法成本较高且容易引起猪应激反应的缺点,该文提出了一种基于Wi-Fi网络信道状态信息的非接触式猪呼吸率监测方案。首先,利用Wi-Fi网络设备及其开源驱动程序捕获CSI序列信号并提出异常载波过滤算法用于滤除通信过程中的异常载波;其次,设计载波周期性水平量化指标并以此评估载波周期性水平;第三,通过SmoothingSplines方法平滑载波曲线并基于载波序列自相关函数估计载波周期和频率,筛选出载波周期性水平大于22且频率位于闭区间[0.127 Hz,1.25 Hz]的反映猪只呼吸行为的载波;第四,对符合条件的载波频率进行加权平均求得猪只呼吸率。以人工统计猪只每分钟的呼吸次数作为真实情况,通过对9头仔猪,5头育肥种猪,3头怀孕母猪以及3头因患病引起腹式呼吸的病猪进行对比试验,该文提出的方法能够准确计算出猪的呼吸率,平均相对误差为1.398%。研究结果为应用Wi-Fi无线感知技术监控动物呼吸率提供参考。     

中西医结合治疗猪喘气病的效果分析

猪喘气病是由猪肺炎支原体所引起的慢性呼吸道传染病。从近些年猪养殖的情况来看,猪容易患喘气病,这使猪身体健康受到威胁,影响养殖户的经济效益。为了避免此种情况长期发生,应当采用中西医结合治疗方法将病菌从猪体内清除,有效治疗此病,从而保证猪健康的生长。重点分析猪喘气病,进而探究猪喘气病的中西医结合治疗方案,希望可以为猪养殖户提供帮助。     

猪传染性胸膜肺炎放线杆菌转铁结合蛋白2基因克隆、序列分析及表达

参照猪传染性胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniac)血清5型菌株序列ZA6774设计1对特异性引物，用PCR方法扩增转铁结合蛋白2(Tbp2)基因，得到1条1624bp的片段，然后克隆到pMD18-T载体中，经测序比较，与参考序列的核苷酸同源性达99．8％，从T-载体中切下目的片段后，定向克隆到pET32a( )中，转化大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)，经诱导后，SDS-PAGE电泳，Tbp2高效表达，Western-blotting鉴定呈阳性。     

猪胸膜肺炎放线杆菌ApxⅣ-ELISA鉴别诊断试剂盒的研制与应用

胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)是一种严重危害世界养猪业的重要病原菌,至少有15种血清型,根据所有血清型菌株仅在感染猪体内产生外毒素ApxⅣ的特点,建立了一种能够区分感染猪与免疫猪的鉴别诊断方法ApxⅣ-ELISA。研究在反应条件方面加以优化,将该诊断方法进一步研制成试剂盒,对其特异性、敏感性、重复性和稳定性进行了测试,与间接血凝试验及IDEXX公司的CHEKIT-APP-APXⅣ试剂盒进行了对比研究,并用该试剂盒检测了来自中国、英国、丹麦、美国、加拿大、澳大利亚等国的临床猪血清1453份。结果表明,ApxⅣ-ELISA试剂盒具有很高的特异性和敏感性,与CHEKIT-APP-APXⅣ试剂盒的检测符合率为91.37%;3批试剂盒的批内和批间重复性良好(变异系数均<15%);试剂盒在2～8℃保存9个月内稳定性良好。所检种猪血样中,来自中国猪场1、中国猪场2、美国、加拿大、丹麦、澳大利亚和英国的ApxⅣ抗体阳性率分别为30.05%、70.69%、39.72%、0.64%、42.22%、1.85%和93.94%;所检我国2个规模化猪场的仔猪ApxIV抗体阳性率分别为21.77%和27.15%,育肥猪的阳性率分别为5.51%和11.07%。研究表明,ApxⅣ-ELISA试剂盒能够有效区分APP感染猪与三价灭活疫苗或亚单位疫苗免疫猪。     

多视角深度相机的猪体三维点云重构及体尺测量

对活体牲畜三维重构,数据采集方式、快速配准融合方法、表型体尺测量方法缺乏成熟有效的方案,导致目前活体牲畜的自动体尺测量技术难以在养殖场中推广应用。该文以猪为研究对象运用消费级深度相机KinectV2从正上方和左右两侧3个不同角度同步获取在采集通道中自由行走猪的局部点云。局部点云采用邻域曲率变化法去噪,并运用基于轮廓连贯性点云配准融合,最后采用多体尺数据精确估算技术测定包括体长、体高、胸宽、腹围等数据。该文分别对比实验室中模型猪由传输带以5种不同速率经过通道和养殖场内25头猪逐一经过通道,2种情况下采集数据进行各项体尺测算结果。其结果显示模型猪在传输带上以0、0.3、0.6、0.9和1.2 m/s等5种不同速率下测量体长、体高、胸宽、腹围值与实测值的平均相对误差分别为1.77%、1.36%、2.74%和2.17%。养殖环境下对25头猪同样4种体尺值与实测值的平均相对误差分别为2.56%,2.32%,3.89%和4.51%。试验结果发现养殖场活体猪测量最小误差可以达到实验室环境下的效果,但是最大相对误差变化较大,其原因在于养殖场中猪自由行走采集数据时行为姿态发生很大变化。     

基于脊腹线波动的猪呼吸急促症状视频分析

预警呼吸急促症状的病猪时,人工连续监控方式存在效率低下问题,为实现自动预警,通过机器视觉方法,捕获猪的脊腹线轮廓,证实自动计算的脊腹线起伏频数和人工计算频数强相关性。通过6个训练有素的人,对10头含有或无呼吸急促症状的猪打分（5分制）,并拍摄分辨率为320像素×240像素、猪自由站立在视频窗口中的侧视视频。在Matlab仿真平台,采用图像灰度化、背景减法、脊腹线段提取、脊腹线波动描述子计算后,自动捕获的波动频数和人工计算的相比较,所有测量值的平均相关系数为0.947,猪和视频窗口面积比在0.35～0.75之间时,脊腹线波动识别精度高于85%,且其波动频率与猪的人工呼吸急促症状估分值呈线性正相关。视觉技术用于呼吸急促的病猪预警有应用价值。