少量动物粪便细菌总DNA提取方法的研究

本研究首先采用棉签直接插入肛门法采集仔猪粪便样品,继而通过酚-氯仿抽提法、CTAB法和试剂盒法等3种方法提取样品中细菌总DNA。结果表明:UNIQ-10柱式细菌基因组DNA抽提试剂盒更适宜于提取少量动物粪便细菌总DNA及后续的分子生物学试验。     

瑞氏木霉基因组DNA提取方法比较研究

采用4种常规DNA提取方法提取瑞氏木霉基因组DNA。结果表明:EDTA-SDS法和冷冻研磨CTAB 法更适合此真菌DNA的提取,试剂盒提取的总DNA纯度和浓度比较高,但是价格昂贵,冷冻研磨SDS法提取的 DNA浓度不高,不适合分子生物学操作的要求。     

瑞氏木霉基因组DNA提取方法比较研究

采用4种常规DNA提取方法提取瑞氏木霉基因组DNA.结果表明EDTA-SDS法和冷冻研磨CTAB法更适合此真菌DNA的提取,试剂盒提取的总DNA纯度和浓度比较高,但是价格昂贵,冷冻研磨SDS法提取的DNA浓度不高,不适合分子生物学操作的要求.     

4种改良CTAB法提取石榴成熟叶片DNA的比较研究

【目的】研究从成熟石榴叶片中提取高质量基因组DNA的方法。【方法】根据成熟石榴叶片组织中富含多酚、多糖的特点,以峄城中国石榴种质资源圃20种石榴成熟叶片为材料,分别采用改良CTAB法(Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ)4种方法提取成熟石榴基因组DNA,通过琼脂糖凝胶、紫外分光光度计分析、ISSR扩增等方法检测所提取DNA的质量。【结果】改良的CTAB Ⅳ法能从各个石榴品种的成熟叶片中提取出基因组DNA,琼脂糖电泳胶孔干净,无拖带,且DNA的纯度和完整性都较好,OD260 nm/OD280 nm的比值均在1.8~2.0之间,无降解现象,其质量、产量都高于其他改良CTAB法。经ISSR- PCR扩增结果表明,此方法提取的基因组总DNA完全适于ISSR分析。其主要的步骤是：在石榴叶片的研磨中添加Vc、PVP等抗氧化物质,加入CTAB提取液后65 ℃水浴30 min后冷却至室温,离心条件为15℃,10 000 r/min,10 min,DNA粗提液用氯仿抽提3次,可获得高质量的DNA。【结论】改良的CTAB Ⅳ法能有效地从石榴成熟叶片中提取到高质量的基因组DNA。     

一种快速高效提取柑橘黄龙病植物样品DNA的方法

为快速获得高质量的柑橘黄龙病（HLB）植物样品DNA,本研究在传统CTAB法基础上,结合热萃取技术,建立了一种简便、快速提取HLB植物样品DNA的CTAB简化法。与Solarbio植物基因组DNA提取试剂盒和传统CTAB提取法相比,该方法所需时间短,1~2 h即可完成整个提取过程,获得的HLB植物样品DNA质量高、产量多。同时比较了三种方法制备模板时黄龙病病原菌和其他柑橘病原菌的PCR检出率,CTAB简化法和传统CTAB法检出率一致,试剂盒稍低,表明本研究建立的CTAB简化法可用于柑橘DNA病害PCR检测DNA模板的制备。本研究研发的HLB植物样品DNA提取方法优势明显,适用于大量病样的快速检测。     

山羊粪便总DNA提取方法的比较

本试验比较了从山羊粪便中提取总DNA的四种方法的优缺点,旨在为后续实验提供合适的提取方法。笔者首先采用PBS缓冲液过夜处理粪便标本,继而通过酚-氯仿抽提法、CTAB抽提法、天根试剂盒法和OMEGA试剂盒法提取样品总DNA。结果显示：酚-氯仿抽提法提取的DNA完整性不好,且纯度低;CTAB法提取的DNA浓度和纯度都较高,但完整性不好;试剂盒法提取方便,操作简单,时间短,但提取的浓度较低,其中天根试剂盒法提取的DNA纯度高,完整性好。综合考虑,天根试剂盒法是提取山羊粪便总DNA的最佳方法。     

从白羽王鸽的血液中提取基因组DNA方法的比较研究

禽类血液中的蛋白质含量较高,用传统方法提取其血液中的基因组DNA比较繁琐、纯度不高,而且提取的产物中有大量蛋白质残留。本研究采用改良的CTAB法从白羽王鸽全血中提取全基因组DNA,并以传统的酚-氯仿抽提的方法和TAKARA公司基因组提取试剂盒法作对照。结果表明：qCTAB法可以得到大量的、较完整的基因组DNA,并且纯度达到2．00,浓度达到了144．67ng/μL,完全可以满足PCR扩增限制酶切等实验的要求。     

两种桑树基因组DNA提取方法的比较研究

以8份广西桑树种质资源为材料,比较了改良的CTAB法和植物基因组DNA试剂盒法(离心柱)提取桑树基因组DNA的效果.结果表明:两种方法都能得到桑树样品清晰的DNA电泳条带,DNA纯度高,改良的CTAB法提取的DNA浓度在308.70μg/mL～384.30μg/mL之间,平均值是331.45μg/mL;植物基因组DNA...     

醉马草DNA提取方法的对比与优化

醉马草是一种多年生牧草,为禾本科芨芨草属,常用于机场草坪建植和草原生态恢复,因其重要的经济与生态价值近年来被广泛研究关注。醉马草幼苗含有的酚类、蛋白质等杂质严重影响DNA的提取质量,常规技术不能很好地满足高质量的实验要求。本实验以醉马草幼苗为材料,分别采用SDS、CTAB、高盐法提取醉马草幼苗全基因组DNA。研究发现使用SDS法提取的DNA浓度为176ng·μL-1,提取率为30%,A值为1.7。使用CTAB法提取的DNA浓度为140ng·μL-1,提取率为23%,A值为1.68。使用高盐法提取的DNA浓度为37.7ng·μL-1,提取率为6%,A值为1.1。利用CTAB对提取出的DNA进一步纯化,用琼脂糖凝胶电泳和超微量分光光度计检测DNA的浓度和纯度,通过PCR分析验证优化后CTAB法提取DNA的效果。结果表明各方法纯化后的DNA浓度为:SDS法(223ng·μL-1)﹥CTAB法(219ng·μL-1)﹥高盐法(77ng·μL-1); A值为:SDS法(1.8)CTAB法(1.77)﹥高盐法(1.4),其中DNA浓度较纯化前分别提高27.1%(SDS法)、57.1%(高盐法)、51.0%(CTAB法),且电泳图片显示DNA条带清晰明亮,无明显拖尾现象。因此,三种方法间使用SDS法提取DNA的效果最佳,且加入纯化步骤可进一步提高DNA提取质量。本研究旨在为醉马草的分子生物学研究提供技术支持与科学依据。     

乳房炎3种病原菌DNA提取方法比较研究

旨在比较3种DNA提取方法对山羊乳中致乳房炎主要病原菌DNA的提取效果及对PCR检测的影响。将不同浓度的金黄色葡萄球菌、无乳链球菌和大肠埃希氏菌加入羊乳中,并分别用硅胶膜试剂盒、酚/氯仿法和CTAB/NaCl法等3种方法提取总DNA,比较所获得DNA的浓度、纯度、所需时间和经济成本及对各病原特异性PCR检测的影响。结果显示,各方法均能成功地提取羊乳中致乳房炎的3种病原菌DNA;硅胶膜试剂盒和CTAB/NaCl法提取山羊乳中金黄色葡萄球菌和无乳链球菌DNA的效果相同且明显优于酚/氯仿法;3种方法提取山羊乳中大肠埃希氏菌的效果相同。CTAB/NaCl法具有提取效果好、耗时较短、成本低和方便的优点,是从羊乳中提取病原DNA的良好方法。研究结果为临床上山羊乳房炎病原菌的分子检测和流行病学调查提供了方法学上的参考。     

牛凝固血基因组DNA提取方法的比较及优化

为筛选出一种从牛凝固血中高效获得基因组DNA的方法,本研究选择64个凝固血样,分别进行匀浆破碎和手动剪碎的预处理,结合酚-氯仿抽提和试剂盒提取方法,提取基因组DNA,并选择抗凝血作为参照,对试验耗时、DNA数量和质量进行比较。结果表明:通过对牛凝血块进行匀浆破碎预处理,不仅缩短了蛋白酶K的消化时间,而且获得了高质量基因组DNA,浓度和纯度均达到抗凝血提取效果(P0.05)。酚-氯仿提取法相比试剂盒法,虽然得到更多量的DNA,但是DNA质量下降,而且试验耗时增加。本研究证实,匀浆破碎预处理后的牛凝固血样可以作为高质量基因组DNA的样本来源,并可替代抗凝血,解决生产中抗凝血不易获得和采集的问题。     

An optimized high quality male DNA extraction from spermatophores in open thelycum shrimp species

The crucial step of most of the current genetic studies is the extraction of DNA of sufficient quantity and quality. Several genomic DNA isolation methods have been described to successfully obtain male DNA from shrimp species. However, all current protocols require invasive handling methods with males for DNA isolation. Using Aristeus antennatus as a model we tested a reliable non‐invasive differential DNA extraction method to male DNA isolation from spermatophores attached to female thelycum. The present protocol provides high quality and quantity DNA for polymerase chain reaction amplification and male genotyping. This new approach could be useful to experimental shrimp culture to select sires with relevant genetic patterns for selective breeding programs. More importantly, it can be applied to identify the mating pairs and male structure in wild populations of species as A. antennatus, where males are often difficult to capture. Our method could be also valuable for biological studies on other spermatophore‐using species, such as myriapods, arachnids and insects.     

全血中DNA的5种不同提取方法比较研究

比较几种从血液中提取DNA方法所需要的时间、样本量、提取的DNA纯度、产量以及成本等。结果表明,几种方法所提取的DNA质量都能达到分子生物学的试验要求,但在DNA的纯度、产量、试验时间和价格等方面存在差别。实验人员可根据自己的实验要求、实验室以及经济条件等选择适当的方法。     

适于滞育期蚕卵的基因组DNA提取方法

家蚕以卵滞育,蚕卵保存时间长,取样方便,但是DNA含量较低,抽提较为困难,利用不多。从处于滞育期(丙2胚子前)的蚕卵中快速高效地获取基因组DNA,对于提高家蚕研究效率具有实用价值。本试验对两种SDS法和一种CTAB法的抽提效果进行比较,结果表明SDS-II提取效果较好,单粒蚕卵提取基因组DNA即可用作PCR模板,5粒蚕卵获得DNA可以基本满足分子生物学研究需要。     

蒙古马肠道细菌总DNA提取方法的比较

本试验采集蒙古马新鲜粪便样品,采用酚－氯仿抽提法和2种细菌基因组DNA提取试剂盒法进行样品中细菌基因组DNA的提取。通过DNA浓度和纯度的测定,并将其作为模板扩增细菌16S rDNA V3区特异性片段对提取效果进行比较,从而找出更适合蒙古马粪便中细菌基因组DNA的提取方法。结果显示,3种提取方法得到的基因组DNA均能用于PCR扩增的模板,其中B试剂盒法提取的DNA数量较多,且纯度高,更适合用于提取蒙古马肠道微生物细菌基因组DNA及后续的蒙古马肠道微生物多样性等分子生物学试验。     

绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的比较研究

本研究旨在比较5种DNA提取方法对绵羊血液中布氏杆菌DNA的提取效果及对PCR检测的影响。将不同浓度的疫苗株布氏杆菌加入绵羊全血中,采用3种DNA提取试剂盒和酚/氯仿法以及碘化钠法等5种方法提取模拟的绵羊血液样品中的DNA,评价所获得DNA的浓度、纯度和完整性,并采用布氏杆菌特异性PCR进行检测。同时,对各提取方法所需时间及经济成本进行了比较。结果表明,各方法均能提取获得绵羊全血中布氏杆菌DNA,3种试剂盒和碘化钠法获取布氏杆菌DNA的效果相同,而酚/氯仿法获取布氏杆菌DNA的效率最低或存在PCR抑制剂而不适合用于绵羊血液中布氏杆菌的PCR检测。碘化钠法具有耗时较短、成本低、方便的优点,是从绵羊血液中提取布氏杆菌DNA的良好方法。本研究结果为临床绵羊血液中布氏杆菌DNA提取方法的选择提供了参考。     

六种试剂盒提取血液基因组DNA效果比较

为筛选一种高效、快捷的血液基因组DNA提取试剂盒,采集24份新鲜西藏绵羊血液样本,选用6种市售商业化试剂盒（LifeFeng柱式试剂盒DK601和非柱式试剂盒DK602,康为世纪非柱式试剂盒CW0544和柱式试剂盒CW0546,上海生工非柱式试剂盒SK8224和柱式试剂盒SK8254）,比较所提DNA的浓度、纯度、得率以及对嗜吞噬细胞无形体16S rRNA进行巢式PCR扩增,综合评价不同试剂盒DNA提取效果.结果表明,应用LifeFeng柱式试剂盒DK601提取的DNA浓度和纯度均最高,得率较高,分别达到75.63 ng/μL、1.894（OD260/OD280）、18.91 ng/μL;且嗜吞噬细胞无形体16S rRNA基因的PCR扩增条带清晰度最优.因此,LifeFeng DK601可作为提取绵羊血液基因组DNA及嗜吞噬细胞无形体（Anaplasma phagocytophilum）病原鉴定的首选试剂盒.     

家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)染色体DNA的分离纯化

为了获取可供家蚕微孢子虫(Nosema bombycis)单染色体测序的基础材料,通过脉冲场凝胶电泳(PFGE)技术分离家蚕微孢子虫CQ1株系的染色体DNA,随后切取含有目的染色体DNA条带的琼脂糖胶块,分别利用电洗脱法、柱式胶回收试剂盒法及玻璃奶胶回收试剂盒法进行染色体DNA的分离纯化实验。结果显示3种方法均能回收到目的染色体DNA,但分离纯化的效率和样品质量存在差异:电洗脱法对胶块中的DNA损失较大,回收的染色体DNA含量低,而柱式胶回收试剂盒回收的染色体DNA断裂严重,因此这2种方法获得的样品质量均达不到染色体建库测序的要求;通过优化后的玻璃奶胶回收试剂盒法获得的染色体DNA相对完整且污染较少,质量检验分析133μL样品中的DNA质量浓度为8.495 ng/μL(DNA总量1.13μg),达到后续构建染色体测序文库的要求。玻璃奶胶回收试剂盒法不仅适用于家蚕微孢子虫染色体DNA的分离纯化,也可供基因组较小的物种制备单染色体建库测序材料参考。     

超声辅助提取法对黄芩总黄酮含量的影响

为从不同超声条件中,筛选出黄芩总黄酮的最佳提取工艺。用超声波辅助技术提取黄芩总黄酮,用亚硝酸钠—硝酸铝比色法测定总黄酮含量。通过单因素和正交试验,确定了黄芩总黄酮的最佳提取工艺为乙醇浓度为50%,超声处理时间为25 min,料液比1∶25,超声处理温度为70 ℃。在该条件下,总黄酮提取量为15.15 mg/g。