胶束液相色谱法测定血清中安定的含量

安定(diazepam)是苯二氮卓类化合物，自1959年问世以来．其镇静、催眠等作用在医学临床上广为使用。但因其动物产品中有残留，影响人类身体健康．在食品动物饲养过程中禁止使用，因此动物血液中对安定检测显得尤为重要，其测定方法有RP-HPLC法、毛细管气相色谱法等。但测定血药浓度时均需要进行提取、分离等步骤，操作繁琐、费时，药物不易提取完全。本文采用胶束液相色谱法．即在不分离除去蛋白质的情况下．对血药进行测定。现报道如下：     

酵母细胞壁多糖提取纯化鉴定技术及其应用研究进展

酵母细胞壁多糖的主要活性成分是β-葡聚糖和甘露聚糖,在动物机体内与肠道受体竞争吸附病原菌以及在肠道降解提供能量,改善动物肠道环境;也会利用其结构与Fe~(2+)离子螯合抑制羟自由基的产生以及防止脂质过氧化连锁反应等,提高抗氧化能力;其特有的化学位点会通过多种分子间作用力吸附霉菌毒素;β-葡聚糖和甘露聚糖通过作用于巨噬细胞调节多种细胞因子,通过多个途径增强机体的特异性和非特异性免疫力。目前在养殖业中酵母细胞壁多糖可用于替代金霉素、硫酸黏杆菌素等抗生素控制鸡的坏死性肠炎、减少水产动物细菌感染、降低猪、牛等幼畜腹泻率、预防各种老化性疾病以及促进动物生长发育。对酵母细胞壁多糖现有的提取方法进行比较,提取酵母细胞壁β-葡聚糖,选用超声辅助酶解产率最高、效果最好;用低浓度的氢氧化钠(NaOH)溶液提取甘露聚糖以及酶碱法提取酵母细胞壁多糖效果最好。分离纯化技术包括有脱蛋白、脱色、单一多糖的分离,将其分离纯化效果分别比较,除去酵母细胞壁多糖中蛋白质的最佳方法是Sevage法;脱除色素的最佳方法是颗粒活性炭吸附法;单一多糖分离纯化采用DEAE-纤维素A52阴离子交换柱和Sephadex G-100柱联用的方法最佳。酵母细胞壁多糖结构鉴定一般采用高效液相色谱法(HPLC)测定多糖的单糖组成,高效凝胶渗透色谱测定多糖的均匀性和分子质量,傅立叶变换红外光谱(FT-IR)、气相色谱-质谱(GC-MS)和核磁共振(NMR)测定多糖的精细结构。文章通过对酵母细胞壁多糖的作用及应用、提取、分离纯化和鉴定技术进行阐述,为酵母细胞壁多糖作为抗生素替代品在畜牧业生产中的推广应用提供理论依据,为抗生素替代品的研发提供新的思路。     

HPLC法同时测定兽药粉剂中10种磺胺药及其增效剂含量

建立了高效液相色谱法(HPLC)同时测定分别以葡萄糖、淀粉等为辅料的兽药粉剂中10种磺胺药及其增效剂的含量。样品以流动相提取,用Aglient Eclipse XDB-C18 5μm(4.6 mm×250 mm)色谱柱进行分离,二极管阵列检测器检测,梯度洗脱测定10种磺胺药及其增效剂。回收率在70.68%～113.19%,相对偏差为0.10%～2.83%,最低检测限为10～20μg/kg。     

关于饲料微量成分研究进展的报告（下）

三、维生素A、D、E和K 多年来在饲料的脂溶性维生素分析上存在着技术困难。最新的气、液相色谱(GC)和高压液相色谱(HPLC)提高了测定这几种维生素的精确度和灵敏度。 1.维生素A和胡萝卜素维生素A存在于动物产品中,一般在类脂溶剂中提取后通过三氯化锑反应来测定。最近也有用荧光法和高压液相色谱法来测定的。植物样品的β-胡萝卜素通常先通过氧化铝或氧化镁的柱层析提取和纯化后用分光光度计测定。具生物活性的类胡萝卜素一般不测定。高压液相色谱比柱层析的分离度大,且可测定     

饲料中违禁药物安定的HPLC测定

安定（Ｄｉａｚｅｐａｍ）系国家控制的精神药品，具 有抗焦虑、镇静、催眠等药理活性。在动物饲养和 运输过程中使用，可降低动物的维持需要，减少途 中失重和死亡率。某些不法者受到利益驱使常在 饲料中添加使用，在动物组织中残留而导致畜产 品不安全，因此我国农业部严令禁止安定用于饲料。目前国内还没有对饲料中安定的检测方法， 建立对饲料中安定的快速、准确、可靠的测定方 法，打击违法使用安定已迫在眉睫。我们应用高 效液相色谱法分析饲料中的安定，采用液－液革 取结合固相浓缩、净化，外标法定量，具有回收率、 灵敏度高和稳定…     

高效液相色谱法同步测定甜叶菊提取物中7种绿原酸

为建立高效液相色谱法测定甜叶菊提取物中绿原酸、新绿原酸、隐绿原酸、洋蓟素、异绿原酸B、异绿原酸A、异绿原酸C7种绿原酸及其类似物的分析方法,本实验以超声提取法对样品进行前处理,以甲酸溶液-乙腈作为流动相,采用梯度淋洗和C18色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)进行各化合物分离.结果 显示:7种绿原酸及其类似物的...     

苯乙醇胺A被农业部列为饲料中违禁添加物

<正>近日,苯乙醇胺A(又称:克伦巴胺)已被农业部第1519号公告列为"禁止在饲料和动物饮水中使用的物质"。此前,还研制了《饲料中苯乙醇胺A的测定高效液相色谱-串联质谱法》和《饲料中苯乙醇胺A的测定高效液相色谱法》等检测方法标准,已分别由农业部1486号公告和四川省地方标准发布并实施。     

UPLC-PDA法测定蒲公英提取物中咖啡酸的含量

建立超高效液相色谱-二极管阵列检测法(UPLC-PDA法)测定蒲公英提取物中咖啡酸的含量。采用反相高效液相色谱法,用带有二极管阵列检测器的高效液相色谱仪(UPLC-PAD)对咖啡酸进行色谱分离和快速筛查。以ACQUITY UPLCTMHSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm)为分离柱,柱温:35℃;流动相体系:A项为乙腈,B项为0.4%磷酸水溶液,进行梯度洗脱;流速:0.35 m L/min;进样量:5μL;检测波长为323 nm。通过光谱图、保留时间及峰面积参数对咖啡酸进行定性定量检测。咖啡酸在1～100μg/m L的范围内线性良好(R2=0.999); 0.25μg/m L咖啡酸对照品溶液与空白溶液的信噪比3,为检出限,1μg/m L咖啡酸对照品溶液与空白溶液的信噪比10,为定量限,完全满足检测需求。该方法色谱分离较好,分析速度较快,前处理简单,适用于蒲公英提取物中咖啡酸的定性定量检测。     

Ⅰ群禽腺病毒血清4型QD株的分离与鉴定

为了对Ⅰ群禽腺病毒血清4型(FAdV-4)的毒株进行分离,试验采用病毒分离、DNA提取、PCR鉴定、Hexon基因序列分析、病毒毒价测定、病毒形态学观察及动物回归试验等方法对青岛地区疑似心包积水及包涵体肝炎病鸡的肝脏进行了研究。结果表明:该分离毒株提取的DNA经PCR鉴定为阳性;该分离毒株序列与已发表的Ⅰ群禽腺病毒4型序列同源性为97.7%,病毒毒价为1×10~8TCID_(50)/0.1 mL;病毒形态为球形、无囊膜、二十面体对称的粒子结构;在动物回归试验中,病死肉鸡心包有积液,发病鸡肝脏的中央静脉广泛淤血,肝细胞发生空泡样变性,细胞浆和细胞核内可见嗜碱性包涵体。说明该分离株为Ⅰ群禽腺病毒血清4型毒株。     

一株虹鳟源维氏气单胞菌的分离鉴定及组织病理学观察

为鉴定一起虹鳟突发疾病死亡的病原,本研究从自然发病虹鳟的内脏分离到一株致病菌WX153415,并对其进行了常规理化特性、分子生物学、人工感染试验和病理学观察以及药敏性检测。结果显示:分离株WX153415为革兰氏阴性短杆菌,其理化特性与维氏气单胞菌(A.veronii)特征相符,并且其16SrDNA基因、gyr B基因、毒力基因act、毒力基因aer和毒力基因aha序列与Gen Bank中A.veronii的同源性均可达98%以上,在系统进化树中与A.veronii聚为一族;动物回归试验结果表明,分离株LD_(50)为1.5×10~6 cfu/m L;病理学观察显示该分离株主要损伤虹鳟的鳃、肝和肾等重要器官组织,综合检测结果表明该分离株为致病性A.veronii。药敏试验结果显示,分离株对14种抗菌药物中头孢哌酮、哌拉西林、氟苯尼考和头孢呋辛药物敏感。     

酵母细胞壁多糖提取纯化鉴定技术及其应用研究进展

酵母细胞壁多糖的主要活性成分是β-葡聚糖和甘露聚糖,在动物机体内与肠道受体竞争吸附病原菌以及在肠道降解提供能量,改善动物肠道环境;也会利用其结构与Fe²⁺离子螯合抑制羟自由基的产生以及防止脂质过氧化连锁反应等,提高抗氧化能力;其特有的化学位点会通过多种分子间作用力吸附霉菌毒素;β-葡聚糖和甘露聚糖通过作用于巨噬细胞调节多种细胞因子,通过多个途径增强机体的特异性和非特异性免疫力。目前在养殖业中酵母细胞壁多糖可用于替代金霉素、硫酸黏杆菌素等抗生素控制鸡的坏死性肠炎、减少水产动物细菌感染、降低猪、牛等幼畜腹泻率、预防各种老化性疾病以及促进动物生长发育。对酵母细胞壁多糖现有的提取方法进行比较,提取酵母细胞壁β-葡聚糖,选用超声辅助酶解产率最高、效果最好;用低浓度的氢氧化钠（NaOH）溶液提取甘露聚糖以及酶碱法提取酵母细胞壁多糖效果最好。分离纯化技术包括有脱蛋白、脱色、单一多糖的分离,将其分离纯化效果分别比较,除去酵母细胞壁多糖中蛋白质的最佳方法是Sevage法;脱除色素的最佳方法是颗粒活性炭吸附法;单一多糖分离纯化采用DEAE-纤维素A52阴离子交换柱和Sephadex G-100柱联用的方法最佳。酵母细胞壁多糖结构鉴定一般采用高效液相色谱法（HPLC）测定多糖的单糖组成,高效凝胶渗透色谱测定多糖的均匀性和分子质量,傅立叶变换红外光谱（FT-IR）、气相色谱-质谱（GC-MS）和核磁共振（NMR）测定多糖的精细结构。文章通过对酵母细胞壁多糖的作用及应用、提取、分离纯化和鉴定技术进行阐述,为酵母细胞壁多糖作为抗生素替代品在畜牧业生产中的推广应用提供理论依据,为抗生素替代品的研发提供新的思路。     

UPLC-PDA法测定杨树花口服液中非法添加物黄芩苷

为了建立超高效液相色谱-二极管阵列检测法(UPLC-PDA法)测定杨树花口服液中非法添加物黄芩苷,取适量黄芩苷对照品、杨树花口服液阴性样品、阳性添加样品、抽检样品经50%甲醇溶解,超声提取,滤液过滤并定量稀释后,作为供试品溶液,采用UPLC-PDA法检测。色谱分离采用ACQUITY UPLCTMHSS T3色谱柱为分离柱,柱温:35℃;流动相体系:A项为乙腈,B项为0.4%磷酸水溶液,进行梯度洗脱;流速:0.35 m L/min;进样量:10μL;选择二极管阵列检测器,检测波长为278 nm,上机测定。通过保留时间、光谱图、峰纯度等参数对黄芩苷进行定性定量检测。结果表明,黄芩苷在0.5~100μg/m L的范围内线性关系良好(R2=0.999);杨树花口服液中添加黄芩苷0.05 mg/m L,信噪比(S/N)3,确定为方法的检测限;添加0.1 mg/m L,信噪比(S/N)10,确定为方法的定量限;杨树花口服液在0.1、0.2、0.4、0.6 mg/m L黄芩苷添加水平的回收率为95%~105%,批内批间变异系数均小于10%,准确度和精密度良好,完全满足检测需求。而且峰纯度角与阈值符合要求。本方法经济快速、灵敏、重现性好,适用于杨树花口服液中非法添加黄芩苷的定性定量检测。     

青贮饲料中主要有机酸的高效液相色谱分离分析

研究利用高效液相色谱法同时测定青贮饲料中乳酸、乙酸、丙酸和丁酸含量的最佳色谱条件。通过优化比较试验发现测定青贮样品中有机酸含量的最佳色谱条件为:以Agilent TC-C18柱(250 mm×4.6 mm×5μm)作色谱柱,柱温50℃,甲醇为流动相A,0.01 mol/L的KH2PO4水溶液(用磷酸调p H值到2.70)为流动相B,流速0.7 m L/min,设置梯度洗脱:0:00时A∶B=3∶97;10:00时A∶B=10∶90,进样20μL,紫外检测波长为210 nm。该方法检测结果表明:4种有机酸的色谱图峰分离良好,峰型对称,检测时间适合,高效可行;样品中乳酸、乙酸、丙酸和丁酸的回收率为94.7%~99.8%,表现出较高的准确性;相对标准偏差均小于5%,表明该方法具有较好的精密度。     

酶联免疫法测定违禁药物地西泮的注意事项

安定也叫地西泮,被应用于家畜生产中来加快其生长速度,在家畜中过量残留安定可能会对消费者造成危害,为此安定已经被禁止在食品生产应用。安定酶联免疫反应测试盒是用于肉类、饲料、牛奶、尿样和血清等中安定和其他相关的苯二氮卓类残留的定量检测。与传统的液相色谱(HPLC)或气谱-质谱联用法(GC-MS)方法相比,酶联免疫方法(ELISA)有操作简便、灵敏度高,检测时间短,检测成本低等优点。安定酶联免疫反应测试盒的提取方法能达到90%以上的回收率,不需要有机溶剂并在10～30min之内完成提取过程;r值≥0.9959,离散系数(CV值)≤3.9%;检测下限为0.01μg/kg;检测过程只需要不到2h。     

高效液相色谱法检测饲料中咪达唑仑的含量

文中建立了高效液相色谱法测定饲料中咪达唑仑(midazolam)含量的方法。样品由乙腈提取,垂直振荡离心后使用固相萃取C18柱进行净化,色谱柱为Agilent Eclipse XDB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-水梯度,检测波长254 nm。实验结果:咪达唑仑最低定量限为1 mg/kg;猪配合饲料回收率为70%～100%,猪预混合饲料回收率为60%～100%,猪浓缩饲料回收率为65%～100%;相对标准偏差均小于10%。结果提示,用高效液相色谱法测定饲料中咪达唑仑的含量,方便、简单、有效性高。     

凝胶渗透色谱净化-气相色谱分离同时测定饲料中30种有机磷农药残留

文中建立了凝胶渗透色谱净化-气相色谱法同时测定饲料中敌敌畏、乐果等30种有机磷农药残留的方法。饲料样品用乙腈体系提取,采用凝胶色谱柱净化,毛细管色谱柱分离(DB-50+,30 m×0.25 mm×0.25μm),火焰光度检测器(FPD)检测,外标法定量。其方法检测限为5.6~54μg/kg,三水平添加回收率为71.3%~114.1%,RSD为0.3%~14.8%。方法简便、准确,并能满足饲料中多种有机磷农残测定的需要。     

一株pH1N1/2009猪流感病毒的进化分析与生物学特性研究

为了解SIV A/swine/Liaoning/5/2014(H1N1)分离株的生物学特性与遗传进化关系,本研究对该分离株的全基因序列进行测定,并对其进行小鼠致病性实验。基因组序列分析表明:该病毒的8个基因节段均来自A型H1N1流感病毒。HA蛋白裂解位点为~(325)PSIQSRG~(331),属于低致病性流感病毒的分子特征,其HA基因与A/Xia Men/SWL1280/2013(H1N1)的相似性达到98.9%。对动物致病性试验结果显示:该病毒可以感染哺乳动物模型BALB/c小鼠,但仅能够在鼠的肺脏和鼻甲骨粘膜上皮细胞中复制,病毒滴度分别为5.5 log_(10)EID_(50)/m L和3.3 log_(10)EID_(50)/mL,该病毒株对小鼠的生长具有抑制作用,可以导致感染后7 d内小鼠体质量下降15.2%,随后逐渐恢复,但始终低于正常对照小鼠,呈现一定的致病性。本研究为该病毒已在我国动物群体内流行提供了新的证据。     

HPLC法同时测定磺胺二甲嘧啶含量和泰乐菌素组分

采用高效液相色谱法同时测定磺胺二甲嘧啶和泰乐菌素组分含量,采用C18(4.6×250 mm,5μm)色谱柱;以2 mol/L高氯酸钠溶液-乙腈为流动相进行梯度洗脱;流速为1.0 m L/min;检测波长为280 nm。结果表明磺胺二甲嘧啶在10~200μg/m L范围内具有良好的线性,相关系数为0.9997,检出限为0.05μg/m L,定量限为0.15μg/m L,低、中、高3个浓度加标的平均回收率为99.7%~100.1%,RSD为0.3%~0.5%,泰乐菌素D峰与A峰的分离度≥3.2;泰乐菌素C峰与磺胺二甲嘧啶分离度≥30,该方法操作简便、准确、专属性强。     

离子色谱法快速分离八种阴离子和添加剂的研究

为了分离测定饮料中8种阴离子和添加剂,试验采用离子色谱法,色谱柱为Dionex Ion Pac AS19(4 mm×250 mm),流动相为24 mmol/L KOH溶液,流速为1.0 m L/min,抑制器电流为60 m A,柱温为30℃,压力为1 682 Psi,一次进样,10 min内达到完全基线分离。结果表明:本研究建立的检测方法具有快速、简便、灵敏的特点,可满足实际工作需要。     

大青叶抗胸膜肺炎放线杆菌活性部位的初步分离

提取分离大青叶并测定各级提取物对猪胸膜肺炎放线杆菌的抑菌活性。采用二倍稀释法测定最小抑菌浓度(Minimal inhibitoryconcentration,MIC)和最小杀菌浓度(Minimal bactericidal concentration,MBC)以追踪大青叶的活性部位及其活性成分。采用80%的乙醇提取并通过硅胶柱色谱法对其进一步分离,测定抑菌活性,追踪其活性段。同时以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇、水依次提取,测定抑菌活性,并对提取物的化学成分进行初步分析。硅胶柱色谱各分离组分对试验菌均有不同程度的抑制作用,抑菌效果最好的为组分3,其MIC为3.91 mg/mL。各级提取物中抑菌活性较好的为乙酸乙酯提取物,其MIC为3.91 mg/mL。其抑制胸膜肺炎放线杆菌生长的主要成分可能为生物碱、有机酸和黄酮类物质。