转hFat-1基因猪外源基因整合分析及拷贝数测定

对转人源化Fat-1基因猪的15头传代仔猪进行PCR检测,发现有7头阳性猪,其断奶后成活5头仔猪。对这5头仔猪进行Southern印迹杂交试验,确认3头仔猪整合有hFat-1基因。采用荧光实时定量PCR法测定原代转hFat-1基因公猪及3头阳性仔猪外源基因的拷贝数,分别是2、1、1、2个拷贝。转hFat-1基因猪能够将外源基因遗传到下代仔猪,但外源基因具有遗传不稳定的趋向。     

转hFat-1基因猪外源基因整合分析及拷贝数测定

对转人源化Fat-1基因猪的15头传代仔猪进行PCR检测,发现有7头阳性猪,其断奶后成活5头仔猪。对这5头仔猪进行Southern印迹杂交试验,确认3头仔猪整合有hFat-1基因。采用荧光实时定量PCR法测定原代转hFat-1基因公猪及3头阳性仔猪外源基因的拷贝数,分别是2、1、1、2个拷贝。转hFat-1基因猪能够将外源基因遗传到下代仔猪,但外源基因具有遗传不稳定的趋向。     

Dot-blot对转DAF基因猪外源基因整合的检测

衰变加速因子(DAF)是补体激活途径中的一个重要膜调节蛋白，转人DAF基因猪可以作为人器官移植的供体。采用斑点杂交试验(Dot-blot)，对经显微注射导入了hDAF质粒片段、用聚合酶链反应(PCR)鉴定的阳性猪所产仔猪32头进行了整合检测，获得转基因阳性仔猪14头。说明了Dot-blot可作为转基因动物外源基因整合检测的一种手段。     

家畜基因转移系统的研究

把pMTSA,pHBV3.0,pSMGHI和pMDV38kdpp4种重组质粒,以单个或二者混合后经微注射导入家畜的受精卵,随后移入同种寄母,获得转基因家畜,兔导入上述外源基因的卵,移植后妊娠率59.70％(40/67),发育成个体率17.74％(129/727),整合率59.38％(57/96),在整合兔中有32.14％(9/28)表达;山羊,导入pSMGHI基因卵,移植后妊娠率50％(7/14)发育成个体率12.76％(12/94),整合率33.33％(4/12);牛,获一整合的流产胎儿。当代转基因兔的后代也检出整合的外源基因,并有部分表达,证明导入的外源基因是可以遗传的。研究表明,这一转基因系统具有相当的稳定性,并可应用家畜代替常规的生物反应器,生产具较高经济价值的蛋白质,为畜牧生产开辟了一条新途径。     

山羊胚胎移植技术的研究

在1985年4月15日—11月8日,我们进行了山羊胚胎移植技术的研究。首先筛选出了应用PGF_2α、PMSG进行同期发情处理和应用PMSG、PGF_2α、HCG进行超数排卵处理的较理想方案。应用上述同期发情方案,对18头羊进行处理,同期发情率为81.1％。应用上述超数排卵方案,对12头供体羊进行处理,平均每头供体羊卵巢上有12个卵泡发育,有7.7个发育成熟的卵泡排卵,共采集到发育正常的胚胎21个。其中19号供体羊,一次采集到7个发育正常的胚胎。把发育正常的17个胚胎(余下胚胎留作标本)分别移植到10头受体母羊的输卵管内,其中妊娠5头,妊娠率为50％。共获得5个胎儿,移植胚胎成功率为29.4％。在1986年3月5日上午9时,13号受体羊经过148天的妊娠生一公羊羔,初生重为3,050克。     

精子介导生产转hCD59基因猪

为研究精子介导法生产异种器官移植用转基因猪的效率,将人膜反应性溶解抑制物(hCD59)基因与脂质体混合制成基因/脂质体复合物,分别采用睾丸注射法和基因脂质体复合物/精子共孵育法制备转人hCD59基因猪,其中睾丸注射法处理公猪1头,44 d后配母猪8头,7头受孕(受孕率87.5%),产仔73头,PCR阳性猪3头(阳性率4.3%);外源基因/精子共孵育法处理公猪4头,处理母猪4头,1头受孕(受孕率25%),产仔11头,PCR阳性猪1头(阳性率9%)。从15头受孕母猪共获得84只仔猪,经PCR初步检测,其中4只仔猪为转基因阳性,阳性率4.8%。研究结果表明:通过精子介导法可以获得转基因猪。     

猪的胚胎移植

选用二花脸(黑色)和大二(白色)母猪为供体,经超数排卵处理或自然发情后配种,冲取各发育阶段胚胎,分别移植给8头大长二(白色)和杜二(黑色)同期自然发情的受体母猪。其中5头妊娠(4头产仔,1头流产),获20头仔猪。平均妊娠114.3天。移植成活率62.5％。4～16细胞期胚胎和桑椹胚、早期囊胚的产仔率(产仔数/移入胚胎数)分别为16.67％和48.57％。仔猪初生重1.12kg。     

精子与慢病毒孵育制备转基因猪的分子检测及遗传分析

【目的】在前期精子与慢病毒孵育法制备的转基因猪基础上,进一步探讨外源基因在转基因猪上的遗传状况.【方法】通过转基因猪与野生猪交配扩繁后,运用PCR和Southern-blot法对转基因G_1和G_2代进行外源基因的检测与遗传分析.【结果和结论】采用PCR法检测,G_1代PCR阳性率为25.42%(15/59);G_2代PCR阳性率为46.67%(7/15).在12头阳性转基因猪的13种组织中,外源基因在多种组织中均有存在;对阳性转基因猪的胃、垂体、下丘脑组织的RT-PCR检测结果显示,外源基因在66.67%(24/36)的组织样品中均有表达.表明在精子与慢病毒共孵育法制备的转基因猪中,外源基因能整合到猪的基因组,并遗传给后代.     

小麦花粉电穿孔转化因素优化和转基因植株获得及鉴定

[目的]通过优化电穿孔转化技术主要参数,得到候选转基因植株,探索普通小麦(Triticum aestivum L.)电穿孔遗传转化体系.[方法]以冬小麦品种济麦19为受体,GUS为外源基因,将扬花期成熟花粉以最适电场强度和操作温度进行电穿孔处理后,人工授粉济麦19,最终收获种子;利用PCR技术、Southern技术、化学染色方法对T1、T2植株进行鉴定.[结果]电穿孔转化以电场强度6 kV·cm-1、冰上处理花粉,花粉密度为5×106个/mL,以及去雄后第5天授粉为最佳参数;Southern杂交检测结果表明,T2阳性植株的2个株系检测到杂交信号,同时其幼根、叶片等组织经GUS表达活性的组织化学染色检测,呈现蓝色反应.[结论]利用小麦花粉电穿孔转化法可以成功将外源基因整合到小麦基因组中并稳定遗传至T2,且外源基因GUS能够得到表达.     

卵母细胞经体外成熟、受精及用输卵管细胞共培养后产羔

卵母细胞经体外成熟、受精处理后,转移到中间受体母羊体内培养。5天后,回收到59％的卵子,其中31枚(38％)达到桑椹或囊胚期胚胎,移植给6只受体母羊,结果5只妊娠,其中4只保持妊娠,并产羔羊9只(43％)。本试验,72个卵母细胞成熟和体外受精,用羊输卵管细胞共培养5天,31个受精卵(43％)发育到非植入桑椹胚,21个胚胎移植到11只受体体内,结果2只(18％)妊娠,并产2只公羔。结果表明:体外成熟和受精的羊卵与绵羊输卵管上皮细胞共培养以通过预移植阶段,这对其进一步发育到移植时期是适合的。     

财政转移支付规范目标的设置

作为财政分权与财政集权的协调机制，财政转移支付旨在促成各层级政府支出责任与事权的相互适应、匹配，其功能发挥离不开规范目标的明确。基于一般性转移支付与专项转移支付两种类型不同的运行机制，分别设置规范目标，前者为基本公共服务均等化，后者为特定政策目标。在特定政策目标之下又包括克服外溢性、发展公共事业及狭义特定政策目标。基本公共服务均等化与特定政策目标既相互独立，又相互关联。如此，建立起内在统一、协调而又清晰的目标体系。     

我国农业规模化经营研究

农业规模化经营是发展现代农业、增加农民收入的必由之路。但农业规模化经营需要一定的条件,如土地产权清晰,能够自由交易,且交易成本较小;农民有意愿出让土地;农民愿意购置土地,并有能力进行农业的规模化经营;金融部门与政府的支持,等等。这些条件在当前的我国,尚不完备。为了推动我国农业规模化经营的发展,政府必须建立规范的土地流转制度,在明晰农村土地产权,使土地的使用权可以自由交易或流转的同时,改革户籍制度以加快农业剩余劳动力转移,培育农业规模化经营主体,并在在融资、保险、技术以及产品销售方面,加大对农业的支持。     

母语迁移对英语学习的影响及教学对策

语言迁移问题表现在母语对英语学习的正迁移作用和负迁移作用两种。运用对比法针对英语教学活动中出现的语言迁移现象进行分析并提出具体的解决方法：强调母语与英语的异同点,培养学生正确学习英语的习惯;发挥母语的桥梁作用,促进学生对英语知识的理解和掌握。英语教师应在教学活动中积极地运用正迁移、巧妙利用负迁移作用,提高学生的英语学习效果。     

贵州省农村剩余劳力的变动状况及其转移的动因

以贵州省农村剩余劳动力为研究对象,从农村剩余劳动力的相关概念入手,利用现有统计资料,根据产业结构偏差公式测算方法,得出农村剩余劳动力和农村非农业化劳动力的长期时间序列数据,并以此为基础,展开对贵州省农村剩余劳动力变动过程的分析。接着以人口与经济、资源之间的密切关系基础,以相关理论为依据,对贵州省农村剩余劳动力转移的动因进行深入分析。最后综合全文,得出了一些具有历史意义和现实意义的结论。     

甘肃省区域产业结构转换能力的比较分析

以甘肃省14个地市(州)为研究对象,在对地区产业结构转换影响因素系统分析的基础上,采用定量分析法,对甘肃省的产业结构转换能力、产业转换速度、产业转换方向以及它们之间的关系进行分析和探讨.结果表明:甘肃省14个地市(州)产业结构转换能力差距较大,且区域差异明显;各地区产业结构转换速度差距显著,但大都在向合理化方向转换;产...     

关于浙江捕捞渔民转产转业路径的思考

捕捞渔民在转产转业中主要有2种路径,分别是就地转移和异地转移。本研究结合当前浙江捕捞渔民转产转业的现状,比较了两者的优势和劣势,认为就地转移对浙江捕捞渔民来说,是更好的选择。之后,从渔业资源和捕捞渔民自身2个角度分析了就地转移的必要性;接着从经济发展趋势、当地的自然资源优势2个方面论证了就地转移的可行性。在此基础上,提出浙江捕捞渔民就地转产转业的政策建议。     

新时期农村土地流转的方式及其现实意义

土地是农业发展最原始的生产资料,为农村发展提供坚实基础,是农民赖以生存发展的基础性生产生活资料,农业、农村、农民问题的解决根本与关键都在于土地。探索农村土地流转的方式和方法,推动农村土地使用权改革,加强农村土地管理,对于社会主义新农村建设,加快城镇化进程具有实践和现实意义。     

热转印色带的热转移特性及其在条码印制中的应用

以国内原料为主，研制成功蜡一树脂复合型热转印色带，研究发现，油墨热容量小，热转移率大，组分相似的油墨，熔化热大，热转移率大。条码印制实验表明，该色带适用于高速高业打印条码标签。     

完善生态补偿横向转移支付方式的必要性分析

由于环境过度利用、资源过度开发等原因使我国面临发展社会经济和保护环境的双重压力,因此有必要建立健全生态补偿机制,尤其是大力完善生态补偿横向财政转移支付方式。笔者从阐述生态补偿机制与生态补偿财政转移支付的内涵入手,实证分析了我国现行生态补偿财政转移支付机制的问题与不足,在此基础上提出了应该建立并完善生态补偿横向财政转移支付的建议。     

家畜繁殖生物技术研究现状及趋势

牛胚胎移植技术已趋于成熟。我国新疆牧科院用一步细管法移植牛冻胚受胎率达41%;牛和羊鲜胚四分胚移植也产下1头犊牛和6只羔羊。家畜体外受精,因卵子体外成熟和受精卵体外培养尚不过关,目前仍停留在实验室阶段。胚胎性别鉴定,1990年Koopman发现单拷贝基因,该基因是Y染色体的性决定区,命名为SRY,可利用PCR技术制成雄性特异DNA探针盒,进行马、牛、羊、猪早期胚胎性别鉴定。北京农学院等单位用PCR扩增牛SRY序列进行奶牛胚胎性别鉴定准确率达100%。英、日、法等国已获得牛胚胎细胞核移植后代;我国也获得1只核移植兔。北农大和新疆牧科院合作以绵羊精子为载体导入牛生长激素基因rMTbGH DNA成功,外源基因整合率为3%。