山东省牛源金黄色葡萄球菌耐药谱分析及mecA耐药基因检测

采用纸片扩散法测定金黄色葡萄球菌(以下简称金葡菌)对6种抗生素的敏感性。结果表明,在测定的121株金葡菌中,耐苯唑西林金葡菌(MRSA)为26株,占21.5%;对苯唑西林敏感菌(MSSA)为93株,占76.9%;中介菌株为2株,占1.6%。金葡菌对6种抗生素耐药率最低的是头孢噻肟为2株,占1.6%。mecA基因的PCR扩增结果显示:所有的MSSA mecA基因均阴性,中介株mecA基因阳性1株,而MRSA中mecA基因阳性株为9株。MSSA对大部分抗生素仍保持良好的敏感性,而MRSA表现为多重耐药性,PCR技术可以作为快速检测金葡菌耐药基因的有效方法。     

食品中金黄色葡萄球菌DNA环介导恒温扩增快速检测方法的建立与应用

【目的】金黄色葡萄球菌是一种人畜共患病的重要致病菌,主要经食品传播,引起食物中毒、组织及器官的化脓性炎症,建立快速、准确的检测方法对预防和控制金黄色葡萄球菌的传染具有重要意义。【方法】DNA环介导恒温扩增(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)是一种新颖的快速、高灵敏核酸扩增技术,本研究利用该技术建立金黄色葡萄球菌LAMP检测方法。基于金黄色葡萄球菌高度保守的Sa442基因序列,设计4条特异性LAMP扩增引物,两条外引物F3和B3及两条内引物FIP和BIP,在BstDNAPolymerase作用下,65℃恒温水浴中,对26个种类共45株细菌进行扩增,所试的20株金黄色葡萄球菌均为LAMP阳性,说明所设计的LAMP引物具有高度特异性。【结果】本LAMP方法对纯培养的金黄色葡萄球菌检测灵敏度为25CFU/mL,对污染食品中金黄色葡萄球菌的检测灵敏度为42CFU/g,40—60min内即可完成检测。检验检疫实践证明,利用本LAMP方法对958份肉类、蛋奶及其制品、人工污染样品等进行检测,检出115份LAMP阳性,与国标法(GB)检测结果一致。【结论】本LAMP方法操作简便、特异性强、灵敏度高,具有良好的实用性。     

部分鸡场致病性葡萄球菌的分离·鉴定·药敏试验

[目的]从合肥地区部分养鸡场病鸡组织中分离葡萄球菌,并对其进行鉴定和药敏试验。[方法]从合肥地区部分养鸡场病鸡组织中分离葡萄球菌,并通过形态特征观察、溶血性试验、血浆凝固酶试验、生化试验对其进行鉴定,最后对其进行药敏试验。[结果]共分离到9株葡萄球菌。经鉴定,其中4株为金黄色葡萄球菌,在临床分离的葡萄球菌中为优势群株;在凝固酶阴性葡萄球菌中2株为头状葡萄球菌,孔氏葡萄球菌、模仿葡萄球菌和沃氏葡萄球菌各1株。这说明金黄色葡萄球菌是合肥地区家禽养殖场中葡萄球菌类疾病的主要病原菌。药敏试验结果表明,所有分离菌株对12种临床常用抗生素均呈不同程度的耐药性,对青霉素、复方磺胺甲噁唑和恩诺沙星有较高的耐药性。凝固酶阴性葡萄球菌与金黄色葡萄球菌在抗药性方面存在差异。[结论]在用抗生素防治葡萄球菌病时需通过药敏试验进行药物筛选。该研究结果可为养鸡场用药提供参考。     

上海地区奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌基因分型与耐药性研究

通过对分离自上海4个规模化奶牛场的63株奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌进行基因分型和耐药性分析,研究金黄色葡萄球菌基因型在上海地区的分布情况及其耐药情况,并分析基因型和耐药性两者之间的相关性。结果显示,利用RAPD技术对63株金黄色葡萄球菌进行基因分型,共分为9个基因型,其中以Ⅵ型为主,占总数的47.62%。各个奶牛场的基因型分布差异显著,Z奶牛场和D奶牛场基因型分布较平均,而W奶牛场和X奶牛场基因型分布较集中。63株金黄色葡萄球菌对各种常用抗生素均产生不同程度的耐药性,尤其对氨苄西林和阿莫西林已完全耐药,各个奶牛场的菌株对不同抗生素的耐药性差异较大。对金黄色葡萄球菌的基因型和耐药性进行比较发现两者之间没有显著的相关性。     

新疆牛源金黄色葡萄球菌抗菌素敏感性调查

[目的]了解新疆奶牛乳房炎中金黄色葡萄球菌的药物敏感性情况,为该病治疗的临床用药提供参考。[方法]2009年以来对乌鲁木齐市、昌吉、呼图壁、奎屯、伊犁和库尔勒6地区16个奶牛养殖场乳房炎奶样分离金黄色葡萄球菌,用纸片扩散法进行抗菌素敏感性检测。[结果]共分离143株金黄色葡萄球菌,临床药敏试验显示,新疆70%以上分离株对红霉素、青霉素、复方新诺明、多西环素、四环素耐药,40%的菌株对氯霉素、环丙沙星和庆大霉素耐药;并且67.1%菌株同时对5种以上抗菌素耐药,10.5%的菌株对所测试的10种抗菌素耐药。此外,发现了19.6%的牛源耐甲氧西林金黄色葡萄球菌。[结论]新疆奶牛乳房炎病例中的金黄色葡萄球菌对当前临床上允许使用的多种类型的抗菌素呈现严重的多重耐药,使用抗菌素进行奶牛乳房炎的防治难以取得理想的疗效。这类菌株的存在和蔓延将对新疆奶牛养殖业的健康发展和奶制品的安全构成威胁,建议在选择奶牛乳房炎治疗的抗生素时,应以流行菌株的耐药性为依据。     

侗族传统腌鱼中葡萄球菌的分离鉴定与生物学特性

为进一步探明葡萄球菌在鱼制品生产发酵过程中的作用,采用传统微生物分离方法对侗族传统发酵腌鱼中葡萄球菌进行分离,结合生理生化鉴定结果,对样品中分离出的部分菌株进行16Sr DNA基因序列分析,并构建系统发生树。结果表明:共从腌鱼成品中纯化获得葡萄球菌疑似菌株14株,经生理生化初步鉴定,7株为木糖葡萄球菌,4株为松鼠葡萄球菌,3株为肉糖葡萄球菌;样品中分离得到的ZYS-1、CYS1-1和CYS2-3分别为Staphylococcus xylosus、Staphylococcus sciuri和Staphylococcus carnosus,均具有良好的生长性能以及较好的耐盐性;木糖葡萄球菌拥有较好的蛋白酶以及脂肪酶活性,而松鼠葡萄球菌和肉糖葡萄球菌具有较好的蛋白酶活性以及较弱的脂肪酶活性。     

金钮扣提取物体外抑菌活性的初步研究

[目的]研究金钮扣提取物的体外抑菌活性。[方法]采用药敏纸片扩散法及2倍稀释法测定金钮扣提取物对金黄色葡萄球菌等10种细菌的抑菌效果。[结果]①对金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、微球菌、枯草芽孢杆菌、痢疾杆菌、白色葡萄球菌6种供试菌有抑制作用。②及③对耐甲氧西林金黄色葡萄球菌、金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌、微球菌、枯草芽孢杆菌、痢疾杆菌6种供试菌有较强的抑制作用。②及④对白色葡萄球菌有较弱的抑菌作用。[结论]金钮扣不同提取物对供试菌抑菌效果不同;②的抑菌效果优于①;而③及④是主要活性成分,具有抑菌作用。     

Catalysis and sulfa drug resistance in dihydropteroate synthase

The sulfonamide antibiotics inhibit dihydropteroate synthase (DHPS), a key enzyme in the folate pathway of bacteria and primitive eukaryotes. However, resistance mutations have severely compromised the usefulness of these drugs. We report structural, computational, and mutagenesis studies on the catalytic and resistance mechanisms of DHPS. By performing the enzyme-catalyzed reaction in crystalline DHPS, we have structurally characterized key intermediates along the reaction pathway. Results support an S(N)1 reaction mechanism via formation of a novel cationic pterin intermediate. We also show that two conserved loops generate a substructure during catalysis that creates a specific binding pocket for p-aminobenzoic acid, one of the two DHPS substrates. This substructure, together with the pterin-binding pocket, explains the roles of the conserved active-site residues and reveals how sulfonamide resistance arises.     

拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌的鉴定及其耐药性分析

[目的]明确西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌常见肠毒素(SEs)基因分布特征及其多重耐药性,为牦牛肉源产SEs金黄色葡萄球菌的快速鉴定及其防控提供科学依据.[方法]通过Baird-Parker显色培养筛选及Nuc基因扩增鉴定从拉萨市牦牛肉样品中分离获得金黄色葡萄球菌,利用PCR鉴定分析金黄色葡萄球菌中9种常见SEs基因的分布特征,并采用K-B纸片扩散法对产SEs金黄色葡萄球菌进行多重耐药性分析.[结果]从100份牦牛肉样品中分离获得29株金黄色葡萄球菌,其SEs基因鉴定结果表明,9种SEs基因检测出6种(SEB、SEC、SEE、SEG、SHE和SEI),有3种(SEA、SED和SEJ)未检出.其中,SEG基因检出率79.31%,SEC和SEI基因检出率均为68.97%,SEB基因检出率55.17%,SHE基因检出率51.72%,SEE基因检出率3.45%.29株金黄色葡萄球菌对青霉素(P)、氨苄西林(AMP)、克拉霉素(CLR)、红霉素(E)和磺胺甲恶唑(SMZ)的耐药率较高,分别为79.31%、65.52%、58.62%、51.73%和31.04%;对阿米卡星(AK)、替卡西林(TIM)、苯唑西林(OX)、环丙沙星(CIP)和四环素(TE)的耐药率较低,分别为10.35%、6.90%、3.45%、3.45%和3.45%;对头孢西丁(FOX)、头孢他啶(CAZ)、头孢噻肟(CTX)、庆大霉素(CN)和氯霉素(C)尚未产生耐药性.29株金黄色葡萄球菌共表现出13种耐药谱,多重耐药率高达93.1%(27/29),其优势耐药谱为AMP/P、SMZ/CLR/E和AMP/P/CLR/E.[结论]西藏拉萨市牦牛肉源金黄色葡萄球菌含有SEG、SEC、SEI、SEB、SEH和SEE等多种SEs基因,且对青霉素类、大环内酯类和磺胺类等多种抗菌药物已产生较强的耐药性.     

兰州地区奶牛临床型乳房炎病原菌的分离鉴定及药敏试验

从甘肃省兰州市2家奶牛场采集了44份患有临床型乳房炎奶牛的乳样,进行细菌分离鉴定及主要病原菌的药敏试验.结果表明:导致奶牛临床型乳房炎的主要致病菌有葡萄球菌属、链球菌属、肠杆菌属,其中金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌共35株,占44.3％;牛链球菌20株,占25.3％;大肠杆菌11株,占13.9％,说明奶牛乳房炎的主要致病...     

海南文昌鸡源抑菌乳酸菌的筛选鉴定

为获取具有抑菌活性的海南文昌鸡源乳酸菌，笔者以海南文昌鸡的肠道粘膜及内容物为样品分离乳酸菌。通过菌株形态观察，革兰氏染色镜检、过氧化氢试验和16S rRNA基因序列测序鉴定乳酸菌；而后利用乳酸菌对酸和胆盐的耐受性及其抑菌试验从中筛选出热带动物肠道源抑菌乳酸菌。本研究共获得17株乳酸菌，分别为13株植物乳杆菌和4株粪肠球菌，其中植物乳杆菌对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和鼠伤寒沙门氏菌均有较高抑制作用，有一定耐酸耐胆盐的能力；粪肠球菌抑菌效果均较差。研究结果表明，筛选获得的海南文昌鸡源植物乳杆菌S4-1综合抑菌效果较好，可用于畜禽肠道益生菌制剂开发的后续研究。     

Toxic shock syndrome and lysogeny in Staphylococcus aureus

Lysogeny, or the presence of temperate bacteriophage, was demonstrated, by means of two Staphylococcus aureus indicator strains, in 11 of 12 strains of S. aureus isolated from patients with toxic shock syndrome. Only 1 of 18 strains of S. aureus that were not associated with toxic shock syndrome showed the presence of bacteriophage. A laboratory strain of S. aureus was lysogenized by bacteriophage from two of the toxic shock-associated strains. These results add support to the theory that lysogeny by one or more bacteriophage in certain strains of S. aureus may be responsible for the pathogenesis of toxic shock syndrome.     

生化黄腐酸抑菌作用的研究

[目的]探索生化黄腐酸(BFA)对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌抑菌效果的最适试验条件。[方法]采用4个因素4个水平的正交试验方案。4个因素为BFA浓度、培养基pH、培养温度和菌种的生长时期。以抑菌圈直径为指标,研究BFA的抑菌作用。[结果]BFA具有抑菌作用,对金黄色葡萄球菌的抑菌效果要好于大肠杆菌。试验条件的最优组合为:BFA浓度80 mg/ml,培养基pH 7.6,温度18℃,2种菌均处于对数生长期。[结论]当试验条件为最优组合时,BFA对2种菌的抑菌效果最佳。     

无花果内生真菌的抑菌活性筛选

以金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、大肠杆菌（Escherichia coli）为测试菌种,对无花果根、茎、叶中分离出的87株内生真菌进行活菌筛选,结果表明：无花果87株内生真菌中有36株对1种或多种指示菌有拮抗作用,其中对金黄色葡萄球菌有抑菌作用的有18株,对枯草芽孢杆菌有抑菌作用的有11株,对大肠杆菌有抑菌作用的有7株;活性菌株抗菌活性多以中等活性为主,高活性和低活性的菌株较少。从36株有活性的菌株中选出具有代表性的20株内生真菌的代谢产物进行抗菌活性筛选,结果表明20株菌株的代谢产物至少对1种供试菌株具有抑菌活性。     

消毒威对几种菌株的杀灭效果研究

为了检测消毒威消毒剂对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、巴氏杆菌和沙门氏菌的杀灭效果．通过采用悬液定量杀菌法对几种标准菌株进行杀灭效果观察。发现20mg／L的消毒威作用5min．对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌可达到全部杀灭作用,对沙门氏菌可达到消毒效能,对巴氏杆菌需适当加大浓度。以此笔者认为消毒威对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌及巴氏杆菌均具有快速强效杀灭作用,适用于畜禽舍内外环境的消毒。     

酶联免疫吸附法在磺胺类药物残留检测中的应用

介绍了磺胺类药物的毒性及其残留量的检测方法,着重叙述了酶联免疫吸附法及其在磺胺类药物残留检测中的应用。     

奶牛子宫内膜炎病原菌的分离·鉴定及药敏试验

[目的]了解奶牛子宫内膜炎的病原菌感染情况与耐药现状.[方法]随机采集库尔勒地区某牛场患子宫内膜炎奶牛的子宫黏液20份,进行实验室细菌学的分离、生化鉴定及药敏试验.[结果]共分离出89株菌,其中链球菌45株,占50.56％;葡萄球菌24株,占26.97％;大肠杆菌13株,占14.60％;蜡样芽胞杆菌7株,占7.87％.分离出的单一菌株的检出率为80％ （16/20）.引起该地区奶牛子宫内膜炎的主要病原菌是链球菌、葡萄球菌.对链球菌、葡萄球菌、大肠杆菌、蜡样芽胞杆菌这4种菌抑菌效果最好的药物依次分别为奥复星、氟苯尼考、甲氧苄啶、氟苯尼考.[结论]该研究可为指导子宫内膜炎的临床用药和预防提供理论依据与技术支持.     

产抑菌活性物质放线菌菌株的筛选

[目的]筛选产抑菌活性物质的放线菌菌株。[方法]以金黄色葡萄球菌、对青霉素和头孢菌素类耐药的金黄色葡萄球菌和大肠杆菌作为指示菌,采用滤纸片扩散法对300株放线菌的发酵产物进行抗菌活性筛选,通过最小抑菌浓度法（MIC）对筛选的阳性菌株进行抗菌活性测定。[结果]筛选到抗菌活性物质产生菌111株,抑菌率为37.0%;其中对金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和耐药金黄色葡萄球菌有抑制活性的菌株分别为111、10和47株。各菌株的最小抑菌浓度有很大差别,菌株174883对金黄色葡萄球菌的抑菌活性最强,其发酵样品稀释到2 048倍仍然表现出抑菌活性。用青霉素酶和头孢菌素酶作用于阳性菌株发酵产物,筛选到6株菌株代谢产物的抑菌活性变弱,菌株32349和kj0428的抑菌活性被抑制最明显。[结论]筛选得到的阳性放线菌菌株具有良好的抗菌活性,为新型抗生素的筛选提供了研究基础。     

磺胺类药物半抗原的合成及结构表征

本试验合成了4个模拟磺胺类药物母核结构的半抗原,使用1HNMR,FABMS和IR对半抗原结构进行了鉴定。产物结构中,4种间隔臂均位于对氨基本磺酞肤的N1端（-SO4NH-,突出了磺腔类药物的共同结构部分,为预期的半抗原。