适应Vero细胞传染性腔上囊病毒X毒株对鸡胚的致病性试验

适应Ｖｅｒｏ细胞传染性腔上囊病毒（ＩＢＤＶ）Ｘ毒株,通过对鸡胚的致死作用、病理变化的结果表明,ＩＢＤＶ Ｘ毒株在Ｖｅｒｏ细胞上传代后,各试验代次毒株均能适应鸡胚,并引起鸡胚死亡,对鸡胚的致病性随传代次数的增加而减弱。     

鸽副黏病毒Ⅰ型(川沙株)的分离与鉴定

利用SPF鸡胚培养法从上海川沙某具有典型新城疫症状和病理变化的高死亡率发病鸽场的死亡鸽体内分离到一株病毒.对该病毒E5代尿囊液进行病原学鉴定、RT-PCR鉴定、理化特性测定、致病指数、病毒血清学试验及鸽体致病性试验,结果显示该病毒具有血凝性,且血凝特性可被新城疫病毒参考阳性血清所抑制,而不能被减蛋综合征病毒、禽流感病毒（H5、H9和H7）阳性血清抑制;该病毒对氯仿、乙醚和酸敏感;致病指数分别为：最小致死量鸡胚平均死亡时间为55.2 h,1日龄雏鸡脑内致病指数为1.8,6周龄雏鸡静脉致病指数为2.39.经鉴定,该分离毒株为鸽副黏病毒Ⅰ型强毒株,将其命名为鸽副黏病毒Ⅰ型（川沙株）.     

鸽新城疫病毒弱毒株的分离与鉴定

对某鸽场送检的6只通过病理剖检疑似新城疫(ND)的病鸽进行实验室诊断,包括细菌分离、新城疫病毒荧光RT-PCR检测、SPF鸡胚分离与鉴定,并测定其鸡胚分离物F3代EID50和ICPI.结果为内脏病料新城疫病毒荧光RT-PCR检测为阳性;SPF鸡胚分离到一株有血凝活性的病毒,经HA和HI鉴定为NDV,其F3代血凝价为1∶26,EID50为107.63,ICPI为1.19.根据病鸽的临床症状、鸡胚分离物EID50和IC-PI,确定该鸽新城疫病毒分离株为弱毒株.     

鹅副粘病毒不同来源分离株血凝特性及ELD_(50)的比较

鹅副粘病是一种新发现的由副粘病毒引起的能引起不同年龄鹅发病和不同程度致死的疾病。为了研究其病毒特性 ,我们用分离鉴定的 11株鹅副粘病毒 ,分别在SPF鸡胚传代至 2～ 11代后用鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑的红细胞作血凝试验 ,测出各毒株的凝集价 ,证明所分离的 11株病毒均不同程度地凝集上述 5种禽类的红血球。同时分别测定 10株病毒的ELD50 ,结果表明各毒株的ELD50 在 8～ 12之间     

鹅副粘病毒不同来源分离株血凝特性及ELD50的比较

鹅副粘病量 种新发现的由副粘病毒引起的能引起不同年龄鹅发病和不同程度致死的疾病，为了研究其病毒特性，我们用分离鉴定的11株鹅副粘病毒，分别在SPF鸡胚传代至2-11代后用鸡、鸭、鹅、鸽、鹌鹑的红细胞作血凝试验，测出各毒株的凝集价，证明所分离的11株病毒均不同程度地凝集上述5种禽类的红血球，同时分别测定10株病毒的ELD50，结果表明各毒株的ELD50在8-12之间。     

IBD野毒株的培育

由国内ＩＢＤ高发地区分离到一株ＩＢＤ野毒,使现地鸡群发病率９６％,死亡率６０％以上,为一株超强毒。将该毒株分离,纯化,经鸡胚及鸡胚成纤维细胞传代,得到一株ＩＢＤ超强毒的细胞适应株,毒价高达２．０×１０＾８ＰＦＵ／ｍｌ以上。回归本动物,经免疫原性试验,致病性试验及返祖试验,证明该毒株免疫原性较好而致病力降低。     

鸽新城疫野毒株的分离及生物学特性研究

对分离的Ｇ１、Ｇ２、Ｇ３３株鸽新城疫病毒进行了电镜检查、致病性指数测定、血凝试验（ＨＡ）,与鸡新城疫Ｌａｓｏｔａ毒株的交叉血凝抑制试验（ＨＩ）、致病性试验。测得鸡胚半数感染量（ＥＩＤ５０）分别为１０－８．４１,１０－７．５３,１０－７．８３;鸡胚最小致死量（ＬＤ）均为１０－４;鸡胚平均致死时间（ＭＤＴ）分别为８０ｈ,９０ｈ,９６ｈ;１日龄雏鸡脑内致病指数（ＩＣＰＩ）分别为１．６０,１．５０,１．５５;分离毒株与Ｌａｓｏｔａ毒株和其相应血清的交叉凝集抑制试验有明显差异。将分离毒株分别接种１月龄鸽各３只,４～１０ｄ全部出现典型神经症状,１５ｄ内死亡。结果表明所分离的３株病毒为鸽新城疫病毒,在抗原性上与鸡新城疫病毒存在一定差异,对鸡也有一定致病力。为制定防制措施,研制鸽新城疫疫苗,控制新城疫流行提供了科学依据。     

IBD野毒株的培育

由国内ＩＢＤ高发地区分离到一株ＩＢＤ野毒，使现地鸡群发病率９６％，死亡率６０％以上，为一株超强毒。将该毒株分离，纯化，经鸡胚及鸡胚成纤维细胞传代，得到一株ＩＢＤ超强毒的细胞适应株，毒价高达２．０×１０８ＰＦＵ／ｍｌ以上。回归本动物，经免疫原性试验，致病性试验及返祖试验，证明该毒株免疫原性较好而致病力降低。     

鸽新城疫病毒分离株的部分生物学特性鉴定及疫苗免疫试验

从暴发疑似鸽新城疫的某赛鸽场分离到1株病毒，通过血凝（HA)试验、血凝抑制（HI）试验及鸡胚中和试验初步鉴定为鸽新城疫病毒，进而进行了鸡胚半数感染量（EID50）、鸡胚平均死亡时间（MDT）测定和对不同动物红细胞的凝集试验，证明该分离株属新城疫强毒力毒株，将该毒株经鸡胚尿囊液增殖后用甲醛灭活，制成油佐剂来活苗，对鸽免疫后检测其血清抗体水平并进行攻毒试验，结果在免疫后21d抗体达到高峰，攻毒试验表明油佐剂灭活苗对鸽新城疫病毒感染有较强的保护力。     

猪源新城疫病毒的分离鉴定

从发生呼吸道症状的病猪鼻腔中分离到1株病毒，经电镜观察、血凝和血凝抑制试验，确定为新城疫病毒。经对鸡胚平均致死时间、鸡胚半数致死量、对鸭胚和鸡、鸭的致死性测定及荧光PCR检测，证明分离毒为温和型毒株。     

番鸭副粘病毒1型的分离鉴定

自表现神经症状、腹泻、病死率较高、腺胃粘膜局灶性出血或溃疡及肠道粘膜出血为特征的病死番鸭肝脏中分离到病毒,经电镜观察、血凝及血凝抑制试验鉴定为副粘病毒1型.以SPF鸡胚测定其平均致死时间(MDT)为51 h,对1日龄SPF鸡的脑内接种致死指数(ICPI)为1.74,表明该毒株属强毒株.经肌肉注射途径攻击10 d雏番鸭致死率达66.7%,表明该分离毒对雏鸭有高度的致病性.     

鸭源新城疫病毒的生物学特性

用鸡胚尿囊腔传代法从23个鸭泄殖腔拭子中分离到1株病毒，经血凝(HA)和血凝抑制(HI)试验鉴定为新城疫病毒。该毒株ELD50为5．85log10，鸡胚平均致死时间(MDT)为92．5h，1日龄鸡脑内致病指数(ICPI)为0．5，6周龄鸡静脉接种致病指数(IVPI)为0．3，属于中等偏弱毒力的毒株。该毒株不引起6周龄雏鸡发病。结果表明家鸭也能感染NDV。     

新城疫病毒山东强毒株的分离鉴定

从山东流行烈性传染病的鸡群中分离出7株具有血凝活性的病毒，该7株病毒的血凝活性均能被新城疫La Sota株标准阳性血清所抑制，但病毒不能被中和，仍能致死鸡胚。经分离鉴定，分离毒均为新成疫病毒株。通过鸡胚半致死量（ELD50）、最小致死量致鸡胚的平均时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内致死指数（ICPI）、6周龄雏鸡静脉致死指数（IVPI）、血凝解脱及血凝素稳定性等试验表明：7株分离病毒均为新城疫病毒强毒性，其毒力与标准强毒株F48E9株相似。     

鸽新城疫病毒野毒PB9601株的致病性研究

用不同方法测试了从新城疫患鸽分离到的新城疫病毒（ＮＤＶ）野毒ＰＢ９６０１株的致病性。结果,该毒株对１日龄ＳＰＦ雏鸡的脑内接种致病指数为２．００,对６周龄ＳＰＦ鸡静脉接种致病指数为０．００;该毒株对６周龄左右鸽有很强的致病性,有的血清中已有一定量的抗鸽ＮＤＶ抗体;经ＳＰＦ鸡胚传１３代的尿囊液病毒对鸽的半数致死量约为１２个ＴＣＩＤ５０。由此认为,ＰＢ９６０１株ＮＤＶ是对鸡致病性很弱但对鸽呈高度致病性的毒株,可作为国内鸽ＮＤＶ强毒的参考株。     

传染性法氏囊病病毒致弱毒株的培育及其遗传稳定性检测

隆化病毒株GX-IBDVE10C25Cl5为研究对象,将此毒株通过鸡胚成纤维细胞(CEF)连传25代。通过对克隆化毒株1、5、10、15、20、25代次传代毒TCID50(0.1ml)的测定及对41日龄的SPF鸡的致病性试验,结果表明克隆化毒株不同代次传代毒致病力逐代降低,从15代毒开始免疫器官指数、病理组织学变化与健康对照鸡相比差异不显著,由此证明此毒株已经被驯化为弱毒株,并且随着传代代次的增加遗传性能稳定。该弱毒株有望为控制vvIBDV的感染提供一条新的途径。     

鹅副粘病毒病的防制

1 病原 该病原为副粘病毒,能够引起10日龄SPF鸡胚死亡,鸡胚尿囊液具有较高血凝效价(达210左右),并能被康复鹅血清特异抑制.传代毒株接种鹅胚,可在48小时致死鹅胚,尿囊液血凝效价达210,病毒不能致死鸭胚,但能从病料中回收到病毒. 2流行特点 各种年龄的鹅均有易感性,年龄越小发病率越高,对10日龄以内的雏鹅具有高度的致死性,感染后其病死率可高达100％;11 ～15日龄雏鹅感染后病死率也高达90％以上.随着鹅群日龄的增长,发病率和死亡率下降.产蛋鹅群感染本病后,除了发病死亡外,产蛋率大大下降.     

IBDV超强毒GX8/99株的细胞适应毒和鸡体传代毒的致病性和VP5基因的比较

传染性法氏囊病病毒(Infectious Bursal Diseas Virus,IBDV)的超强毒株GX8/99经在鸡胚成纤维细胞(CEF)上连续盲传23代后,细胞适应毒株GXC23时鸡的致病性显著减弱,对4～6周龄SPF鸡的致死率从85%～90%减为0～5%.GXC23在96孔细胞培养板上经2次无限稀释法后得到3个克隆病毒.经SPF鸡回传20代后,相应的毒株GX-2820、GX-4820、GX-5820对SPF鸡的致死率仍维持在0～5%.序列比较表明,GX8/99在传代过程中,其细胞适应毒GXC23有8个碱基突变,其中5个碱基突变导致了氨基酸改变.bp#2 T→C突变,导致传代毒ORF中的起始编码子后移了4个氨基酸.而3个克隆化病毒回鸡20代后致病性不变,这几个位点也保持不变,且与3个疫苗株完全一致.进一步分析表明,有4个超强毒株和4个强毒株的VP5基因的5个位点与GX8/99原始毒相同,而另3个超强毒及6个强毒株与细胞适应毒GXC23一致.这些结果表明,超强毒GX8/99在细胞传代过程中VP5基因上5个氨基酸的变异主要与适应细胞培养相关而与致病性无关.     

1株鸽Ⅰ型副黏病毒的分离与鉴定

本试验采集病死鸽临床样品,用SPF鸡胚接种传代分离病毒后,通过血凝（HA）与血凝抑制（HI）试验、RT-PCR及F基因部分片段测序与分析对分离株进行鉴定,并通过测定鸡胚平均死亡时间（MDT）、1日龄雏鸡脑内接种致病指数（ICPI）和动物回归试验评估分离株的毒力和致病性。结果表明,从病鸽组织病料中分离获得1株鸽Ⅰ型副黏病毒（PPMV-1）,命名为GXP120012。分离株GXP120012的F基因裂解位点112－117位的氨基酸组成为R-R-Q-K-R-F,符合强毒株特征;GXP120012与PPMV-1参考毒株pi/CH/LLN/110713的核苷酸序列同源性高达98.9%,并处于同一遗传分支,基因型为Ⅵ型。该分离株的MDT为102 h,ICPI为0。动物回归试验发现,分离株GXP120012对鸽具有较强的致病性,而对鸡没有致病力。本试验结果为今后鸽新城疫的分子流行病学研究和疾病防控提供理论依据。     

新城疫病毒强毒株的分离与鉴定

从发病率为１００％、病死率为９７％的鸡群中分离到１株病毒。该病毒凝集鸡红细胞的作用可被新城疫标准阳性血清所抑制,证明所分离的毒株为新城疫病毒。鸡胚半数致死量、最小致死量致死鸡胚的平均时间、１日龄雏鸡脑内致死指数、６周龄雏鸡静脉致死指数、血凝解脱及血凝素热稳定性等试验表明,分离毒为新城疫病毒强毒株,其毒力比标准强毒Ｆ４８Ｅ８株还强。血凝抑制试验和中和试验表明,分离毒的血凝性与Ｆ４８Ｅ８相同,但中和特性与Ｆ４８Ｅ８有较大差异     

传染性法氏囊病病毒致弱毒株的培育及其遗传稳定性检测

隆化病毒株GX—IBDVE10C25C15为研究对象,将此毒株通过鸡胚成纤维细胞（CEF）连传25代。通过对克隆化毒株1、5、10、15、20、25代次传代毒TCID50（0．1m1）的测定及对41日龄的SPF鸡的致病性试验,结果表明克隆化毒株不同代次传代毒致病力逐代降低,从15代毒开始免疫器官指数、病理组织学变化与健康对照鸡相比差异不显著,由此证明此毒株已经被驯化为弱毒株,并且随着传代代次的增加遗传性能稳定。该弱毒株有望为控制vvIBDV的感染提供一条新的途径。