胚胎干细胞在遗传育种中的应用

一、胚胎干细胞的定义及来源 胚胎干细胞（Embryonic stem cell．ESC）是指极早期的胚胎细胞．也就是受精卵分裂至少达16．32个细胞时期的胚胎（又名桑椹胚）及分裂球。此时若将每个细胞分开．每个细胞都能发育成一个完整的胚胎．这些细胞组成的群体称为“内细胞团（Inner cell mass）”．胚胎千细胞便是由此分离培养建系的．这时的内细胞团尚未决定今后生长发育的走向。内细胞团在形成人的内、中、外三个胚层时开始分化．每个胚层将分别分化成个体的各种组织器官。     

小鼠胚胎计数方法的研究及应用

胚胎细胞计数是评定胚胎活力,检验胚胎体外操作方案和培养效果的常用方法。实验以昆明小鼠体内发育胚胎和体外聚合囊胚为实验材料,对几种细胞的计数方法及应用进行了详细的研究。结果表明:（1）低渗压片法的实验效果最佳。（2）根据形态学观察,结合细胞计数,可以把小鼠8-细胞以后胚胎划分为:8-细胞晚期[细胞数目为（11.9±0.65）个];同一时间收集的桑椹胚和早期囊胚细胞数目相似;不同时间收集的囊胚细胞有明显差异。（3）细胞计数分析表明:8-细胞聚合胚发育形成聚合囊胚时,其细胞数目未发生调整。     

犬间充质干细胞在兽医临床的应用探析

近些年来,随着再生医学和组织工程的发展,干细胞在兽医临床中的应用已成为研究热点。干细胞是具有多重分化潜能的自我复制细胞。根据干细胞所处的发育阶段,可分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞来源于囊胚的内层细胞团,而成体干细胞则起源于内胚层、中胚层或外胚层的组织。间充质干细胞(MSC s)是来源于发育早期中胚层和外胚层的一种多能干细胞,最初在骨髓中被发现。     

昆明小鼠内细胞团和滋胚层细胞注入去核2-细胞胚的核移植研究

采用核移植技术将单个细胞注入去核2-细胞卵裂球中,比较来自于囊胚的内细胞团(ICM)和滋胚层细胞(TE)产生孕体或嵌合体的发育潜力。用TE和ICM重构胚胎的发育潜力,主要取决于注射hCG后从输卵管收集到的2-细胞胚胎的时间。在注射hCG后38～42 h和43～46 h收集得到的2-细胞胚胎,其重构胚胎仅仅能够发育到4-细胞期。注射hCG后48～51 h收集得到的2-细胞胚胎,重构后发生卵裂的胚胎比率显著提高,有少部分会发育到囊胚期。用诺考达唑(Nocodazole)处理这些重构胚,发生卵裂的胚胎比率会显著提高,并且有部分重构胚发育到囊胚阶段。将这些囊胚移植到受体鼠中,在其妊娠中期未检测到供体核的出现。用ICM和TE进行重构得到的嵌合2-细胞胚胎,其体外发育潜力有限,本试验中也未得到嵌合孕体。     

胚胎干细胞在生物技术中的研究进展

胚胎干细胞包括来自囊胚内细胞群的ES细胞和来自胚胎原始生殖嵴的EG细胞,其中ES细胞维持不分化传代培养已达80代。由于这些细胞具有高度复制能力及多向性分化潜能,近年来的研究使人们对胚胎干细胞的培养条件、诱导分化及其应用前景,以及当前研究方面存在的主要问题有了进一步的认识。     

Oct—3与哺乳动物发育起始的调控

哺乳动物发育生物学家一直在寻找在由受精卵发育成胚胎过程中起作用的调节蛋白,以确定哺乳动物与果蝇发育调控基因的对应物。现已确定哺乳动物的这种发育调控基因是在原肠胚形成之后表达的,即,在多能性胚胎干细胞发育成三个胚层之后表达的。在哺乳动物发育过程中更早期活性调节基因方面,最近的研究集中于未分化的,而不是不     

人胚胎原始生殖细胞的原代培养

从5－9周人胚胎生殖嵴中消化分离原生殖细胞（PGC），将其置于经过丝裂霉素C处理过的单层小鼠胚胎成纤维细胞（PMEF）饲养层上培养。结果，经过培养形成的克隆以及克隆的生长方式基本符合小鼠胚胎干细胞（ES）的特性，表现为细胞核大，细胞排列紧密，界限不清，集落边缘可见分化的成纤维细胞等；将其接种于裸鼠皮下，经过29d生长，得到具有3个胚层组织结构的畸胎瘤。     

胚胎干细胞的定向诱导分化及其应用前景

胚胎干细胞(embryonic stem cell,ES细胞)主要来自于胚胎发育早期囊胚中内细胞群(i nner cel l mas s,I CM),具有无限增殖、自我更新和多向分化的特性。理论上可以诱导分化为机体中200多种细胞,可作为细胞移植、组织替代,甚至器官克隆的细胞供体,为将来治疗人类诸多难治性疾病提供细胞来源。本文简述了胚胎干细胞的诱导分化方法、定向分化的一些细胞种类以及其应用前景。     

细胞松弛素B对猪孤雌胚胎和体外克隆胚胎发育能力的影响

为探讨细胞松弛素B（cytochalasin B,CB）对猪孤雌胚胎和克隆胚胎发育能力的影响,本研究通过在猪体外胚胎培养基中添加不同浓度CB以及不同孵育时间的处理,筛选出CB对猪早期胚胎发育的最适浓度和最佳孵育时间,同时通过Hoechst33342染色检测猪体外囊胚孵化期的细胞数差异,进一步研究CB对孤雌胚胎和克隆胚胎发育的影响。结果显示,培养基中添加CB浓度为7.5 μg/mL时孤雌胚胎和克隆胚胎的卵裂率分别为85.00%和90.23%,囊胚率为35.68%和42.58%,均显著高于其他各组（P < 0.05）;采用7.5 μg/mL CB处理电激活后的孤雌胚胎和克隆胚胎,孤雌胚胎孵育4 h组的卵裂率（83.80%）和囊胚率最高（35.39%）,与其他各组差异显著（P < 0.05）,而克隆胚胎孵育6 h组的卵裂率（83.98%）和囊胚率最高（55.62%）,与其他各组差异显著（P < 0.05）。此外,Hoechst33342染色结果显示,未添加CB处理的孤雌胚胎在囊胚孵化期的细胞平均数为28个,CB处理组的孤雌胚胎和克隆胚胎细胞平均数分别为36和52个,处理组和未处理组细胞数差异显著（P < 0.05）。结果表明,猪体外孤雌胚胎用7.5 μg/mL CB 处理4 h可获得较高的卵裂率和囊胚率;体外克隆胚胎用7.5 μg/mL CB 处理6 h卵裂率及囊胚率最高,且囊胚期内细胞团细胞总数最多。CB处理有利于体外胚胎早期发育,提高克隆胚胎移植受孕率。     

胚胎干细胞研究进展

胚胎干细胞（Embryonic stem cells,ES细胞）是一种从早期胚胎的囊胚内细胞团（Inner Cell Mass,ICM）细胞或胎儿原始生殖细胞（primordial germ cells,PGCs）经分离、     

T细胞早期分化及抗原识别受体表达研究进展

Ｔ细胞早期分化是指来自骨髓处于发育分化中的不成熟Ｔ细胞，在胸腺内经历筛选，发育成不同表现型分化群，仅有少数成长为免疫功能Ｔ细胞。其间，由前体细胞发育至具备免疫活性功能细胞的过程，以免疫细胞编程性死亡（ｐｒｏｇｒａｍｍｅｄｃｅｕｄｅａｔｈ）或细胞凋亡（...     

胚胎干细胞及种系嵌合体的研究进展

胚胎干细胞是着床前的囊胚内细胞团或早期胎儿的原始生殖细胞经体外分化抑制培养建立的多能性细胞系 ,具有与胚胎细胞相似的形态特征和分化潜能 ,体外培养时保持未分化状态 ,可以传代增殖。改变维持胚胎干细胞不分化的培养条件 ,胚胎干细胞可自发分化成多细胞结构。在一定诱导下 ,胚胎干细胞可向多个方向分化 ,并生成多种功能细胞。胚胎干细胞注入到胚泡期胚胎或与桑椹期胚胎聚合 ,可以参与包括性腺在内的各种组织的嵌合体的形成。胚胎干细胞在细胞分化与调控 ,胚胎发育 ,遗传病 ,肿瘤 ,免疫和组织或器官移植等研究中显示着广泛的应用前景。而种系嵌合体的获得是实现 ES细胞途径的决定步骤 ,低的种系嵌合率则是制约 ES细胞应用的关键。提高供体 PGCs在受体生殖腺中的比例 ,缩短 ES细胞的体外培养时间 ,以及注入早期发育阶段的受体胚胎等都能提高种系嵌合率。文章从多个方面综述了胚胎干细胞的最新研究成果 ,并着重以禽类 ES细胞为例论述了种系嵌合体的检测方法 ,种系嵌合率的影响因素以及提高种系嵌合率的方法     

影响体外培养兔胚发育和兔类ES细胞分离的若干因素

本试验系统地比较了影响兔囊胚体外培养和免类ＥＳ细胞系分离的几个主要因素。结果表明，３种不同糖浓度（４．５，１．０，０．２ｇ／Ｌ）在４８ｈ内对胚胎贴壁均无显著影响。在高糖ＤＭＥＭ中，早期胚胎内细胞团（ｉｎｎｅｒｃｅｌｌｍａｓｓ，ＩＣＭ）增殖速度最快，分化也快；超低糖组，ＩＣＭ增殖缓慢，分化出现时间较晚；低糖组，ＩＣＭ既能保持较快的增殖速度，又能维持较长时间的未分化状。高糖组和低糖组的ＥＳ细胞样集落的传代能力相似，可达６～７代，超低糖组中不超过２代。胰岛素能促进ＩＣＭ的增殖，并可提高传代过程中ＥＳ细胞样克隆的形成率。在小鼠胚胎原代成纤维细胞（ＭＥＦ）和一种经白血病抑制因子转化了的小鼠成纤维细胞系（ＳＮＬ）上，ＩＣＭ都能维持较快的增殖速度，在家兔胚胎原代成纤维细胞（ＲＥＦ）中ＩＣＭ增殖较慢，无饲养细胞条件下，ＩＣＭ存活率低，生长状况不佳。传代能力，ＲＥＦ要比ＭＥＦ和ＳＮＬ低，且主要形成上皮样集落。作者根据以上实验结果认为，用低糖ＤＭＥＭ为基本培养基，再加入胰岛素，在ＭＥＦ或ＳＮＬ上培养切割胚胎和连续传代的技术路线是较为可行的。     

动物胚胎干细胞及其研究进展

胚胎干细胞（embryonic stem cells，ES）是指从桑椹胚或附植前囊胚内细胞团分离的多潜能细胞，它具有体外培养无限增殖、自我更新和多向分化的特性。下面介绍几种常见的动物胚胎干细胞及它们的新近研究进展。     

猪囊胚体外持续发育培养体系主要影响因素的研究

本研究旨在探索猪囊胚体外持续发育的关键影响因素，为构建支持猪胚胎体外发育至三胚层分化阶段的培养体系奠定基础。采用孤雌激活后6 d的猪囊胚进行体外持续培养，通过检测分析发育至8 d的猪孤雌囊胚的形态学特征和基因表达情况，系统评价PZM-3、Advanced DMEM/F12和KnockOutTMDMEM/F12基础培养体系，以及胎牛血清（Fetal Bovine Serum,FBS）、血清替代物（Knockout Serum Replacement,KSR）、L-谷氨酰胺（L-Glutamine）和胰岛素-转铁蛋白-硒-氨基乙醇（Insulin-Transferrin-Selenium-X,ITS-X）等成份对猪囊胚体外持续发育的作用，建立猪囊胚体外持续发育培养体系；通过TUNEL和免疫荧光方法检测该体系对猪囊胚的影响。结果表明：AKGI(Advanced DMEM/F12组合添加5%KSR、4 mmol/L L-Glutamine和1×ITS-X)为猪囊胚体外持续发育最适培养体系，可增加囊胚直径和囊胚细胞数（P<0.05），降低凋亡细胞比例（P<0.01），增加内细胞团（I...     

哺乳动物胚胎干细胞研究进展

胚胎性干细胞包括从动物早期胚胎的卵裂球、囊胚内细胞团细胞分离建系的胚胎干细胞（embryonic stem cell,ESC）、从胚胎生殖嵴原始生殖细胞（primordial germ cell,PGC）分离建系的胚胎生殖细胞（embryonic germ cell,EGC）和来源于畸胎瘤中的胚胎性癌细胞（embryonic carcinoma cell,ECC）。ESC具有发育分化的多潜能性和无限的自我更新能力,能在体外长期培养并具有向机体各种组织细胞分化的潜能。所以,被广泛应用于胚胎发育与细胞分化调控的研究,作为修复器官与器官移植的种子细胞,并可用于转基因动物的生产。作者主要综述了干细胞的最新研究进展,ESC培养扩增诱导机制,定向分化方法。     

胚胎干细胞源神经胶质前体细胞是髓鞘质移植的一种来源

自我更新、全能的胚胎干(ES)细胞可为移植提供几乎无限的供体来源。现已设计了一种可以在体外生成来自ES细胞的少突胶质细胞和星形胶质细胞前体,在人髓鞘质病的大鼠模型上进行的移植表明ES细胞源的前体同宿主神经元相互作用,在大脑和脊髓轴突作用更为明显。因此,ES细胞可为神经移植提供一种有价值的特异性体细胞前体的来源。源于囊胚阶段的内细胞群的ES细胞是全能干细胞,它们能分化为所有组织和细胞类型。最近的发现扩展了ES细胞的潜在作用,包括从人胚胎组织中分离出ES细胞,在绵羊和小鼠成体组织中将细胞核移入去核卵细胞,可产生同一…     

胚胎干细胞定向分化研究进展

胚胎干细胞是一类从早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞分离和克隆出的 ,具有自我更新和发育全能性并产生分化后代能力的早期细胞 ,可分化形成各种组织类型。在合适的条件下 ,胚胎干细胞可发育成造血细胞、神经细胞、肌细胞等各种细胞。探索胚胎干细胞分化机理及其体外定向诱导分化为其他组织细胞的条件 ,就可以通过改变体外培养条件来探索胚胎干细胞向不同组织细胞分化规律 ,对揭开动物个体发育之迷 ,具有极其重要的理论意义 ;也可为细胞替代治疗、器官移植、建立药物筛选模型以及进行发育及细胞生物学的研究奠定基础。本文仅就胚胎干细胞定向分化的理论基础 ,定向分化研究现状作一综述     

犬低分化鳞状细胞癌的病理特点

运用病理组织学方法,观察了3例犬低分化鳞癌的病理特点,结果显示,在犬低分化鳞状细胞癌组织中,癌细胞类似于棘细胞、基底细胞,癌组织中形成癌腔,在一些癌腔内可见角化不全细胞,无癌珠形成。癌腔是低分化鳞状细胞癌的病理特点之一,可作为诊断低分化鳞状细胞癌的依据。     

剖腹手术取出牛双头畸形胎

剖腹手术取出牛双头畸形胎罗春树（福建省连城县文亨畜牧兽医站３６６２０２）双头犊系胚胎由内细胞群发育成三胚层时发育异常所致，为少见病例。笔者于１９９０年元月在文川乡岗尾村遇到１例，经手术取出。现简述如下。黄牛，３岁，主诉产期已到，早上出栏时已有分娩症状...