蛋白核小球藻无菌培养体系的建立

[目的]为了建立蛋白核小球藻无菌培养体系。[方法]选取卡那霉素、链霉素、庆大霉素、氨苄青霉素、潮霉素和头孢霉素6种常用抗生素,比较蛋白核小球藻的除菌和纯化效果。同时,对比蛋白核小球藻对不同浓度的卡那霉素和潮霉素的耐受性以及单独使用卡那霉素和潮霉素的多次除菌效果。[结果]卡那霉素和潮霉素对涂布带菌藻液的抑菌和除菌效果明显,其他4种抗生素的抑菌效果较差;小球藻对不同抗生素的耐受性不同,蛋白核小球藻对潮霉素敏感,50 mg/L就可以明显抑制其的生长,而对卡那霉素的敏感性要低得多,在200 mg/L时其生长受到显著抑制。[结论]考虑到高浓度卡那霉素对蛋白核小球藻生长的抑制作用,最终确定用50 mg/L卡那霉素连续3次除菌处理的方式建立蛋白核小球藻的无菌培养体系;同时,测得纯化培养的蛋白核小球藻藻液在685 nm处具有最大吸收峰,在此波长下小球藻的细胞浓度与吸光值呈线性相关,可用A685来估测蛋白核小球藻浓度。     

小球藻培养条件的优化

［目的］优化小球藻培养条件,以提高小球藻生物量。［方法］在无菌培养条件下,对影响小球藻生长的主要营养因素Na2CO3、NaNO3、KH2PO4和MgSO4等进行了单因素和正交试验优化。［结果］微量元素和pH值对小球藻的生长有非常明显的影响,优化培养基配方为：Na2CO30.02g/L,NaNO32.0g/L,KH2PO40.02g/L,MgSO40.1g/L,环境条件为pH值6.0。［结论］该研究为扩大培养小球藻提供依据。     

埃氏小球藻对11种抗生素的敏感性

为了探讨埃氏小球藻(Chlorella emersonii)株系SXND-12对11种抗生素的敏感性,采用分光光度法研究了氯霉素、潮霉素、红霉素、利福平霉素、卡那霉素、硫酸新霉素、头孢霉素、大庆霉素、氨苄霉素、羧卞霉素、链霉素等11种抗生素对埃氏小球藻生长的影响,从而来确定分离、纯化藻株时对藻细胞无害并能抑制伴生杂菌生长的抗生素浓度。结果表明,埃氏小球藻对头孢霉素、氨苄霉素、羧卞霉素、硫酸新霉素敏感性较弱,对利福平霉素较为敏感,200μg/m L(致死剂量)即0.243 mmol/m L(致死浓度)时,在固体培养中抑制了埃氏小球藻的生长;对潮霉素、氯霉素、红霉素、链霉素、大庆霉素、卡那霉素非常敏感,在固体培养中的致死剂量分别达到20μg/m L(0.101 mmol/m L),50μg/m L(0.155 mmol/m L),30μg/m L(0.041 mmol/m L),50μg/m L(0.086 mmol/m L),50μg/m L(0.105 mmol/m L),100μg/m L(0.206 mmol/m L)。研究可为筛选出小球藻基因工程藻株的筛选试剂、诱变筛选的初筛试剂、建立无菌体系的选择试剂奠定基础。     

杜氏盐藻无菌体系的建立

为建立杜氏盐藻无菌培养体系,试验选用卡那霉素、头孢霉素、氯霉素、链霉素、潮霉素和氨苄青霉素6种抗生素,分别测试盐藻细胞的抗生素耐受性和对盐藻藻液的除菌效果。结果表明,盐藻对氯霉素耐受性低,对头孢霉素和氨苄青霉素的耐受性较高;氯霉素、头孢霉素和氨苄青霉素单独处理对盐藻藻液的抑菌效果明显,卡那霉素、潮霉素和链霉素单独处理的抑菌效果较差;抗生素组合处理对盐藻藻液的除菌效果更强;应用50μg/mL氯霉素、100μg/mL氨苄青霉素和100μg/mL头孢霉素组合,经3次除菌处理和5次继代培养,建立了盐藻无菌培养体系。     

火鹤花离体培养无菌体系建立技术的研究

研究了火鹤花(Anthurium and raeanum)外植体、基本培养基类型、叶片生理部位、植物生长调节剂、光照条件等因素对其愈伤组织诱导的影响。结果表明,叶片的诱导率最高达97.5%,污染率最低,仅为4.9%;诱导愈伤组织发生率及发生速度依次为:1/2MS培养基>MS>N6>B5>White,幼叶>中龄叶>老叶,不含叶缘叶片>含叶缘叶片。愈伤组织在1/2MS+6-BA1.0 mg/L+NAA0.2 mg/L中长势最好;在1/2MS+6-BA2.0 mg/L+IBA0.1 mg/L中生长旺盛,不定芽健壮,可进一步生根培养;每日12h光照下愈伤组织发生率最高。     

齿瓣石斛无菌萌发条件优化研究

为优化齿瓣石斛无菌萌发条件,通过研究影响齿瓣石斛种子萌发的因子,探寻适合齿瓣石斛种子最优萌发的培养基及培养条件。结果表明:齿瓣石斛种子无菌培养的适宜培养基为MS培养基,蔗糖浓度为20g/L,浓度过低,萌发苗生长差,玻璃化严重;胚龄对齿瓣石斛的萌发率有重要影响,适宜的种子胚龄为10～11个月,胚龄时间短萌发率低;胚龄时间过长灭菌时蒴果易开裂,污染率大;添加0.3mg/L NAA,可缩短萌发时间,种子的萌发率、幼苗的成苗率和生长情况相比对照较好;不同培养条件萌发效果有明显的差异。适宜的萌发条件可促进齿瓣石斛萌发,提高萌发率,萌发后幼苗生长状况较好。     

小球藻产油脂培养条件的优化

为了更好的开发利用小球藻,探讨了光照强度、pH 值及氮盐、磷盐、铁盐质量浓度等因素对小球藻油脂产量的影响,并采用单因素和正交试验对小球藻的培养条件进行优化。结果表明,小球藻的最佳培养条件为光照5000 lx、pH 值6、氮盐质量浓度100 mg/L、磷盐质量浓度160 mg/L、铁盐质量浓度100 mg/L,在此条件下,小球藻油脂产量最大,为615·12 mg/L。     

闽东野生金线莲无菌体系建立与优化研究

[目的]研究闽东野生金线莲无菌体系建立的最佳培养基配方。[方法]以闽东野生金线莲茎段为试材,通过正交试验得到无菌的诱导芽体,通过萌发的芽体增殖建立金线莲的无菌培养体系,筛选出闽东野生金线莲快繁的最佳培养基配方。[结果]闽东野生金线莲茎段诱导芽体萌发最适培养基配方为MS+6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+KT 1.5 mg/L,与其他配方之间具有极显著差异;芽继代增殖培养基配方为MS+6-BA 2.0 mg/L+NAA 0.2 mg/L+KT 1.0 mg/L,且与其他处理间差异极显著。[结论]诱导芽时应适当提高一定范围内细胞分裂素类浓度;芽增殖时应适当降低细胞分裂素浓度,细胞分裂素与生长素比值为10倍时有利于芽增殖生长。     

4株小球藻缺陷培养条件的优化及藻株CE14的分子鉴定

通过采集海口周边热带淡水水样,用平板分离纯化法获得158株纯藻,选择其中4株（CE1,CE14,CE18,CE31）经初步鉴定的小球藻进行缺陷培养（HSM,HSM-N,HSM—S,HSM-P4种培养基培养）及油脂含量测定,结果显示：N和S2种元素缺乏对这4株小球藻生物量影响较大,且使这4株小球藻的含油量显著高于在HSM培养基培养的含油量;P元素的缺乏对这4株小球藻生物量影响较小,仅使CE1和CE18的油脂含量显著上升。CE14生长迅速,油脂含量高,其在HSM-S培养基中的油脂含量高于其他3种培养基,占细胞干重的86．55％。对CE14进行18S rDNA鉴定,得出CE14藻株属于绿藻门,绿藻纲,绿球藻目,小球藻科,小球藻属,与Chlorella vulgaris的18S rDNA基因的相似度为99％。     

番木瓜组织培养无菌体系的建立

试验以田间成龄番木瓜的顶芽和侧芽为基本试材,旨在探索出适宜于番木瓜顶芽与侧芽诱导培养的外植体消毒方法,建立起番木瓜离体快繁的无菌体系。     

饲料级啤酒酵母菌培养条件的优化

通过实验室和中等规模生产车间试验,对饲料级啤酒酵母的培养条件进行筛选、生产工艺进行优化,进而选择形成优良的酵母菌生产工艺,生产出质优价廉的饲料级酵母培养物。结果表明,酵母菌最佳液体培养基组成为2％的葡萄糖、1．8％的麦芽糖、0．5％硫酸铵、0．5％氯化钾、0．5％硫酸镁、0．5％氯化钠和土豆液,最佳培养时间为48h。在进行酵母菌的固体培养时,加豆汁量为投料量的60％,菌种的接种量为2％,培养温度为31℃,培养时间为72h时,酵母菌的繁殖效果最好,可达83亿／g。     

玫烟色拟青霉固体培养基筛选及培养条件研究

玫烟色拟青霉IfB01菌株在25℃、RH85％下分别在4种单一培养基(大米、黄豆粉、玉米粉、小麦粉)和3种复合培养基(小麦粉∶麦麸1∶1、黄豆粉∶麦麸1∶1、玉米粉∶麦麸1∶1)培养,以产孢量为指标筛选出较佳的基础培养基配方.通过正交试验验证加入不同浓度的碳源、氮源优化的基础培养基,筛选较佳的固体培养基配方为:玉米粉培养基+0.2％KNO3+0.1％葡萄糖+水(1∶1.5=物料∶水质量比);通过单因素试验,确定菌株较佳的培养条件是28℃、光照黑暗交替培养14h∶10h、产孢前期湿度为80％、产孢后期湿度为50％.     

牛胚胎体外培养体系的优化

将体外受精后的牛卵母细胞随机分组进行培养,比较了胎牛血清(FBS)和发情后7 d牛血清(E 7BS)、不同培养液(CR 1+3 m g/mL BSA、SOF+3 m g/mL BSA和SOF+0.1 m g/mL PVA)、共培养体系和不同培养液体积(0.1,0.5和2.0 mL)对胚胎发育的影响,优化了牛胚胎体外培养体系,并对该体系的稳定性进行了检验。结果表明,优化后的牛胚胎培养体系为:前48 h用CR 1+3 m g/mL BSA培养液,48 h后用CR 1+体积分数10%E 7BS培养液培养120 h,培养液体积为0.5 mL,并且采用共培养,受精后颗粒细胞保留48 h。用该培养体系培养的牛胚胎发育良好,平均囊胚率为44.9%,表明该优化培养体系较稳定。     

万寿菊雄性不育系离体快繁体系的建立

[目的]建立色素万寿菊雄性不育系离体快繁体系,为开展万寿菊育种研究和杂交制种打下基础.[方法]以4个色素万寿菊母本资源(B1-1、B1-3、B1-4和Bnm)雄性不育株的叶片和茎段为外植体,以不同生长调节剂组合对其进行愈伤组织诱导、不定芽分化及生根培养,建立适宜色素万寿菊离体快繁的技术体系.[结果]以叶片为外植体的各色素万寿菊雄性不育株再生能力均较以茎段为外植体的再生能力强,其愈伤组织诱导率和不定芽分化率排序均为B1-3>B1-1>Bnm>B1-4;适宜B1-3和B1-1叶片愈伤组织诱导的培养基为MS+2.0 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA),诱导率分别为99.2%和95.3%;适宜茎段愈伤组织诱导的培养基为MS+2.0 mg/L 2,4-D+2.0 mg/L 6-BA,其中B1-3和B1-1的诱导率较高,分别为81.4%和80.1%.萘乙酸(NAA)与玉米素(ZT)组合诱导4个不同色素万寿菊的愈伤组织不定芽分化率普遍高于NAA与6-BA组合,其中B1-3叶片和茎段的愈伤组织在MS+1.0 mg/L NAA+3.0 mg/L ZT中的不定芽分化效果较佳,分化率分别达72.5%和57.7%.适宜色素万寿菊不定芽生根的培养基为1/2MS+0.5 mg/L NAA,其中B1-3和Bnm的生根率均达100.0%;再生植株移栽成活率达95.0%.[结论]叶片是诱导色素万寿菊雄性不育系植株再生的良好材料,B1-3是获得色素万寿菊离体培养雄性不育植株最佳的母本资源;建立的色素万寿菊雄性不育系离体快繁体系可为其育种研究和杂交种种子生产提供资源保障.     

三倍体漆树组织培养无菌体系建立技术探究

为建立三倍体漆树组织培养无菌体系，以当年生三倍体漆树幼嫩茎段为外植体，通过植物组织培养方法，找出三倍体漆树幼嫩茎段最适宜消毒时间、方法以及最佳腋芽诱导培养基，为三倍体漆树无性繁殖及应用提供理论依据。结果表明：三倍体漆树幼嫩茎段消毒最佳时间和方法为：75%乙醇消毒1 min，0. 1%升汞消毒4 min。三倍体漆树腋芽诱导最佳培养基为： MS + 0. 3 mg / L 6-BA + 0. 2 mg / L ZT + 0. 3g / L活性炭。     

圆果黄麻成熟叶片总DNA提取及SRAP扩增体系的建立与优化

采用改良的CTAB法从圆果黄麻成熟叶片中提取基因组DNA,对DNA进行电泳检测、含量测定和SRAP分析,并对黄麻SRAP-PCR反应体系中主要影响因子进行了优化,建立了最佳反应体系.结果表明,改良的CTAB法能够提取高质量的DNA,DNA纯度和完整性都较好,经紫外分光光度计测定,D260nm/D280nm均在1.7-1...     

正交试验优化菊花组织培养条件

通过菊花无菌苗体系建立、愈伤组织诱导、不定芽分化、不定根诱导试验,发现用0．2％HgCl2对叶片、茎尖消毒3～4min建立无菌苗体系较好;2,4-D0．5mg／L、6-BA0．5mg／L对愈伤组织的诱导较好;生长素NAA0．1mg／L、IBA0．1mg／L、2,4-D0．1mg／L和细胞分裂素6-BA1．0mg／L、ZET1．0mg／L、2-ip1．0mg／L对不定芽分化形成均有较好效果。     

巨菌草根内生固氮菌Klebsiella variicola的分离、鉴定及培养条件的优化

采用Ashby和Nfb无氮培养基从巨菌草成熟期根部分离得到1株具有高效固氮性能的内生固氮菌GN02,其在分离的菌落中所占比例最高,且酶活性较高.经16S rDNA序列鉴定,该菌株与克雷伯氏菌属各菌株同源性关系可达99%,结合其形态、生理生化特征,初步鉴定为变栖克雷伯氏菌(Klebsiella variicola).在含氮源的KP培养基中菌株GN02的生长情况明显优于无氮源的Ashby培养基.菌株GN02在KP培养基中的最优培养条件为:温度37.1℃,pH 5.6,蔗糖25.6 g·L~(-1),在此条件下其D_(600 nm)能达到1.48,比优化前提高了22.31%.响应面优化所得到的培养条件重复性好,准确、可靠.     

富铁酿酒酵母菌株的选育及其培养条件优化

【目的】分离鉴定高效富铁酿酒酵母菌株,优化其培养基组分和发酵条件。【方法】从果园根际土壤中分离选育耐铁酿酒酵母菌,对其进行形态学、生理生化分析和26 S rDNA基因序列分析鉴定;采用单因素试验,分别设置不同碳源种类(葡萄糖、蔗糖、乳糖、果糖、麦芽糖)、氮源种类(硫酸铵、酵母膏、蛋白胨、尿素)及不同质量浓度Fe²⁺(100,200,300,…,1 000,1 200,1 600,2 000μg/mL)、碳源(10,20,30,40,50,60,70,80,90 g/L)、氮源(无机氮源2,4,6,8,10,20 g/L;有机氮源4,8,12,16,20,24,28 g/L)、无机盐(MgSO₄·7H₂O 0.3,0.5,1.0,1.5,2.0 g/L;KH₂PO₄ 0.5,1.5,2.5,3.5,4.5 g/L)的培养基进行试验,探究不同培养基组分对酿酒酵母富铁能力的影响。采用单因素试验研究温度(26,28,30,32,34,36,38℃)、初始pH值(3.5,4.0,4.5,...     

Aldrin and dieldrin: loss under sterile conditions

After their application to sterile nutrient agar, both aldrin and dieldrin disappeared rather rapidly from the agar in glass-covered petri dishes. In most instances this disappearance was considerably retarded from agar inoculated with either fungi or bacteria. In the presence of microorganisms, aldrin was also epoxidized into dieldrin. Half of the applied aldrin volatilized from the agar during the first day of incubation; dieldrin volatilized more slowly and at a constant rate.