重组GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡生长性能的影响

胫骨软骨发育不良(TD)是在快速生长的肉鸡中常发的一种骨骼性疾病,给禽类养殖带来了严重的经济损失。试验在基础日粮中添加福美双,诱导产生TD肉鸡,然后分4次注射谷胱甘肽硫转移酶A3蛋白(GSTA3),探究谷胱甘肽硫转移酶A3蛋白(GSTA3)对于TD肉鸡生长性能的影响。结果表明,注射了GSTA3蛋白的TD肉鸡精神恢复快,增质量恢复快。试验结果证明重组外源GSTA3蛋白对TD肉鸡有促生长作用,可为TD肉鸡生长性能的恢复奠定理论基础。     

重组鸡Ex-FABP蛋白对福美双诱导的TD肉鸡血清中Bcl-2含量的影响

为研究细胞外脂肪酸结合蛋白Ex-FABP对胫骨软骨发育不良(TD)肉鸡血清中凋亡因子B细胞淋巴瘤因子2(Bcl-2)的影响,试验采用连续2 d饲喂含有福美双的日粮来诱导构建肉鸡TD模型,共设置4组正常日粮组(健康组)、4组添加福美双日粮组(福美双组)和1组空白对照组,然后注射Ex-FABP蛋白。结果表明,福美双组和健康组分别注射重组Ex-FABP蛋白后,血清中Bcl-2蛋白浓度相比福美双对照组、健康对照组和空白对照组显著升高。重组鸡Ex-FABP蛋白可能通过刺激机体血清中Bcl-2蛋白的表达,从而抑制软骨生长板细胞凋亡,以发挥治疗TD的作用。研究结果可为TD肉鸡的治疗提供新的思路和方法。     

重组GSTA3蛋白对福美双诱导的肉鸡TD中抗凋亡基因BAG-3表达的影响

【目的】肉鸡胫骨软骨发育不良(TD)是肉鸡常见的一种骨骼性疾病,研究重组GSTA3蛋白对福美双诱导的TD肉鸡软骨细胞中抗凋亡基因BAG-3表达的影响,为治疗TD提供新的思路和方法。【方法】将120羽1周龄肉雏鸡随机分为6组(编号为A、B、C、D、E、F组)。A、B、C组为基础日粮对照组,D、E、F组为添加福美双日粮诱导TD组。试验饲喂福美双2 d诱发TD,在添加福美双第1、3、5、7天,腿部肌肉注射重组鸡GSTA3蛋白和磷酸盐缓冲液,A组与D组注射(100μg·kg-1)磷酸盐缓冲液;B组与E组注射低剂量(100μg·kg-1)GSTA3;C组与F组注射高剂量(200μg·kg-1)GSTA3。试验历时23 d。添加福美双后1、2、4、6、10和15 d采集胫骨生长板。通过Real-time qPCR检测BAG-3基因的mRNA水平,利用免疫组化来检测BAG-3蛋白表达水平。【结果】Real-time qPCR结果显示,TD损伤修复期内,相比较于基础日粮对照组,福美双对照组肉鸡胫骨生长板中BAG-3mRNA的表达水平基本都显著上调(P<0.05);相比较于福美双对照组,E和F组在...     

重组鸡GSTA3蛋白对福美双诱导肉鸡TD的血清GST-α含量的影响

为研究重组鸡GSTA3蛋白对肉鸡TD抗氧化功能的影响,先构建肉鸡TD模型,即通过肌肉注射不同剂量(20,50μg/kg)的原核表达鸡GSTA3蛋白,运用ELISA技术检测血清中GST-α的含量。结果表明,与空白组相比,饲喂福美双第1,2,4天,血清GST-α的含量显著上升(P0.05),注射蛋白组与饲喂福美双组相比,试验第1天,GST-α的含量没有显著差异,试验第2,4天,GST-α的含量显著降低(P0.05),而高剂量组与低剂量组之间GST-α的含量无显著性差异。GSTA3可通过修复肝脏损伤增强其抗氧化能力,直接或间接调节软骨组织中软骨细胞在TD发生过程中的功能。     

肉鸡谷胱甘肽S-转移酶A3基因的克隆及蛋白的表达和纯化

[目的]谷胱甘肽S-转移酶A3(GSTA3)是GSTs超家族中α家族的一员,具有解毒功能,同时还参与抗氧化应激引起的信号通路调节,另外在类固醇和前列腺素的合成中也必不可少。[方法]本试验采用RT-PCR方法扩增肉鸡GSTA3基因,连接pZeroBack/blunk克隆质粒,再与表达载体pET-28a连接,并转入E.coli BL21(DE3)中获得pET-28a-GSTA3重组表达质粒,使用IPTG诱导其蛋白的表达,应用镍柱亲和层析法纯化蛋白,并对其进行SDS-PAGE鉴定,使用谷胱甘肽-S转移酶活性测定试剂盒对重组蛋白进行活性检测。[结果]试验成功构建重组表达质粒pET-28a-GSTA3,并在大肠杆菌中成功表达,其大小为29.6 kDa,与预期一致,并且表达的重组GSTA3蛋白具有生物活性。[结论]本试验成功获得高纯度的可溶性GSTA3融合蛋白,为其在家禽领域的进一步研究奠定了基础。     

IBDV超强毒株感染SPF鸡后法氏囊淋巴细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白动态表达的研究

 为证实传染性法氏囊炎超强毒SNJ93株感染SPF鸡后1～14 d内法氏囊淋巴细胞中Bcl-2、Bax蛋白的动态表达与淋巴细胞凋亡的关系。应用透射电镜观察、TUNEL法标记检测凋亡的淋巴细胞，用免疫组织化学方法检测Bcl-2、Bax蛋白。结果表明，感染后1～7 d可见到大量凋亡的淋巴细胞，其中感染后3～5 d最多。感染后1～9 d Bcl-2蛋白显著高于同时点的对照组（P<0.01）；感染后1～5 d Bax蛋白明显高于同时点的对照组，差异极显著（P<0.01）；感染后第7天高于同时点的对照组,差异显著（P<0.05）； Bcl-2/Bax比率在感染后第1天低于同时点的对照组（P<0.05）；3～5 d明显低于同时点的对照组(P<0.01)。SNJ93感染SPF雏鸡后1～7 d内法氏囊淋巴细胞会发生大量凋亡，Bcl-2/Bax能准确反映淋巴细胞的凋亡程度。     

喹乙醇对小鼠生精细胞Bax基因表达的影响

喹乙醇具有一定的蓄积毒性、遗传毒性和诱变性等毒理作用。试验用2%吐温-80将喹乙醇配成悬浊液,对小鼠进行灌喂,分别于4 d,8 d,12 d颈椎脱臼处死小鼠取其睾丸组织;采用免疫组织化学方法,检测喹乙醇对小鼠睾丸生精细胞凋亡调控基因Bax蛋白表达的影响,进而研究喹乙醇对小鼠睾丸生精细胞凋亡的影响。结果表明,Bax蛋白的表达随着药物浓度的升高而呈显著变化,即呈现一定的剂量—效应关系。     

高钼对小鼠肾脏细胞凋亡及Bax蛋白表达的影响

为探讨高剂量钼对小鼠肾脏细胞凋亡及Bax蛋白表达的影响,选用60只35日龄雌性昆明系小鼠,随机分成3组,每组20只,对照组、高钼Ⅰ组、高钼Ⅱ组饮水中分别添加0、200、400mg/L钼,连续染毒90d后取样,H.E染色检测肾脏组织结构,原位末端标记法检测肾脏细胞凋亡,免疫组化检测肾脏Bax蛋白表达。结果显示,高钼Ⅰ、Ⅱ组小鼠肾小管上皮细胞出现空泡变性、颗粒变性;高钼Ⅰ组、高钼Ⅱ组小鼠肾脏细胞凋亡率为2.25%、6.64%,均极显著高于对照组(P<0.01);高钼Ⅰ、Ⅱ组小鼠肾脏Bax蛋白表达增强,与对照组比较差异极显著(P<0.01)。细胞凋亡参与了高钼致小鼠肾脏损伤过程,其凋亡机制可能与高钼上调小鼠肾小管细胞Bax表达有关。     

饲粮中不同锌源及锌水平对固始鸡和AA肉鸡肝脏金属硫蛋白含量及基因表达的影响

为了研究肉鸡肝脏中金属硫蛋白(metallothionein,MT)含量和MT mRNA表达水平作为评定锌源生物利用率的有效性,在固始鸡和AA肉鸡饲料中添加不同水平的饲料级硫酸锌(ZnSO4·H2O)、氧化锌(ZnO)和氨基酸络合锌(ZnAA),分别测定了2、3、4、5和6周龄末肝脏中MT含量和MT mRNA的表达水平。结果表明:品种间肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平差异极显著,固始鸡高于AA肉鸡。锌源和锌添加水平对所测定指标产生显著影响,氨基酸络合锌显著高于硫酸锌,这两种锌源极显著高于氧化锌;随着锌添加水平增加,肉鸡肝脏中MT含量和MT mRNA表达水平提高,锌水平之间差异极显著。4周龄前,随着周龄增长,肝脏中MT含量和MT mRNA水平显著升高,而4周龄后随周龄显著降低。以肝脏中MT含量评定的锌源间相对生物利用率与以MT mRNA表达水平为指标评定的结果一致性较好,说明肝脏中MT含量和MTmRNA表达水平是评定锌源相对生物利用率的有效指标,相比较而言,MT含量受品种、周龄和锌添加水平的影响大于MTmRNA表达水平。     

重组融合蛋白最佳诱导表达条件的研究

[目的]对重组融合蛋白的最佳诱导表达条件进行研究。[方法]为提高IMPACT-CN系统的pTYB11载体重组融合蛋白的表达量,针对其表达所需适宜的诱导时机、诱导剂量、诱导时间、诱导温度、氨苄青霉素浓度、摇瓶装液量等培养条件,采用不同技术指标进行了平行发酵试验。[结果]表达产物的SDS-PAGE及Western-Blotting分析表明重组融合蛋白具有良好免疫原性。[结论]为以后的蛋白纯化诊断、用蛋白质生产诊断试剂盒及其临床应用奠定了基础。     

IAP对肉仔鸡生产性能的影响

将56只14日龄体重约350 g的AA雄性肉仔鸡按体重分为4组(n=14)腹腔注射胰岛激活蛋白(IAP),以研究IAP对肉仔鸡生产性能的影响。结果表明,给肉仔鸡分别腹腔注射0,0.5,1.0和2.0μg/只IAP,每只鸡4周的平均体增重分别为60.9±17.0,60.3±5.6,58.0±6.5和58.8±6.5 g/d,自由采食量分别为106.5±8.9,107.8±6.4,104.7±7.0和105.5±5.4 g/d,全净膛重分别为1360±69,1406±18,1393±37和1439±42 g/只,腹腔脂肪重分别为48±10,52±9,43±8和38±10 g/只,胸肌 腿肌重分别为620±47,645±32,657±35和688±42 g/只。各组血糖浓度分别为8.77±1.31,12.77±0.91,12.98±1.98和13.40±1.47 mmol/L,胰岛素浓度分别为10.77±1.67,13.81±3.67,15.54±3.53和13.73±5.25μU/mL,T3浓度分别为1.25±0.64,1.16±0.38,1.21±0.43和1.20±0.61 ng/mL,T4浓度分别为15.83±5.87,18.03±4.94,17.99±6.00和14.64±5.18 ng/mL。本实验表明,IAP对禽类也具有生物学作用,可同时提高肉仔鸡的血糖和胰岛素浓度,增加全净膛重和胸腿肌重,并有减少仔鸡腹腔脂肪重量的趋势,但对肉仔鸡的采食量、体增重和血液甲状腺素浓度无显著影响。     

酵母提取物诱导重组大肠杆菌合成HrpNEcc蛋白的研究

 【目的】HrpNEcc蛋白是一种起细胞信号作用的蛋白激发子,通过激活植物遗传系统的多基因表达调控,诱导植物的广谱抗病性、驱虫性和抗逆性,促进植物生长发育,因此在农业生产中具有重要意义。在hrpNEcc重组大肠杆菌高密度发酵廉价诱导剂的筛选工作中,偶然发现不添加任何外源诱导剂的TB培养基对照处理也有HrpNEcc蛋白合成。本研究旨在找出引起对照处理中HrpNEcc蛋白合成的诱导因子,并研究诱导因子的来源和含量对HrpNEcc蛋白合成的影响。【方法】摇瓶发酵培养重组大肠杆菌,离心收集菌体,用考马斯亮蓝染色法测定菌体总蛋白,SDS-PAGE检测目的蛋白条带,并结合Bandscan软件计算出HrpNEcc蛋白含量。【结果】在不添加任何外源诱导剂的情况下,用TB培养基发酵生产重组大肠杆菌E. coli BL21(DE3)/pET30a(+)hrpNEcc,HrpNEcc蛋白最高产量可达301.45 mg?L-1,比在IPTG诱导下,用LB培养基发酵生产的HrpNEcc蛋白产量提高72.43%。进一步研究证实,TB培养基中的酵母提取物（yeast extract）含有某些诱导因子能够诱导hrpNEcc基因表达合成HrpNEcc蛋白,并且hrpNEcc的表达水平随酵母提取物来源和浓度的不同而存在较大差异。【结论】在不添加任何外源诱导剂的情况下,高含量的酵母提取物诱导重组大肠杆菌hrpNEcc表达合成HrpNEcc蛋白,但其诱导机制还有待进一步研究。     

镉中毒对肉鸡血液生化指标的影响

将1曰龄的AA鸡160羽随机分成4组:Ⅰ组(对照组)鸡喂基础曰粮;Ⅱ组鸡喂基础曰粮添加镉1mg/kg(以3CdSO4·8H2O折算,下同);Ⅲ组鸡喂基础曰粮添加镉10mg/kg;Ⅳ组鸡喂基础曰粮添加镉100mg/kg。试验鸡按组分舍试验49d,测定鸡的血液生化指标。结果表明:饲镉组鸡血清Ca、P、TP、A1b的含量和Cp、ALP的活性均低于对照组,且IV组与对照组间差异极显著(P<0.01),血清UrA、AST、ALT的活性均高于对照组,但各组间无统计学差异(P>0.05)。     

硝苯地平对低温诱发的肉鸡肺血管重塑的影响

为探讨钙拮抗剂硝苯地平对低温诱发的肉鸡肺血管重塑的影响,动态观察肺小动脉血管中膜平滑肌增殖及管腔面积的改变。150只AA商品代肉仔鸡常规育雏,15日龄随机分为3组:常温(22~24℃)对照组、低温(9~11℃)组、低温(9~11℃)硝苯地平组。分别于低温处理后2周(28日龄)、3周(36日龄)、4周(44日龄)随机各抽取10只测定肺动脉压(PAP),同时取肺组织做石蜡切片,以Weigert弹力纤维染色,图像分析测定肺小动脉外径和内径、管腔面积和管总面积,计算相对中膜厚度(mMTPA)及管壁面积/管总面积(WA/TA)。结果表明:(1)硝苯地平抑制了低温诱发的肉鸡肺动脉压的升高,28日龄、36日龄和44日龄,硝苯地平组mPAP显著低于低温组(P0.05);(2)硝苯地平能抑制肺小动脉中膜平滑肌增生,表现在28日龄、36日龄和44日龄时,硝苯地平组50~100μm的肺小动脉mMTPA显著低于低温组(P0.05),100~200μm肺小动脉的组间差异与此类似;(3)硝苯地平抑制肺小动脉血管壁的增厚,3个日龄的硝苯地平组肺小动脉WA/TA显著低于低温组(P0.05)。可见,硝苯地平抑制低温诱发的肉鸡肺动脉高压和肺血管重塑。     

布鲁氏菌GMD重组蛋白表达及对昆明系小鼠的免疫效果研究

【目的】对布鲁氏菌GMD蛋白进行生物信息学预测分析和免疫原性研究,并在小鼠模型上评价其免疫效果。【方法】对GMD蛋白进行生物信息学分析,分析预测其结构及功能,采用PCR技术对布鲁氏菌gmd基因进行特异性扩增,与p ET-28a表达载体连接后转化至E.coli BL21(DE3)中,通过SDS-PAGE和Western Blot检测目的蛋白的表达及其反应原性,并通过小鼠免疫和攻毒实验评价其免疫原性以及免疫保护力。【结果】生物信息学分析显示,该蛋白无跨膜区结构,有15个抗原决定簇,不存在信号肽,二级结构以α-螺旋为主。并利用Phyre2服务器成功构建了该蛋白的三维模型。SDS-PAGE分析表明获得了约43.7 ku的融合蛋白,Western Blot结果显示该融合蛋白与羊抗布鲁氏菌阳性血清发生特异性反应。间接ELISA结果显示,免疫小鼠7、14、21 d,实验组小鼠均可产生抗体,且随时间增加抗体水平也随之升高。免疫保护力测定结果显示小鼠脾指数和脾脏CFU均低于PBS组。【结论】GMD重组蛋白具有良好的反应原性,其免疫小鼠后可诱导产生高水平的特异性抗体,具有良好的免疫原性;攻毒后能发挥一定免疫保护作用。     

表达猪Viperin蛋白重组腺病毒的构建及其对PRRSV复制的抑制作用

为研究猪Viperin蛋白对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)复制的抑制作用,通过RTPCR方法扩增猪Viperin基因,并克隆入腺病毒穿梭载体p Ad Track-CMV,经菌液PCR、酶切鉴定后进行测序。将PmeⅠ内切酶线性化的重组穿梭载体质粒(p Ad Track-s VIP)电转化大肠杆菌BJ5183,与腺病毒骨架载体p Ad Easy-1进行同源重组,提取重组后的腺病毒质粒,经内切酶PacⅠ线性化后转染HEK-293A细胞,装配成完整的病毒粒子r Ad-s VIP。重组腺病毒r Ad-s VIP感染细胞后,可见绿色荧光蛋白的表达。RT-PCR、Western blot检测结果表明,重组腺病毒r Ad-s VIP可正确表达猪Viperin蛋白,且表达的猪Viperin蛋白具有良好的反应原性,对PRRSV的复制具有明显的抑制作用。     

Effect of Atipamzole on Fos Protein Expression Induced by Telazol/Xylazine in Rat Cerebral Cortex and Thalamencephal

The aim of the study was to assess effect of the atipamezole on talezol/xylazine induced expression of c-fos in rat brain. Rats were injected with the mixture of 13.81 mg · kg~(-1) telazol and 5.21 mg · kg~(-1) xylazine, following 10 min later0.522 mg · kg~(-1) atipamezole injected, and then the cerebral cortex and thalamencephal were removed at 1 h after injected. Level of Fos protein was measured in the brain tissue by western-blot. The results revealed that telazol/xylazine induction Fos protein expression in the thalamencephal and cerebral cortex during the period of anesthesia, atipamezole attenuated telazol/xylazine induction Fos protein expression in the thalamencephal and cerebral cortex. The results indicated that atipamezole could inhibite telazol/xylazine-induced c-fos expression in the rat brain, and played a protective role of neuronal injury.