颗粒细胞生长发育及其在卵泡发生中的作用

本文简述了影响颗粒细胞分裂化以及生长与机能的因素，阐明了颗粒细胞在卵泡发生及随后的卵母细胞受精与胚胎发生中的作用，并探讨了颗粒细胞在卵母细胞体外成熟中的应用。     

颗粒细胞对卵泡发育的影响

卵泡发育是一个复杂的生理过程,通过间隙连接,颗粒细胞在卵母细胞的生长发育过程中起营养作用,并促进卵母细胞的成熟;颗粒细胞和膜细胞的相互作用是卵泡发育和维持正常功能的重要条件。作为卵泡发育的标志,颗粒细胞的生长分化是原始卵泡启动和生长的关键,并通过受体介导途径调控生长期卵泡的发育及卵泡闭锁,从而在卵泡发育过程中起重要的调控作用。     

卵泡发育和卵母细胞成熟

本文简要叙述了卵泡发生的生理过程。着重讨论了卵泡发生期间的内分泌调节及影响卵母细胞成熟因素的研究现状。随着动物胚胎工程技术的发展，对胚胎的需求日益增多。充分利用卵母细胞的体外成熟和体外受精技术，可提供大量的优质胚胎。卵母细胞体外成熟的历史已有三十余年，并已在小鼠（１９６５）、大鼠（１９７４）、仓鼠（１９９３）、兔（１９８７）、猪（１９８６）、山羊（１９８４）、绵羊（１９７８）、牛（１９６５）、恒河     

牛卵泡卵母细胞体外受精和发育的研究

利用屠宰黄牛卵巢作为供试材料 ,对卵巢表面 2～8mm卵泡卵母细胞体外受精(IVF) -受精卵的体外发育 (IVD)进行了系列研究 ,采用上游法、Percoll法和本实验室沿用的直接洗涤法处理牛冻精 ,观察 3种精子处理方法处理牛冷冻精子对卵母细胞体外受精胚胎发育的影响。实验结果 ,就卵裂率指标 ,采用Percoll法处理的精子进行卵母细胞体外受精 ,和上游法及洗涤法分别比较 ,差异均不显著 (P >0 .0 5 ) ;桑囊率指标 ,只有上游法比洗涤法高 ,差异显著 (P <0 .0 5 ) ,其余差异均不显著。以FERT -TALP液作为受精液采用常规培养方法 ,精卵作用 18～ 2 0h后分开 ,与精卵作用 6～ 8h后分开卵母细胞受精后的 8-细胞发育率及桑囊率变化不大 (P >0 .0 5 ) ;卵裂率指标 ,18～ 2 0h处理组高于 6～ 8h处理组 ,但两组之间差异也不显著。表明 ,在生产中采用FERT -TALP液做为受精液 ,应用上游法处理精子 ,不需要另购试剂 ,精卵孵育时间由 18～ 2 4h缩短至 6～ 8h是可行的 ,其现实意义是可以简化胚胎体外生产的程序 ,节省人力 ,降低成本     

哺乳动物卵泡发育过程中的超微结构研究进展

通过对体内发育与体外培养卵泡及其卵母细胞超微结构进行比较。从微细结构上客观评定体外培养卵泡的形态，活力，代谢状况及功能完整性，界定体外生长卵泡所处发育阶段。从而为确立和完善腔前卵泡体外培养体系提供可靠的理论依据。     

间隙连接蛋白Cx43和Cx45在体外受精绵羊早期胚胎中的表达

为了研究间隙连接蛋白Cx43和Cx45在体外受精绵羊胚胎早期发育过程各阶段的表达情况，利用RT—PCR扩增得到绵羊。Cx43（43ku）及Cx45（45ku）基因的mRNA，并进行序列测定。收集绵羊未成熟和成熟卵母细胞以及体外受精早期胚胎各发育阶段的卵裂球细胞，通过RT—PCR半定量检测Cx43和Cx45基因的mRNA表达量；通过免疫组织化学方法结合激光扫描共聚焦显微镜检测Cx43和Cx45蛋白在绵羊体外受精的早期胚胎发育过程中的表达情况及表达区域。结果表明，在绵羊卵母细胞成熟过程以及早期胚胎发育的各个时期，Cx43及Cx45在mRNA水平和蛋白水平均有表达；Cx43、Cx45蛋白主要分布在细胞膜表面，在细胞质和细胞核中表达微弱。研究结果为进一步探索Cx43和Cx45在绵羊早期胚胎发育过程中的作用提供了试验数据。     

维生素E通过间隙连接蛋白Cx43对牛颗粒细胞凋亡及增殖的影响

本研究旨在研究维生素E对间隙连接蛋白Cx43的影响和其对牛颗粒细胞增殖与凋亡的作用及其机制。将从牛卵巢中分离获得颗粒细胞进行体外培养,用不同浓度的维生素E (0、25、50、100、200、500 μmol/L)处理细胞24 h。采用流式细胞术检测颗粒细胞的凋亡率、实时荧光定量PCR法检测凋亡标志基因BCL2/BAX、P53及Cx43 mRNA的表达变化、CCK8法检测颗粒细胞的增殖变化。结果表明:流式细胞术检测显示,与对照组相比,体外培养过程中添加100 μmol/L维生素E可显著抑制颗粒细胞凋亡(P<0.05),实时荧光定量PCR检测显示维生素E能引起BCL2/BAX、P53及Cx43基因表达显著变化(P<0.05),CCK8检测显示维生素E处理细胞24和36 h时可以显著促进颗粒细胞增殖(P<0.05)。此研究结果为深入解析维生素E通过影响颗粒细胞增殖、凋亡进而影响卵母细胞发育、成熟的机制及提高雌性动物繁殖能力提供了理论依据。     

鹌鹑卵泡发育过程中颗粒细胞黄体生成素受体mRNA的表达

用Ｎorthern杂交的方法研究了鹌鹑排卵泡内颗粒细胞黄体生成素受体（ＬＨＲ）mＲＮＡ的表达。在预计排卵前２０h和３h分别取出最大的３个卵泡（Ｆ１、Ｆ３卵泡）以及小黄卵泡（ＳＹＦ）,剥离颗粒层提取出总ＲＮＡ,并经变性凝胶电泳后将ＲＮＡ转移到滤膜上。杂交所用的探针是用特异的引物经反转录一多聚栈链式反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增出编码ＬＨＲcＤＮＡ的细胞外区（ＥＣ）和跨膜区（ＴＭ）cＤＮＡ。结果表明,颗粒细胞ＬＨＲmＲ     

遮光诱导的氧化应激对蛋鸡卵泡发育的影响

为探究遮光处理导致家禽氧化损伤及繁殖障碍的机制,并阐明遮光调节卵泡发育的机理,本研究将30只体重及产蛋率相同的产蛋鸡随机分为遮光组、正常光照组和遮光+复合维生素组,遮光组使用遮光布覆盖鸡笼,将鸡笼内光强度降至零,而不影响通风和食物摄入;正常光照组未做其他处理,其光照程序为16 h光照:8 h黑暗;遮光+复合维生素组用遮...     

胰岛素在能量影响猪卵泡发育中的作用

胰岛素是体内具有重要生理作用的激素。能量是影响猪生长的主要因素。能量通过胰岛素,IGF-Ⅰ及葡萄糖等代谢信号作为媒介,影响垂体促性腺激素的分泌,这些代谢信号也可以直接作用于卵巢,影响性腺激素的分泌及卵泡的发育。而胰岛素是这其中较重要的代谢信号之一。本文将介绍胰岛素在能量影响猪卵泡发育中的作用。     

水牛缝隙连接蛋白43基因克隆及表达

本研究克隆了水牛缝隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)基因序列,并运用生物信息学方法对其核苷酸序列的保守性和氨基酸的理化性质、蛋白质结构进行了系统分析,对Cx43基因在水牛不同组织和不同发育阶段卵泡中的表达差异进行了检测。结果表明,应用RT-PCR技术克隆获得了水牛Cx43基因序列,其中编码区全长1152 bp,编码383个氨基酸,蛋白质理论分子质量43.13 ku,等电点为8.88。多重序列比对结果显示,水牛Cx43核苷酸序列与牛、羊、猪、马和人相应序列的同源性分别为99%、98%、94%、93%和92%,系统进化树分析结果推测,Cx43基因在不同物种进化过程中具有高度保守性;对水牛Cx43蛋白的二级和三级结构分析发现,其具有缝隙连接蛋白的特有结构。定量RT-PCR结果显示,Cx43在水牛卵巢组织中相对表达量最高,睾丸、肾脏、心脏和皮肤次之,肝脏和大脑表达量较低。免疫组化结果发现,Cx43蛋白表达随卵泡发育时期的不同而变化,Cx43蛋白随卵泡发育表达逐渐增强。     

前列腺素对禽类等级卵泡发育的影响

前列腺素是一类由花生四烯酸通过环氧化酶途径合成的脂类介导物。在哺乳动物排卵、受精、胚泡植入、蜕膜化、子宫平滑肌收缩、黄体退化及卵泡发育过程中起重要作用。对于家禽,前列腺素促进其产卵和子宫收缩;在产卵中期,卵巢静脉血浆中前列腺素的浓度为外周血浆浓度的5～20倍。这种高剂量、脉冲式分泌的前列腺素不仅能促进家禽成熟卵泡的排卵,而且可作为促性腺激素的第二信使介导颗粒细胞对cAMP的反应,促进了等级前卵泡颗粒细胞的增殖,进而在优势卵泡的选择过程中起重要作用。     

激素对家禽卵泡发育的调节

从家禽的生殖生理特点出发，根据近年来有关研究资料，系统地综述了促进性腺激素释放激素，促性腺激素，孕激素，肾上腺皮质激素、性腺激素、细胞因子、褪黑素和前列腺素对家禽卵泡发育和排卵的调节机理，对于促进家禽卵泡发育，提高家禽繁殖性能提供了科学的参考。     

KRT16在长毛兔毛囊发育过程中的表达规律及功能探究

旨在探究KRT16在长毛兔毛囊发育过程中的表达规律及功能。本试验选取12只健康的6月龄皖系长毛兔,于剪毛后在生长期、退行期和休止期选取背部皮肤采样。通过克隆得到兔KRT16基因的编码序列,利用生物信息学软件对KRT16编码序列(CDS)的生物学特性进行初步分析。实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)分析KRT16在毛囊不同时期表达量。在毛囊毛乳头细胞(dermal papilla cell, DPC)中过表达和敲低KRT16,探究KRT16对毛囊生长发育相关基因的调控作用,以及对DPC增殖的影响。结果显示,KRT16基因的编码序列全长1 431 bp,可编码476个氨基酸,在不同哺乳动物中表现出高度同源性。实时荧光定量PCR结果显示,在毛囊发育周期中,KRT16在毛囊发育周期呈现出不同的表达水平,在生长期高表达。通过在兔毛乳头细胞中过表达与敲减KRT16,检测毛囊发育相关基因的表达水平变化,过表达KRT16后,SFRP2和TGFβ1基因的mRNA表达量极显著下降(P<0.01),BCL2、CCND1、EGF、LEF1和CTNNB...     

山羊卵巢无腔卵泡卵母细胞的体外生长

山羊卵巢无腔卵泡卵母细胞在以ＤＭＥＭ为基础,添加ＨＥＰＥＳ（２０ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＦＣＳ（１０％）、ＦＳＨ（４０ｍｇ／Ｌ）、次黄嘌呤（２ｍｍｏｌ／Ｌ）、异双丁酰环腺苷酸（２ｍｍｏｌ／Ｌ）、ＩＧＦ－Ｉ（５０μｇ／Ｌ）、氢化可的松（４０μｇ／Ｌ）和ＩＴＳ（５０μｇ／Ｌ）的培养液中得以存活并生长。在二维培养体系中,卵泡在体外的生长模式和体内有很大差别。最显著的特征是卵泡不像在体内那样保持完整的立体结构一直到结束。绝大部分卵泡不同程度地发生基膜溶解和破裂,颗粒细胞向四周扩展并贴壁,形成单层。由于卵泡原有三维立体结构的破坏,易于导致卵母细胞的迁移。在生长方式上以数个卵泡聚集生长对其卵母细胞的生长似乎较为有利。卵泡卵母细胞在体外培养９ｄ,其直径可达１５０μｍ以上,达到了成熟时体积,存活率为５３％。实验证明,山羊无腔卵泡卵母细胞在合适的培养体系中,能在体外存活并生长,并能发育到成熟时的大小。     

初生水貂皮肤毛囊发育组织学观察

为了解水貂皮肤毛囊发育的变化规律,本试验采集0～6周龄初生的美国短毛黑公水貂的背中部皮肤样品,用HE染色法制备组织切片,在显微镜下观察其皮肤毛囊结构及变化规律。结果发现,水貂的皮肤在出生前就已经基本发育完成,初级毛囊、次级毛囊的毛干具有髓质;水貂出生时可见初级毛囊而无次级毛囊,初级毛囊的密度随周龄的增加而增加,于4周龄后降低,初级毛囊在水貂4周龄后不再发育或很少发育, 4周龄时可见次级毛囊,次级毛囊随水貂体表的增长毛密度增加,且在水貂出生后大量发育。水貂6周龄时S/P值为2.95±0.23,次级毛囊仍将大量发育。水貂背中部表皮呈先增厚后变薄的变化,真皮随着周龄的增加而增厚;初级毛囊、次级毛囊随周龄的增加而加深。     

Effect of Vitamin E on Bovine Granulosa Cells Apoptosis and Proliferation through Cx43

The aim of this study was to determine the effect of vitamin E on Cx43,the mechanism and function of vitamin E on bovine granulosa cells apoptosis and proliferation.In this study,granulosa cells were isolated from bovine ovary and cultivated in vitro by adding different concentration of vitamin E (0,25,50,100,200 and 500 μmol/L) for 24 h.After cultured,apoptotic cells were detected by FCM,mRNA expression levels of BCL2/BAX、P53 and Cx43 genes were determined by Real-time PCR and cell proliferation was detected by CCK8.The results showed that compared to control group,100 μmol/L vitamin E could significantly inhibit the apoptosis of granulosa cells (P<0.05).Real-time PCR detection results showed that vitamin E significantly changed the mRNA expression levels of BCL2/BAX,P53,Cx43 genes (P<0.05).Vitamin E could significantly improve granulosa cells proliferation when granulosa cells were treated for 24 and 36 h (P<0.05).The results provided a theoretical basis on further analysis for studing the influence mechanism of vitamin E on oocytes development and maturity,and improvement of female animal reproduction by influencing granulosa cells proliferation and apoptosis.     

原始卵泡形成和发育调节机制研究进展

原始卵泡的形成及其向初级卵泡的转化是卵泡发育过程中的一个重要阶段,是由多种内分泌、旁分泌和自分泌因素调控的生理过程。高水平的类固醇激素会抑制卵泡的形成,局部分泌的kit配基、碱性成纤维细胞生长因子、白血病抑制因子、角质形成细胞生长因子、骨形态发生蛋白等可促进原始卵泡向初级卵泡的转化,而抗缪勒氏激素则对这一过程有抑制作用。