倒刺鲃属三个种之间种间杂交的初步研究

采用人工催产和干法授精技术,进行了以中华倒刺鲃、倒刺鲃为母本与其父本及黑脊倒刺鲃雄鱼的种间杂交实验,获得4个杂交组合和2个自交组合,在(27±0.5)℃温度条件下,对其F₁卵膜径、受精率、孵化率、孵化时间、畸形率、子代早期形态特征与成活率进行了比较,同时,观察了胚胎发育及其异常现象,结果表明:以中华倒刺鲃为母本的F₁卵膜径差异不显著;以倒刺鲃为母本的F₁卵膜径,在多细胞期时差异不显著,在耳石期时,倒刺鲃♀×中华倒刺鲃♂F₁卵膜径显著大于母本(P<0.05)。杂种F₁的受精率、孵化时间与母本差异不显著,畸形率显著高于母本(P<0.05)。中华倒刺鲃杂种F₁的孵化率较高,与母本差异不显著(P<0.05)。倒刺鲃♀×中华倒刺鲃♂F₁的孵化率与母本之间差异不显著,倒刺鲃♀×黑脊倒刺鲃♂F₁的孵化率显著低于母本(P<0.05)。中华倒刺鲃杂种F₁仔鱼早期发育阶段存在死亡高峰期,成活率显著低于母本(P<0.05)。中华倒刺鲃种间杂交和倒刺鲃♀×黑脊倒刺鲃♂杂种F₁既具有父本特征,同时又具有母本特征,初步证明倒刺鲃属种间杂交是可行的。     

利用CRISPR/Cas9基因编辑技术敲除团头鲂socs1重复基因

以团头鲂细胞因子信号传导抑制蛋白1（SOCS1）基因socs1a和socs1b为编辑对象,在线分析并筛选出合适的靶点合成向导 RNA (guide RNA, gRNA),然后对1~2细胞期的团头鲂胚胎进行gRNA和Cas9蛋白的混合注射。通过荧光定量PCR技术在转录水平检测socs1a和socs1b的表达,并通过测序平台在DNA水平鉴定基因序列的突变,成功建立了多种socs1的突变品系。与同期野生型(WT)相比,socs1a突变杂合体（SOCS1a^+/-）和socs1b 突变杂合体（SOCS1b^+/-）团头鲂生长性能增强、体质量显著增加,同时炎症因子基因中肿瘤坏死因子α基因(TNF-α)和白细胞介素6基因(IL-6)表达量显著增加,而白细胞介素1β基因(IL-1β)表达无明显变化。注射嗜水气单胞菌后,与野生型不同的是,IL-6和TNF-α在SOCS1a^+/-和SOCS1b^+/-团头鲂肝脏中的表达均有持续显著上升。本实验通过CRISPR/Cas9系统成功敲除了团头鲂socs1a和socs1b,为进一步探讨socs1的作用提供了一定的研究基础,同时为CRISPR/Cas9基因编辑技术在养殖鱼类中的合理应用提供了依据和借鉴。     

大黄鱼♀与黄姑鱼♂杂交F1家系初孵仔鱼的AFLP分析

为了评估大黄鱼♀与黄姑鱼♂杂交F₁在良种培育与遗传学研究中的应用潜力,利用AFLP标记研究了双亲基因在2个杂交F₁家系(HF1和HF2)初孵仔鱼中的传递和分离方式。8对AFLP选择性扩增引物在两对亲本中分别检出478和446个片段。在HF1中,检出片段包括215条母本特异条带(FSB)、165条父本特异条带(MSB)和98条双亲共有条带(MuB),其中,121条(56.3%)FSB、115条(69.7%)MSB和93条(94.9%)MuB传递给了全部后代,其余片段在后代中发生分离。FSB和MSB分离位点的平均显性表型频率之间没有显著性差异。AFLP标记在HF2的传递与分离和HF1相似,只是分离位点的比例较HF1低,而且检出了2个非亲位点。此外,在HF1和HF2中都出现了较高比例的偏离孟德尔定律的分离位点。这些结果表明,大黄鱼♀×黄姑鱼♂杂交F₁初孵仔鱼中同时含有来自双亲的基因;虽然计算结果显示杂交F₁在遗传上略偏向于母本,但是父源基因和母源基因没有明显的选择性丢失;母本特异位点多态比例与大黄鱼种内杂交F₁相当。研究结果为大黄鱼♀×黄姑鱼♂杂交F₁的开发与管理提供了科学依据。     

团头鲂“浦江1号” 选育后期世代群体同野生群体间遗传变异的ISSR分析

以团头鲂“浦江1号” 选育后期3个世代群体（F₇、F₈、F₉）为试验对象、其选育奠基群体（1985年淤泥湖野生群体）后代、淤泥湖野生群体（2007年）、梁子湖野生群体（2007年）为对照材料,通过ISSR标记技术分析,并通过部分样本的细胞色素b基因测序的补充验证,了解选育所产生的遗传变异及野生群体遗传结构现状。主要结果：（1）从100个ISSR引物中筛选出26个引物,扩增出清晰、可重复的条带共164条,多态性条带比例49.39%。细胞色素b基因在选育良种3个世代中只发现一种单倍型。（2）选育群体同选育奠基群体后代、野生群体间的遗传差异显著,如群体多态位点百分数,F₉（28.05%）比选育奠基群体后代（40.24%）减少了30.29%,比淤泥湖野生群体（41.46%）减少了32.34%。选育群体同淤泥湖野生群体间的遗传相似系数最小（0.935 0）,距离最大（0.067 2）,两两配对F_ST值最大（F_ST=0.305 72）;UPGMA法构建系统进化树表明,选育群体同野生群体处于两个大分支,而在野生群体大支中,选育奠基群体后代与淤泥湖原种野生群体间配对F_ST值最小（F_ST=0.050 45）。（3）选育群体F₇、F₈、F₉各世代间遗传分化虽弱（低G_ST 0.141 7值,高N_m 3.027 9值）,但多态位点百分数、位点基因平均多样性、Nei氏基因多样性、群体内Shannon多样性指数等遗传参数仍然都呈现随选育世代数的累进而降低的趋势。（4）ISSR比细胞色素b基因更适合近缘种的相关关系研究。（5）经过二十多年9代的选育,相对于野生群体,团头鲂“浦江1号”良种已产生了明显的遗传分化,性状已相当稳定,但离选育极限尚有一定距离,今后应在继续监测其遗传结构变化的基础上,进一步挖掘选育潜力,同时要避免种质混杂、近交衰退及瓶颈效应等的发生。     

翘嘴红鲌（♀）×团头鲂（♂）杂种F1的形态特征及遗传分析

于2006-2007年,在浙江湖州,通过翘嘴红鲌（♀）和团头鲂（♂）间的属间杂交,成功获得了杂交F₁,并通过对杂交F₁及其父母本的形态、核型和基因组分析比较,探讨了杂交F₁的性状变异和遗传组成情况。结果表明： 1）翘嘴红鲌（♀）和团头鲂（♂）间具有良好的亲和力,其杂交受精率、孵化率均达到90%以上。2）翘嘴红鲌（♀）×团头鲂（♂）杂交F1的多数可数可量性状表现为中间型。在10个可数性状中,鳃耙数、侧线鳞等3个性状介于父母本之间,其平均杂交指数为54.56,显示杂交F₁的可数性状接近于中间值,略偏向于父本团头鲂;在17个常规可量性状中,有9个性状与父母本差异显著,其中有4个性状偏向于父本,有3个偏向于母本,有2个超父母本偏离,其平均杂交指数为49.59,也显示杂交F₁的可量性状处于中间值;进一步对框架参数的聚类和判别分析显示,杂交F₁的框架体型与父母本差异较大,接近于中间型,但受母本影响较多。3）杂交F₁的染色体数（2n）为48,核型公式为18m+26sm+4st（NF=92）,与已报道的团头鲂和翘嘴红鲌核型相似,说明杂交F₁为二倍体,并可预测杂交F₁可育。4）杂交F1大部分RAPD扩增条带能在亲本中找到,有的仅来自于父本,有的仅来自于母本,说明杂交F₁为二倍体杂种;杂交F₁与母本的相对遗传距离为0.4327,而与父本的遗传距离0.2312,前者大于后者,表明杂交F1与两亲本的遗传差异不是对等的,而是偏向父本一方,UPGMA系统树也同样证明了这一点。     

红鲫(♀)×鲤(♂)杂交鱼的胚胎染色体组倍性研究

红鲫属于鲤科、鲤亚科、鲫属,染色体数目为2n=100,核型为22m+34sm+22st+22t;鲤属于鲤科、鲤亚科、鲤属,染色体数目为2n=100,核型为22m+34sm+22st+22t。已有研究表明,红鲫(♀)×鲤(♂)杂交第一代(F₁)和第二代(F₂)为二倍体,F₂能产生染色体数不减数的配子,在第三代(F₃)中形成四倍体鱼。通对F₁和F₃进行胚胎染色体制片,在染色体水平上探讨红鲫和鲤远缘杂交的多倍体发生途径及F₂产生不减数配子的潜能。结果表明,F₁混合胚胎都为二倍性胚胎,没有发现单倍性和多倍性胚胎,但F₃混合胚胎中则有染色体数为100,150,200甚至300的染色体分裂相,推测F₂生殖细胞发生了一次或多次染色体数加倍,产生了二倍性和更高倍性的配子,它们结合形成了不同倍性的F₃胚胎。实验证明双亲基因组大小及核型相似的鲫鲤远缘杂交第一代不发生多倍化,但获得的二倍体杂交后代能产生不减数配子,在F₃中产生多倍体鱼。     

马氏珠母贝红色壳家系不同世代遗传变异的SRAP分析

利用SRAP（sequencerelated amplified polymorphism,序列相关扩增多态性）标记对马氏珠母贝红色壳家系第一代到第三代（F₁、F₂、F₃）及回交家系（BC₁）的遗传变异进行了分析。7对SRAP引物共产生63条扩增带,其中多态性条带55条,平均每对引物组合产生7.86条多态标记。 在F₁,F₂及F₃三代中,Shannon信息指数和Nei氏基因多样性指数显示世代群体的遗传多样性呈下降趋势,但差异并不显著（P>0.05）。随着世代的增加,相邻世代群体之间的遗传分化有逐渐降低的趋势,而世代内遗传相似性逐渐增加。BC₁与F₁的遗传相似度高于F₃与F₁间,表明回交能使后代个体更趋向轮回亲本。     

东平湖刀鲚生物学参数、单位补充量渔获量及产卵亲体量评估

为完善东平湖刀鲚(Coilia nasus)的基础生物学数据, 并为实现其资源的可持续利用提供技术指导和理论依据, 本研究根据 2021—2023 年东平湖定置三层多目刺网调查获得的刀鲚体长、体重数据, 利用 ELEFAN_GA 技术对刀鲚的生长和死亡参数进行估算, 拟合 Von Bertalanffy (VBGF)生长方程, 构建了基于体长结构的单位补充量渔获量(YPR)和单位补充量产卵亲体量(SSBPR)模型。结果显示, 东平湖刀鲚体长范围为 4.9~26.2 cm, 平均体长为 (12.2±2.4) cm, 体重范围 1.1~51.8 g, 平均体重为(6.6±4.5) g; 使用基于 bootstrap 的 ELEFAN_GA 方法估算刀鲚渐进体长 L_∞=31.65 cm, 生长速率 K=0.66, 理论生产起点年龄 t₀= ‒0.23, 季节性生产振幅 C=0.65, 1 年中生产最快的时间段 t_s=0.40; 刀鲚的总死亡系数 Z=2.71, 自然死亡系数 M=1.074, 捕捞死亡系数 F=1.641、开发率 E=0.604, 平均选择体长 L₅₀=9.15 cm; YPR 模型结果显示, 随着 F 增大, YPR 值呈现先上升后下降的趋势, 生物学参考点 F_0.1 和 F_max 的值分别为 0.978 和 2.204; SSBPR 模型结果显示随着捕捞强度的增大, SSBPR 呈下降趋势, 现阶段捕捞强度介于 F_20%(2.848)与 F_40%(1.065)之间, 略大于 F_35%(1.286)。综上所述, 东平湖刀鲚生长表现出明显的季节性变化规律, 在与其他地理群体对比中, 东平湖刀鲚在生物学参数上的差异体现了其生长过程的空间异质性, K 值最大表明其可以用最短的时间生长到接近极限体长, 说明东平湖饵料丰富, 而同时较高的开发率和较低的开捕体长则表明目前东平湖刀鲚已处于过度开发状态, SSBPR 曲线得出现阶段捕捞强度小于极限值 F_20%, 略大于生物学参考点 F_35%。研究结果表明, 为使东平湖刀鲚资源达到生态、经济效益平衡, 可在适当减少渔船数量以降低捕捞强度的情况下, 通过增大网目尺寸以增加开捕体长来保持其可持续发展。     

基于线粒体序列的新疆4个河鲈野生群体的遗传现状分析

为了解我国新疆地区河鲈(Perca fluviatilis)的遗传现状, 本研究分析了新疆乌伦古河水系和喀啦额尔齐斯河 4 个河鲈野生群体的线粒体 CO I、Cyt b 和 D-loop 3 个区段序列的遗传多样性, 并与欧洲群体进行了比较。结果显示, 新疆 4 个群体的线粒体 CO I、Cyt b 基因和 D-loop 区序列分别有 3、10 和 10 个变异位点(分别占序列总长的 0.49%, 0.90%和 1.92%), 定义了 4、11 和 11 个单倍型, 单倍型多样性分别为 0.065±0.022、0.276±0.049和 0.186± 0.046, 核苷酸多样性分别为 0.00011±0.00004、0.00033±0.00007 和 0.00084±0.00013, 呈现出低水平遗传多样性。中国新疆河鲈群体和欧洲群体不存在共享的单倍型, 单倍型聚类树和网络图也表现出明显分隔, 两者为不同的遗传系谱。 中国新疆乌伦古河水系的乌伦古湖(WL)、吉力湖(JH)和乌伦古河(WR) 3 个群体基于 Cyt b 基因和 D-loop 区序列估计群体间变异分别为?0.005%和 0.44%, 遗传分化系数(F_st)为?0.00045 和 0.00436, 处于低程度分化(F_st＜0.05), 两两群体间的遗传分化程度较低(F_st=?0.01158~0.01803), 遗传交流多, 为同一个遗传系谱, 尤其是两湖之间存在共享单倍型, F_st均为负值, 基因交流频繁, 无遗传分化; 喀啦额尔齐斯河(ER)与乌伦古河水系共 4 个群体基于 CO I 基因估计群体间变异为 1.57%, F_st 为 0.01568, 但 ER 群体与 WL 群体处于中度遗传分化(F_st=0.06614＞0.05), ER 与 WR 群体处于高度遗传分化(F_st=0.24627＞0.15), 可能由于水坝的阻断, 遗传资源得不到补充, 喀啦额尔齐斯河形成了一个独立的遗传系谱。本研究结果可为新疆河鲈种群多样性保护以及种质资源开发利用提供参考。     

不同光强和温度对长石莼（缘管浒苔）光合作用和叶绿素荧光参数的影响

利用脉冲振幅调制叶绿素荧光仪对不同光照和温度条件下长石莼（缘管浒苔）光合作用和培养条件进行了优化。结果表明,长石莼（缘管浒苔）在25 ℃和72 μmol/(m2·s)条件下,其F_v/F_m、F_m、F_v和α值最高,分别高达0.74、4 567、3 406和0.305,低于该点为光不饱和,高于该点为光抑制,偏离越大,下降越显著（P<0.01）,其中在5 ℃和35 ℃时最小,分别是25 ℃最高值的32.24%~64.88%和22.99%~53.44%;光强为18 μmol/(m²·s)和216 μmol/(m²·s)时最小,其F_v/F_m、F_m、F_v和α值分别是25 ℃和72 μmol/(m²·s)条件下最高值的44.94%~82.62%和51.82%~76.72%。F₀变化不太明显,5~30 ℃为先上升后下降或再上升变化趋势,35 ℃为先下降后上升变化趋势。拟合参数α显示,长石莼（缘管浒苔）在达到光饱和点前通过增加光能吸收来增强光合作用,在光抑制后则迅速减少。rETR_maxDuncan检验表明,高温/低温和高光强对长石莼（缘管浒苔）光合作用影响显著（P<0.01）。总体上看,长石莼（缘管浒苔）光合作用和生长适宜条件为15~25 ℃和54~72 μmol/(m²·s),过高或过低均不适宜。且温度排序为25>20>15>30>10>5>35 ℃,光照强度排序为72>54/108>36/162>18/216 μmol/(m²·s)。     

Cortisol induces masculinization of XX medaka through gonadal soma-derived growth factor (GSDF) and anti-Müllerian hormone receptor type 2 (AMHR2)

The medaka Oryzias latipes is a teleost fish with an XX/XY sex determination system similar to that of mammals. However, under high-temperature conditions, XX medaka are masculinized by an elevation of the key teleost glucocorticoid, cortisol. Cortisol inhibits female-type proliferation of germ cells and induces masculinization of XX medaka during gonadal sex differentiation. To identify masculinization mechanisms downstream of cortisol, we analysed the functions of gonadal soma-derived growth factor (gsdf) and anti-Müllerian hormone receptor type 2 (amhr2); these genes are known to play important roles in the inhibition of germ cell proliferation and male differentiation. We investigated the impact of gsdf and amhr2 on the proliferation of germ cells using gsdf knockout (KO) and amhr2 KO medaka. At hatching stage, loss of gsdf or amhr2 function recovered female-type proliferation in germ cells under cortisol treatment. Moreover, cortisol treatment of gsdf KO or amhr2 KO medaka did not induce masculinization of XX medaka. These results suggest that cortisol inhibits female-type proliferation of germ cells and induces masculinization of XX medaka through GSDF and AMHR2. This study thereby provides the first evidence that GSDF and AMHR2 are involved in cortisol-induced masculinization.

     

The sex determining gene of medaka: a Y-specific DM domain gene (DMY) is required for male development

Although the sex-determining gene Sry has been identified in mammals, no comparable genes have been found in non-mammalian vertebrates. To clone positionally the sex-determining region of the medaka, Oryzias latipes, we generated a Y congenic strain to highlight the genetic differences between the X and Y chromosomes from inbred strains of medaka. We used recombinant breakpoint analysis and deletion analysis of the Y chromosome of a congenic XY female to restrict the sex-determining region to 250-kb stretch of the Y chromosome. Shotgun sequencing of this region predicted 27 genes. Three of these genes were expressed during sexual differentiation. However, only one gene was Y specific. The full-length cDNA sequence of this gene encodes a putative protein of 267 amino acids, including the highly conserved DM domain. We thus named it DMY. To establish a role for DMY during sexual differentiation, we screened wild medaka populations for naturally occurring DMY mutants. Two XY females with distinct mutations in DMY were found in separate populations. The first heritable mutant – a single insertion in exon 3 and the subsequent truncation of DMY – resulted in all XY female offspring. Similarly, the second XY mutant female showed reduced DMY expression with a high proportion of XY female offspring. Furthermore, during normal development, DMY is expressed only in somatic cells of XY gonads. These findings strongly suggest that the sex-specific DMY is required for normal testicular development and is a prime candidate for the medaka sex-determining gene.     

Cold tolerance of tilapia species and hybrids

Several experiments were conducted,involving Oreochromis mossambicus, O. aureusand their F₁ and F₂ hybrids to studythe genetic basis of cold tolerance in tilapiinefishes. Groups of fish, of similar age and grown underidentical conditions, were housed in replicated netenclosures in a controlled cooling water system.Survival time through a regime of controlledtemperature reduction was the observed parameter forcold tolerance. Intra-population variation anddifferences among species, hybrids and repeated spawnswithin a species were examined. There was nocorrelation between cold tolerance and fish size(within the range of 23–105mm standard length), andthe distribution for the trait was not normal. O. mossambicuswas the most cold-sensitive group,followed by the F₂, and the F₁ which wassimilar to O. aureus. Genetic variation in coldtolerance seems to have a large dominance component,based on the similarity of the F₁ hybrid to the O. aureus parent.     

Effects of single and repeated heat stress on anxiety-like behavior and locomotor activity in medaka fish

In this study, we examined whether a single heat stress incident and long-term repeated heat stress could affect behavioral and neural responses in male medaka fish Oryzias latipes. By using the novel tank diving test, we found that 7-day repeated heat stress led to anxiety-like behaviors and suppressed locomotor activity, whereas fluoxetine treatment during repeated heat stress led to anxiolytic behaviors. Furthermore, a single heat stress incident increased hyper-locomotor activity. A single heat stress incident decreased mRNA expression of tryptophan hydroxylase 2 (tph2), a rate-limiting enzyme in serotonin biosynthesis, while a single heat stress increased mRNA expression of tyrosine hydroxylase 1 (th1) and tyrosine hydroxylase 2 (th2), catalyzing dopamine biosynthesis in the brain. Plasma cortisol concentration increased after a single stress, repeated stress, and fluoxetine treatment during repeated stress. These results suggest that medaka fish are a good model for assessing anxiety-like behavior induced by long-term repeated stress. Moreover, th1, th2, and tph2 in the brain would be key factors in the exploration of the central regulation of behavioral responses to a single and repeated stress in fish.

     

Glycoprotein hormone receptor family in medaka (Oryzias latipes)

Four types of GPHR cDNAs have been cloned from ovary and testis of medaka (Oryzias latipes) and their gene constructions have been determined. Two of them are closely related to known fish receptors for FSH and LH, respectively. Changes in their mRNA levels were examined during the course of oogenesis. FSH receptor mRNA could not be detected from 20 h before ovulation, whereas LH mRNA remained 5 h before ovulation.     

近交对长牡蛎幼虫和稚贝生长与存活的影响

分别以2010年通过2个野生个体进行交配获得的A01全同胞家系和2011年通过A01家系子代进行交配获得A02全同胞家系为亲本,在2013年6月采用同时建立全同胞交配子一代F1(F=0.250)、全同胞交配子二代F2(F=0.375)及设置对照组(F=0)的方法,研究在相同环境条件下,不同实验组的受精率与孵化率以及近交对长牡蛎幼虫期、稚贝期生长和存活的影响,并初步探讨近交代数与近交衰退的关系。结果发现,各组的受精率均在90%以上,除F2组外其余2组的孵化率也在90%以上;幼虫阶段,F1组和F2组的壳高与壳长均从12日龄出现衰退(近交衰退系数,inbreeding depression coefficient,IDC0),且F2组壳高的近交衰退系数均小于同日龄F1组壳高的近交衰退系数;F1组和F2组的存活率在整个幼虫期间均出现衰退,且F1组和F2组存活率的近交衰退系数均随着幼虫日龄的增加而逐渐减小。稚贝阶段,F1组和F2组的平均壳高在各日龄均表现出近交衰退(IDC0),且F2组壳高的近交衰退系数均小于相同日龄F1组壳高的近交衰退系数;3个实验组的平均壳长在整个稚贝阶段无显著性差异;F1组和F2组存活率的衰退在不同日龄始终存在(IDC0),且随着稚贝日龄的增加其衰退程度逐渐加大。研究结果为长牡蛎选择育种和遗传改良提供了基础资料。     

微卫星用于凡纳滨对虾育种过程中亲权分析及遗传多样性的变化监测

利用7个微卫星标记分析了6个凡纳滨对虾家系的亲本（G₀）及其后代（G₁）的基因型分离情况,同时对G₀和G₁的所有座位期望杂合度进行配对比较分析,并且通过对G₁群体每个位点的F-statistics分析检验群体的遗传分化,以期对凡纳滨对虾育种进行遗传监测。结果表明：共检测到44个等位基因。G₀和G₁的平均每个座位的等位基因数目分别为6.14和6.27,平均期望杂合度为0.786和0.733,平均多态性信息含量为0.709和0.695。7个微卫星座位的累计排除概率为0.99,并且在有亲本存在的情况下,能够将6个家系分开。G₀与G₁的所有座位期望杂合度的配对比较分析结果表明G₀平均期望杂合度要显著高于G₁(P<0.01)。G₁各座位的遗传分化指数F_ST在0.270 3～0.465 4,平均分化系数为0.358 4。说明亚群间属于高度遗传分化。最后,根据6个家系的遗传距离,利用UPGMA法对G₁个体聚类分析,结果表明亲缘关系较近的家系A和B以及C和D的相似系数很高分别各聚为一类,E和F分别聚为一类。     

草鱼野生与选育群体遗传变异微卫星分析

为探究经过2个选育世代后选育群体遗传多样性和遗传结构的变化,实验采用多重PCR技术对4个野生草鱼群体(邗江、九江、石首、吴江)和2个选育群体(F1和F2)进行了微卫星序列遗传变异分析。结果显示,6个草鱼群体遗传多样性水平较高,2个选育群体除了平均等位基因数外,其他遗传多样性参数均小于4个野生群体。哈迪—温伯格平衡(Hardy-Weinberg equilibrium)检测显示,在120个群体—位点组合中有62个位点显著偏离哈迪—温伯格平衡,62个群体—位点组合中只有11个组合其近交系数值为负值,其余的51个组合的Fis均为正值。6个草鱼群体AMOVA分析结果显示,3.75%的变异来自于群体间,96.25%的变异来自于群体内,整体的遗传分化指数值为0.038。进一步分析各个群体间Fst,只有石首群体与F1、F2群体之间的Fst大于0.05,处于中等分化,其余群体间分化程度较低,且F2群体与4个野生群体之间Fst比F1群体与4个野生群体之间的Fst大。奈氏标准遗传距离分析结果显示,2个选育群体与野生群体之间的遗传距离大于野生群体之间的遗传距离。基于Dn建立的UPGMA系统发育树得出了相同的结果,即2个选育群体与野生群体之间的亲缘关系比4个野生群体之间的亲缘关系要远。研究表明,经过2个世代选育后,相比4个野生群体,2个选育群体遗传多样性虽有部分下降,但仍处于较高的水平,2个选育群体的遗传结构已发生变化,但其遗传分化程度尚不明显。本研究结果为制定出更加完善有效的选育方案提供了重要参考。     

尼罗罗非鱼无乳链球菌Sip蛋白乳酸菌活载体口服疫苗的研制及其免疫效果

链球菌病是威胁我国罗非鱼养殖产业健康发展的重要病害之一。为研制出免疫效果好、操作简便的罗非鱼链球菌病疫苗,本研究构建重组表达无乳链球菌Sip蛋白的穿梭质粒pNZ8124-Sip,通过酶切和测序验证后电转化乳酸乳球菌NZ9000,获得能够诱导重组表达无乳链球菌Sip蛋白的乳酸菌活菌载体疫苗。采用SPS-PAGE电泳摸索最佳诱导浓度和诱导时间以获得最大表达量,通过镍柱纯化目的蛋白并进行Western blot检测;利用不同浓度的重组乳酸菌活载体疫苗灌胃口服免疫尼罗罗非鱼,采用间接ELISA法测定免疫后血清抗体水平变化,通过人工腹腔注射感染无乳链球菌获得相对免疫保护率。研究结果显示,构建的重组乳酸乳球菌可通过nisin诱导表达大小为48 ku特异性蛋白,与目的蛋白大小一致;PAGE电泳显示,重组蛋白主要以可溶蛋白和包涵体2种形式存在,其中胞内可溶性蛋白浓度达7.65 mg/mL;诱导表达的最佳条件为100 ng/mL nisin诱导6 h;Western blot检测结果显示,诱导蛋白可与鼠抗His标签抗体特异性结合。口服免疫结果显示,中浓度组(2.24×10~(10) CFU/mL)和低浓度组(2.24×10~9 CFU/mL)免疫2次能够显著提高尼罗罗非鱼的血清抗体水平和抗无乳链球菌感染能力,中浓度免疫组的相对免疫保护率最高为41.0%。本研究可为罗非鱼链球菌病口服疫苗的研究奠定基础,具有广阔的应用前景。