黄芪多糖复配辛伐他汀免疫佐剂对鸡免疫H9N2禽流感疫苗免疫效果的影响

为了实现免疫增强功能优化,将免疫增强剂黄芪多糖和辛伐他汀进行复配,并进一步制备出水包油型和油包水型2种复配油乳佐剂。与灭活H9N2禽流感疫苗联用,颈部皮下接种10日龄海兰褐蛋公鸡,并于二免后定期检测多项免疫指标。结果：通过均质乳化法在合适的条件下能制备出稳定的复配油乳佐剂,且水包油型流动性更佳;接种水包油型灭活H9N2油乳佐剂疫苗后,与对照组相比,血凝抑制抗体效价得到极显著提升,血清IgG抗体含量极显著增加(P<0.001),免疫脏器指数显著升高(P<0.05)。综上,黄芪多糖复配辛伐他汀的免疫佐剂能从多方面提升蛋鸡免疫功能,且水包油型的油乳佐剂效果优于油包水型的油乳佐剂。     

猪抗鸡传染性法氏囊病高免血清的制备及应用

作者采用自然发病鸡法氏囊组织制作鸡IBD油佐剂灭活苗;用鸡IBD油佐剂灭活苗多点肌注商品育肥猪,首免剂量10ml/头,10天后二免剂量为20ml/头;二免后20天AGP法检测供试猪血清,IBDV抗体效价1：32;用1：8猪抗鸡IBD高免血清治疗2400只IBD发病鸡,治愈率88．33％。     

两种进口佐剂对绵羊肺炎支原体灭活疫苗免疫小鼠抗体水平影响的研究

为了筛选绵羊肺炎支原体(MO)灭活疫苗的佐剂,试验采用绵羊肺炎支原体新疆分离株扩大培养后得到灭活抗原,分别与两种不同佐剂ISA 201和ISA 206混合乳化制备灭活疫苗,再以不同剂量免疫健康成年小鼠,最后用MO间接血凝的方法分别测定二免后第7,14,21,28天血清抗体效价。结果表明:ISA 206佐剂疫苗0.3 m L剂量组在第14天抗体效价就达到较高水平,第21天后开始下降;ISA 206佐剂疫苗0.2 m L剂量组在二免后第14天抗体效价达到高峰(1∶128),且在第21天仍维持抗体高峰,第28天开始下降;ISA 201佐剂疫苗0.3 m L剂量组在二免疫后第14天抗体效价达到高峰,维持1周后开始下降;ISA 201佐剂疫苗0.2 m L组免疫应答较慢,在二免后第21天才达到最高抗体效价(1∶64)。说明ISA 206佐剂诱导产生MO抗体较快,维持时间长,优于ISA 201佐剂,可作为MO灭活疫苗的优选佐剂。     

益生菌基因组DNA作为疫苗佐剂对鸡免疫效果的影响

一次试验选用1株益生菌的基因组作为禽流感病毒(AIV)H5N1亚型灭活油乳苗的佐剂,设不同剂量,分口服和同位点注射佐剂、疫苗的途径免疫鸡群;二次试验扩大菌株类型,以5株益生菌的基因组作为佐剂同位点注射鸡群,定期检测特异性抗体水平。一次试验显示在所有检测时间点上,疫苗对照组的抗体效价高于(P>0.05)或者显著高于(P<0.05)益生菌基因组的,且注射佐剂组的抗体效价高于口服佐剂的效价;二次试验显示疫苗对照组的抗体效价在前期高于(P>0.05)或者显著高于(P<0.05)益生菌基因组的效价,后期略低于某些益生菌组的(P>0.05),且各种益生菌基因组不同程度的推迟了抗体高峰期。     

猪圆环病毒2型灭活疫苗的制备与免疫效力研究

猪圆环病毒2型（PCV2）经0.2%甲醛37℃作用一定时间后接种PK-15细胞,盲传3代,用PCR方法检测灭活效果。将灭活的PCV2加入适量的白油和氢氧化铝胶制成PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗,免疫小鼠,共免疫2次,时间间隔为3周,分别于一免后第21天和二免后第14天进行ELISA抗体检测。同时为了评价国产油佐剂和进口油佐剂的免疫效果,笔者进行了猪体免疫效力试验。通过ELISA抗体、攻毒后临床表现及体温变化、剖解时的病理变化、平均日增重及病毒血症等指标对疫苗免疫效果进行评价。结果如下：①PCV2能被0.2%甲醛完全灭活,灭活时间为16 h。②PCV2油佐剂和铝胶佐剂灭活疫苗免疫小鼠后均能产生较好的免疫应答,并且油佐剂灭活疫苗免疫效果好于铝胶佐剂灭活疫苗。③猪体免疫效力试验表明,两种油苗均能产生较高水平的ELISA抗体。攻毒后,攻毒对照猪的体温高于免疫猪,空白对照猪体温正常。免疫猪及空白对照猪平均体重均升高,而攻毒对照猪平均体重有所降低,且两个免疫组和空白对照组之间平均日增重差异显著（P〈0.05）。病毒血症检测及病毒DNA在组织中的分布检测表明两油苗均能够有效降低猪体的带毒。以上结果表明,PCV2灭活疫苗免疫小鼠和猪体后均能诱导机体产生免疫应答,并能够在一定程度上抵抗PCV2对猪体的感染。     

木鳖子提取物对Asia Ⅰ-O型口蹄疫双价灭活苗的免疫佐剂作用

分别将2 500、500、100、20μg的木鳖子提取物(ECMS)或100 μg皂树皂甙(QA)和Asia Ⅰ-O型口蹄疫(FMD)双价灭活苗混合免疫豚鼠,以不另加佐剂的疫苗为对照组,于二免后3、6、10、14周采血并分离血清,观测血清中抗O型FMDV的抗体滴度、抗O型FMDV VP1结构蛋白抗体水平和抗Asia Ⅰ型FMDV的抗体水平.结果显示,当ECMS剂量等于或少于500 μg时,ECMS和FMD双价灭活苗混合免疫豚鼠,未见不良反应;疫苗中加入ECMS和QA后,则诱导更高的抗O型FMDV抗体滴度、抗O型FMDV VP1结构蛋白抗体和抗Asia Ⅰ型FMDV抗体水平,尤其ECMS100 μg组和QA 100 μg组(P＜0.01)或(P＜0.05);且ECMS 100 μg组抗体水平高于QA 100 μg组.本研究结果提示ECMS可作为FMD灭活疫苗的候选佐剂.     

益生菌基因组DNA为疫苗佐剂对鸡免疫效果的影响

一次试验选用1株益生茵的基因组作为禽流感病毒(AIV)H5N1亚型灭活油乳苗的佐剂,设不同剂量,分口服和同位点注射佐剂、疫苗的途径免疫鸡群;二次试验扩大菌株类型,以5株益生菌的基因组作为佐剂同位点注射鸡群,定期检测特异性抗体水平.一次试验显示在所有检测时间点上,疫苗对照组的抗体效价高于(P》0.05)或者显著高于(P《0.05)益生菌基因组的,且注射佐剂组的抗体效价高于口服佐剂的效价;二次试验显示疫苗对照组的抗体效价在前期高于(P》0.05)或者显著高于(P《0.05)益生茵基因组的效价,后期略低于某些益生菌组的(P》0.05),且各种益生菌基因组不同程度的推迟了抗体高峰期.     

口蹄疫纳米乳疫苗免疫持续期的试验研究

试验用同一批次相同抗原含量的口蹄疫病毒灭活抗原,分别采用纳米乳佐剂和ISA206佐剂配制口蹄疫O型、A型双价灭活疫苗,并对仔猪进行免疫,免疫后6个月内用液相阻断ELISA方法检测O型、A型免疫抗体效价(lg)。结果:免疫后6个月内纳米乳疫苗免疫猪产生的抗体lg平均值均高于ISA206佐剂疫苗,抗体水平在免疫后1个月达到最高。免疫后第6个月,纳米乳疫苗O型抗体lg平均值为2.19,A型抗体lg平均值为2.175,按液相阻断ELISA试剂盒的判定标准免疫猪抗体lg≥1.8,具有99%以上保护效力,纳米乳疫苗属于完全保护范围,而ISA206佐剂疫苗属于不完全保护范围。     

纳米铝胶佐剂增强猪细小病毒灭活疫苗猪体免疫的效果

将20头35日龄断奶仔猪随机分为4组,将制备的纳米铝胶佐剂猪细小病毒(Porcine parvovirus,PPV)灭活疫苗肌肉注射免疫接种,并以常规铝胶佐剂PPV灭活疫苗组、市售PPV油乳剂灭活疫苗组为疫苗对照,生理盐水组做阴性对照,应用HI和ELISA检测接种猪的体液免疫水平,流式细胞仪检测免疫猪的细胞免疫水平。体液免疫检测结果显示,PPV纳米铝胶佐剂疫苗组能显著提高机体产生抗体的速度,在首免后第2周产生有效保护抗体水平显著高于油乳剂疫苗和常规铝胶佐剂疫苗组(P0.05),在第3周其抗体水平达到峰值;细胞免疫检测结果显示,3种疫苗均能诱导机体产生细胞免疫应答,但各组之间差异不显著(P0.05)。结果表明,以纳米铝胶为佐剂制备的猪细小病毒灭活疫苗,能显著提高机体的免疫水平,并较早刺激机体产生抗体,具有较好的免疫保护效果。     

巴戟天多糖对口蹄疫疫苗免疫增强作用研究

为了研究巴戟天多糖对口蹄疫疫苗的免疫增强作用,试验将50只(4～7周龄)昆明小白鼠(体重18～22 g)随机分为5组,分别为空白(Naive)组、多糖(MOPS)组、疫苗(FMDV)组、疫苗+多糖(FMDV+MOPS)组、疫苗+铝佐剂(FMDV+alum)组,每组10只,Naive组小鼠注射生理盐水200μL,MOPS组小鼠注射巴戟天多糖溶液(2.5μg/μL)200μL,FMDV组小鼠注射猪口蹄疫O型灭活疫苗200μL,(FMDV+MOPS)组小鼠注射猪口蹄疫O型灭活疫苗200μL与巴戟天多糖200μL,(FMDV+alum)组小鼠注射猪口蹄疫O型灭活疫苗200μL与铝佐剂(1μg/μL)200μL,14 d之后进行二免。二免后第14天对小鼠进行眼眶采血,分离血清;无菌取脾脏,进行脾单细胞体外培养,收集上清液;采用小鼠间接ELISA试剂盒检测血清中特异性抗体IgG和血清中细胞因子IFN-γ、IL-4的含量。结果表明:与Naive组比,(FMDV+MOPS)组的IgG、IFN-γ和IL-4含量极显著升高(P0.01);(FMDV+alum)组的IgG、IFN-γ含量均极显著升高(P0.01),IL-4含量显著升高(P0.05);FMDV组的IgG、IFN-γ含量均显著升高(P0.05),IL-4含量差异不显著(P0.05);MOPS组的IgG、IFN-γ及IL-4含量差异不显著(P0.05)。说明MOPS作为口蹄疫疫苗免疫增强剂,可明显提高小鼠特异性抗体IgG和细胞因子IFN-γ、IL-4的含量,增强对小鼠的免疫应答。     

猪繁殖与呼吸综合征对塞内卡病毒灭活苗免疫效果的影响

为探究猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)对塞内卡病毒(SVA)灭活疫苗免疫效果的影响,对PRRS阳性猪和PRRS阴性猪分别免疫相同批次、相同剂量的SVA灭活苗,检测首次免疫后7 d、14 d、21 d、28 d血清中和抗体效价,并在免疫后28 d对所有试验猪进行攻毒保护试验。结果显示,所有PRRS阳性猪的SVA血清中和抗体效价均小于1∶4,而PRRS阴性猪SVA血清中和抗体效价在二免后上升到较高水平。攻毒保护结果与中和抗体效价结果呈正相关,PRRS阳性组0/5保护,而PRRS阴性组试验猪达到5/5保护。这一研究表明PRRS会使SVA灭活疫苗免疫效果下降,为SVA及PRRS疫苗的研发及猪场疾病的防控提供了参考。     

IB肾型与支气管炎型二价油佐剂灭活疫苗的制备及其免疫效果评价

以ＩＢＶ陕西地方肾型毒株Ｘ株与支气管炎型代表株Ｍ４１株为抗原，研制成功ＩＢ二价油佐剂灭活疫功地区奶牛隐性乳房炎病原菌的对其稳定性与安全性进行了观察。用该苗试验性免疫被肾型ＩＢＶ严重污染的某鸡场７日龄３批雏鸡２７０００多羽，２０天后抽检，其血清ＨＩ抗体全部阳性，其效价在５．０ｌｏｇ２以上，３个月后平均效价达９．２１ｏｇ２，且抗体水平整齐。     

一种猪流行性腹泻病毒阳性血清的制备方法

本文所阐述的方法用猪流行性腹泻病毒活抗原和灭活抗原及其佐剂,分别免疫实验动物-大兔来制备猪流行性腹泻病毒高免血清。将多次免疫该病毒后无菌收获的兔血清用细胞中和抗体效价检测法测定,当血清中和抗体效价在1:256以上时(新兽药的规定标准为1:64),即对收获的该血清全部进行物理性状检验、无菌检验、支原体检验、特异性检验、外源病毒及其抗体的检测,检测结果均符合要求者才是合格的高免阳性血清。该血清可最终用于该类疫苗的鉴别检验、效力检验和该类疾病的诊疗过程。本方法大大降低了因用本体动物-猪来制备阳性血清而引发的同源动物其他外源病毒污染的风险。该高免阳性血清的成功制备,对猪流行性腹泻疫苗的研究提供了基础保障。     

新城疫疫苗人工主动与被动联合免疫的效果观察

应用新城疫Ⅳ系弱毒苗与灭活油佐剂苗分别与新城疫高免卵黄抗体联合免疫;以间接ELISA试验检测它们在机体中抗体出现时间、数量,以及其变化规律。结果表明新城疫Ⅳ系弱毒苗与高免卵黄抗体联合免疫可出现一个抗体阴性期,而新城疫灭活油佐剂苗与高免卵黄抗体联合免疫则不出现这个抗体阴性期。     

犬细小病毒细胞毒蜂胶佐剂灭活抗原对山羊的免疫效果研究

应用犬细小病毒(CPV)细胞毒,F81细胞系传代培养增殖病毒,以该细胞毒液经甲醛灭活后制备成蜂胶佐剂灭活抗原,用以免疫山羊,观察其免疫效果.结果显示,以5mL/只恒定剂量接种山羊,经4次连续免疫后CPV抗体水平整体较低,第28天测定HI效价在27(1∶3128),而以5mL/只递增剂量4次连续免疫山羊后,抗体水平整体较高,第28天测定,抗体HI效价在29(1∶512),较恒定剂量免疫组高2个滴度水平.结果表明,采用犬细小病毒细胞毒蜂胶佐剂灭活抗原高免山羊可获得高效价的特异性抗血清.     

一种鸡抗猪丁型冠状病毒阳性血清的制备方法

为研究能否用鸡制备出猪丁型冠状病毒(PDCoV)阳性血清。将PDCoV用BEI灭活制备抗原,抗原与矿物油佐剂乳化制备疫苗,疫苗多次免疫SPF鸡,采集血清,检测血清中和效价、将血清用于IFA检测PDCoV。血清中和效价随免疫次数增加逐渐增高,4免后14日的中和效价平均值为1300;中和效价1000左右的血清混合作为阳性血清,1000倍稀释可用于IFA检测PDCoV。实验说明,用鸡制备PDCoV阳性血清的方法成立,制备的阳性血清可用于中和实验、IFA检测PDCoV。     

胸膜肺炎放线杆菌的分离鉴定及免疫预防

从陕西省某猪场分离到1株细菌，经培养特性，形态观察及生化试验等鉴定为胸膜肺炎放线杆菌（Actinobacillus pleuropneumoniae)；动物致病性试验对豚鼠，小白鼠有很强的致病性；该菌对羧苄青霉素，氯霉素等高度敏感，对氟哌酸，复合磺胺等耐药。分离菌制成油佐剂灭活苗，对猪进行一免后30d抗体凝集效价可达1：32，二免后30d抗体凝集效价可达1：128以上。     

木鳖子提取物对Asia I-O型口蹄疫双价灭活苗的免疫佐剂作用

分别将2500、500、100、20μg的木鳖子提取物（ECMS）或100μg皂树皂甙（QA）和AsiaⅠ-O型口蹄疫（FMD）双价灭活苗混合免疫豚鼠,以不另加佐剂的疫苗为对照组,于二免后3、6、10、14周采血并分离血清,观测血清中抗O型FMDV的抗体滴度、抗O型FMDVVP1结构蛋白抗体水平和抗AsiaⅠ型FMDV的抗体水平。结果显示,当ECMS剂量等于或少于500μg时,ECMS和FMD双价灭活苗混合免疫豚鼠,未见不良反应;疫苗中加入ECMS和QA后,则诱导更高的抗O型FMDV抗体滴度、抗O型FMDV VP1结构蛋白抗体和抗AsiaⅠ型FMDV抗体水平,尤其ECMS100μg组和QA100μg组（P〈0.01）或（P〈0.05）;且ECMS100μg组抗体水平高于QA100μg组。本研究结果提示ECMS可作为FMD灭活疫苗的候选佐剂。     

Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌三种佐剂灭活疫苗研制及免疫效果比较

本研究采用从武汉地区分离的Ⅰ型鸭疫里默氏杆菌,分别研制了油乳剂、蜂胶及黄芪多糖灭活疫苗,并从安全、效果等方面对这三种疫苗进行了比较.结果表明,三种疫苗的最佳免疫剂量分别为0.3、0.5、0.3mL/只;攻毒平均保护率为92%、84%、96%;免疫后3～21 d,三种疫苗产生的特异性抗体效价均逐步升高,免疫后10d抗体效价均显著高于免疫后7d(P<0.01),并且此时APS苗的血清抗体水平显著高于蜂胶苗(P<0.05).三种疫苗均具有良好的安全性和免疫原性,其中黄芪多糖灭活苗的效果较为突出.     

不同剂型新城疫-禽流感二联灭活疫苗免疫SPF鸡后抗体水平对比试验

不同剂型的佐剂对疫苗的免疫效果有较大的影响,本试验旨在对比不同剂型佐剂的新城疫-禽流感(简称"新-流")二联灭活疫苗的免疫效果,从而为生产上选择最佳剂型佐剂应用于新城疫-禽流流感二联灭活疫苗提供依据。分别将油包水型、水包油型、水包油包水型佐剂与新城疫及禽流感灭活抗原乳化成不同剂型的新城疫-禽流感(H9亚型,HP株)二联灭活疫苗,将这三种不同剂型的新城疫-禽流感(H9亚型,HP株)二联灭活疫苗分别免疫一组7日龄SPF鸡。每羽颈部皮下注射0.2 m L,同时设一组未免7日龄SPF鸡作为对照组,各免疫组与对照组SPF鸡于免疫组免后6、10、15、21、28、35 d进行采血,检测新城疫与禽流感抗体水平。结果表明:免疫油包水型疫苗组SPF鸡免疫后新城疫与禽流感抗体上升最快,在免后10、15、21、28、35 d的新城疫与禽流感抗体也最高,其次是免疫水包油包水型的,而免疫水包油型疫苗组的SPF鸡新城疫与禽流感抗体上升最慢,而且在免后10、15、21、28、35 d的新城疫与禽流感抗体也最低。此外,从各免疫组可以看出,在免后6 d时新城疫抗体已开始产生,在1log2以下,而禽流感抗体仍未产生。可见免疫新-流二联苗后,新城疫抗体比禽流感抗体更早产生,油包水型新-流二联苗的免后抗体高于水包油包水及水包油型,而且能持续刺激机体产生高水平抗体,更具优势。