奇妙单顶孢菌对绵羊捻转血矛线虫三期幼虫的体内外杀虫试验

在体外试验中评估7株当地分离的食线虫真菌奇妙单顶孢菌(Monacrosporium thaumasium)对捻转血矛线虫感染性幼虫(L3)的捕食能力。取2 mL试验菌株的菌悬液加入含有10 g捻转血矛线虫虫卵的粪便中作为试验组,对照组中不加真菌,然后进行粪便培养、L3分离和计数,计算L3的平均数和百分减少率。选择NBS063分离株灌服感染有捻转血矛线虫的绵羊,收集灌服后0 h(对照组)、12～96 h不同时间点的粪便(试验组),经粪便培养后,计算L3百分减少率。结果显示,7株当地分离株在与绵羊粪便中发育的幼虫相互作用后,与对照组相比,试验组粪便培养后所分离的L3显著减少(P0.05),它们对粪便中L3的减少率为89.21%～99.86%。NBS063灌服绵羊后,分别在灌服真菌后12,24,36,48,72,96 h对L3的减少率是85.18%,95.26%,94.82%,53.60%,29.49%和15.06%。7株奇妙单顶孢菌当地分离株具有将来应用于动物寄生线虫病生物防治中的潜力。     

捕食线虫性真菌--少孢节丛孢菌体外杀寄生性线虫幼虫的研究

对捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)菌株体外粪便捕杀马寄生性线虫幼虫进行了研究。结果表明：菌株可以在体外粪便中发育并发挥其捕食作用。在实验室条件下，其对寄生性线虫第一、二期幼虫的作用与对第三期幼虫的作用相比较．捕获致死速度快。菌株对马粪便中线虫幼虫的杀虫率高达98．7％；与对照组相比有显著差异。而且加入粪便的分生孢子数量在达到一定阈值后，再加入分生孢子，则杀虫率不再增加。此结论对捕食线虫性真菌今后临床的应用具有实际指导意义。     

口服少孢节丛孢菌孢子对家畜粪便中线虫幼虫的杀灭研究

对捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌（Arthrobotrys oligospora）菌株进行了临床杀家畜寄生性线虫幼虫作用的研究。结果表明：培养的少孢节丛孢菌分生孢子经口饲喂动物后，对粪便中线虫幼虫的杀虫率分别可达96.3％（羊）、96．5％（牛）和97．4％（马）。说明少孢节丛孢菌菌株分生孢子可通过家畜消化道，并保持了其捕食寄生性线虫的能力。研究结果为捕食线虫性真菌的临床应用奠定了重要基础。     

捕食线虫性真菌-少孢节丛孢菌理化特性研究

研究了捕食线虫性真菌一少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)的染色特性、分生孢子对外界理化因素的抵抗力以及菌丝对线虫第三期幼虫的吸引作用等。结果表明少孢节丛孢菌用革兰氏、瑞氏、姬姆萨氏液染色都能很好的着色；分生孢子对高温敏感，对抗生素不敏感，高浓度的氢离子或氢氧根离子能杀死分生孢子：但分生孢子耐低温，因此可用低温冷冻法保存捕食线虫性真菌分生孢子，其方法简便易行。首次解决了国内外在捕食线虫性真菌菌种保存中的难题。研究显示菌丝对线虫第三期幼虫无明显吸引力。     

低能氮离子束诱变选育捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌

为获取理想的生物防治捕食线虫性真菌菌株,达到利用自然天敌有效控制家畜寄生性线虫病的目的,作者利用低能氮离子注入诱变捕食线虫性真菌——少孢节丛胞菌(Arthrobotrys oligospora)的分生孢子,测定分生孢子萌发后菌丝的生长速度、产孢能力及菌株对线虫幼虫的捕食率,筛选正突变株。结果表明,低能氮离子束具有诱变少孢节丛孢菌的潜能,诱变后的1株少孢节丛孢菌的生长速度、产孢量和对线虫幼虫的捕食率呈现出了正突变效果。     

高原地区少孢节丛孢菌超微结构观察

采用玉米粉琼脂培养法,从高原地区(海拔2 000~3 000 m)土壤分离得到一株捕食线虫性真菌,根据其菌丝形态、分生孢子和捕食器官形态等结构特征,鉴定其为少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)。为了进一步了解少孢节丛孢菌形态学特征,对少孢节丛孢菌进行了超微结构观察,结果发现该菌有隔膜,主干菌丝上隔的分布较密集,分布距离不等,分生孢子梗不分支。菌环是由瘤状突起延伸形成弧形而形成,多个菌环接连形成菌网,线虫幼虫是被捕食器菌环或菌网捕获致死。     

少孢节丛孢菌孢子批量培养及通过动物消化道的试验

试验了捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)孢子批量培养技术、孢子通过兔消化道后的活力及其对绵羊消化液的体外耐受力。结果表明，少孢节丛孢菌孢子最适合以玉米粒为基质批量培养；少孢节丛孢菌的孢子在通过兔消化道后，可以保持存活；并且在体外对绵羊瘤胃液、真胃液、十二指肠液有一定的耐受力。     

多孢节丛孢的分离鉴定及对捻转血矛线虫幼虫的体外杀虫效果

对从黑龙江省伊春市采集的厩舍土壤进行食线虫真菌的分离鉴定和体外杀虫效果的研究。采用微玻片法在光学显微镜下观察并测量分生孢子、孢子梗、捕食结构;利用该真菌的分生孢子对绵羊捻转血矛线虫三期幼虫(L3)进行体外杀虫试验。结果:本研究所分离的真菌经鉴定为多孢节丛孢(Arthrobotrys superba,SDH063),且该真菌体外平均杀虫率达到了86.82%,具有显著的杀虫效果。     

一株少孢节丛孢分离株对两种抗真菌药的敏感性测定

为了评估少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)对两性霉素B和酮康唑的敏感性,本研究利用实验室保存的当地分离株(F447),通过孢子萌发抑制和菌丝生长抑制试验,使用线性回归评估了两种药物对该菌孢子萌发和菌丝生长抑制作用。结果显示,两性霉素B和酮康唑对A. oligospora孢子萌发的EC50(半最大效应浓度)分别为3.3770μg/mL和0.3283μg/mL,对其菌丝生长的EC50分别为4.0206μg/mL和0.1005μg/mL。结果证明,不论是分生孢子还是菌丝,酮康唑对试验真菌比两性霉素B敏感。     

少孢节丛孢菌的分离鉴定及捕食线虫活性研究

为研究新疆地区捕食线虫性真菌的生物活性,本实验采用玉米粉琼脂培养基(CMA)培养分离自新疆不同地区的捕食线虫性真菌,通过对分离株纯培养物的形态学观察和18S rDNA基因序列分析,鉴定4株少孢节丛孢菌,分别命名为XA3、XA6、XD1和XD4。18S rDNA基因遗传进化分析表明,XA3、XA6、XD1和XD4新疆分离株之间同源性较高,与GenBank登录的少孢节丛孢菌CBS289.82株同源性最高,分别为99.6%、99.5%、99.1%和98.9%,与形态学鉴定结果一致。捕食线虫活性测定试验表明,4个分离株在CMA中的捕食率为92.8%～97.6%;体外对绵羊粪便中线虫幼虫的捕食率为90.7%～95.4%,均具有很强的捕食活性。本研究为研究绵羊消化道线虫生物防控制剂奠定基础。     

两株少孢节丛孢菌在不同培养基中的形态学差异及生长特性

为了观察捕食线虫性真菌少孢节丛孢菌不同分离株在不同培养基中的形态学特性及生长情况,将少孢节丛孢菌分离株DH 066和F 107接种于10g/L麸皮琼脂(WBA)培养基、10g/L玉米粉琼脂(CMA)培养基、20g/L葡萄糖离子琼脂(DIA)培养基和20g/L葡萄糖琼脂(DA)培养基中,置于25℃恒温箱培养,观察不同分离株在不同培养基中的形态学特性并测定其产孢量。对2个分离株在6种不同培养基中菌丝生长长度每天进行定时测量。结果表明,该菌在4种培养基中的特征为分生孢子梨形至倒卵形,1个分隔,偶见2个分隔,分生孢子梗无色,直立,分隔,偶见分枝,分生孢子在10g/L WBA产量最大。此外,对2个分离株在不同培养基中生长速度研究表明,该菌在10g/L麸皮自来水琼脂(WBWA)培养基和10g/L玉米粉自来水琼脂(CMWA)培养基中生长最快。     

节丛孢属食线虫真菌对体外奥斯特线虫幼虫的捕食效果

本文在国内首次报道了几株节丛孢菌食线虫真菌（５株寡节丛孢菌和２株葡萄串状节丛孢菌）在体外对山羊奥斯特线虫第３期幼虫的捕食效果。结果表明：７株真菌对奥斯特线虫幼虫的捕获率分别在７５．０％￣９６．４％之间,具有较高的捕杀线虫能力,食线虫真菌对线虫的作用方式主要是通过在线虫周围形成菌网。     

捕食线虫性真菌-少孢节丛孢菌冻干生物制剂的制备

通过在含有0.05%琼脂粉的沙氏葡萄糖肉汤培养基中培养少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora)再转接到玉米粒培养基的方法,对少孢节丛孢菌分生孢子进行培养。在不同时间点,将培养好的分生孢子从培养基上洗脱并进行计数,然后制成冻干制剂,并观察其复苏情况,从而为少孢节丛孢菌冻干制剂的临床应用提供基础数据。结果显示:通过对少孢节丛孢菌冻干制剂在萌发率、生长率和捕食率三方面的复苏情况观察,少孢节丛孢菌冻干后的分生孢子在接种后4d,萌发率达到最大值79.5%,平均生长率为3.4mm/d,加入虫体后7d捕食率最高,为95.8%,平均每天捕食率为74.0%;少孢节丛孢菌冻干制剂在平均生长率和捕食率方面与对照组相比,差异均不显著(P>0.1)。结果表明,冻干制剂材料易得,方法简单易行,复苏效果良好,进一步优化后将具有产业化应用的前景。     

食线虫真菌Duddingtonia flagrans冻干制剂低温保存后体外杀虫效果研究

测定食线虫真菌Duddingtonia flagrans冻干制剂在4 ℃贮存2年期间对绵羊捻转血矛线虫感染性幼虫(L3)杀虫活性的变化。用食线虫真菌D.flagrans 当地分离株(SDH035)进行厚垣孢子培养,经真空冷冻干燥后制备成冻干制剂。三批冻干制剂分别在4 ℃保存1年和2年时取样,加入含有捻转血矛线虫虫卵的绵羊粪便为试验组,对照组的粪便不加真菌,然后进行粪便培养、L3分离和计数,计算L3的平均数和百分减少率。     

捕食线虫性真菌18S rDNA基因序列与种系发生关系研究

对捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌A1分离株(Arthrobotrys oligospora A1)的18S rDNA基因序列进行了研究。结果表明：其18S rDNA全基因序列为1769bp，在进化树上与同种国外分离株A．oligospora var oligospora 1最为接近，同源性为94．7％。这与二者都具有捕食性结构—菌网的特点相一致。证实捕食线虫性真菌的捕食性结构与捕食线虫性真菌种系发生有关。从少孢节丛孢菌3个分离菌株(Arthrobotrys oligospora A1、A．oligospora 1、A．oligospora2)的进化树及同源性来看。不同国家地区的丛孢菌属(Arthrobotrys)分离株确实存在差异。     

新疆乌鲁木齐地区捕食性真菌圆锥节丛孢菌的分离鉴定

为了给动物线虫病的防治工作提供适应本地生存的候选捕食性真菌菌株，对新疆乌鲁木齐地区采集的土壤进行筛选，采用土壤撒布法，以秀丽隐杆线虫(Caenorhabditis elegans)作为诱饵线虫对土壤中的捕食性真菌进行分离鉴定，成功分离出具有捕食线虫功能的真菌1株。通过形态学观察，该菌捕食器官为黏性菌网，分生孢子无色，呈圆锥形，中央有一分隔，形态结构与节丛孢属相符。分子生物学分析显示，该分离株的ITS2基因序列与圆锥节丛孢菌(Arthrobotrys conoides)的同源性为99%～100%,判定该菌为圆锥节丛孢菌的新疆分离株。在实验室条件下，利用该菌株进行捕食线虫活力测定，结果发现该菌株在CMA培养基中对马圆形线虫三期幼虫的捕食率为97.47%,具有较强的捕食效率，可作为新疆地区动物线虫病生物防治工作的候选菌株。     

嗜线虫真菌Duddingtonia flagrans减少绵羊粪便中线虫感染性幼虫剂量测定

嗜线虫真菌Duddingtonia flagrans是目前发现的一种最具有动物胃肠道线虫病生物防治应用潜力的真菌。为了解该菌捕杀绵羊粪便中感染性幼虫效果与剂量的关系,为今后该制剂应用和质量检验标准的制定提供依据,用不同剂量的厚垣孢子,分别以不经消化道直接加入感染羊粪便,或作添加剂通过饲喂进入消化道后采集直肠粪便,经培养检测感染性幼虫数量的变化。结果表明,嗜线虫真菌Duddingtonia flagrans具有良好的捕杀胃肠道线虫感染性幼虫的生物学特性。以制剂厚垣孢子4×103/g剂量加入感染羊粪便,或以每天5×105/kg体质量的剂量饲喂绵羊,可使粪便培养物中线虫感染性幼虫数减少83.6%~87.5%。     

捕食线虫性真菌的分离培养技术与形态学

分离培养捕食线虫性真菌的最佳培养基为 0 .4g/ L 玉米粉琼脂培养基 (CMA) ;0 .4g/ L 玉米粉液体培养基可作为保存菌种培养基。在分离培养过程中 ,必须加入活的线虫第 3期幼虫 ,以诱导菌株产生捕食性器官——菌环、菌网 ,并与其他真菌鉴别。捕食线虫性真菌有菌丝和孢子 2种形态 ,其发育时期不同。本试验分离的少孢节丛孢菌(Arthrobotrys oligospora) ,菌丝发达 ,无色有隔 ,隔距不等 ;分生孢子梗直立不分支 ,分生孢子围绕着分生孢子梗呈轮状排列 ,似梅花瓣状 ,2层以上 ;孢子呈倒卵形 ,丰满无色 ,有横隔 ,游离端大而钝圆 ,梗端小而稍尖。     

捕食线虫性真菌——少孢节丛孢菌CIMH1株捕食特性研究

本研究首次对国内土壤中分离出的捕食线虫性真菌—少孢节丛孢菌ＣＩＭＨ１株（Ａｒｔｈｒｏｂｏｔｒｙｓｏｌｉｇｏｓｐｏｒａｓｔｒａｉｎ：ＣＩＭＨ１）捕食马线虫第３期幼虫的活性、效力及杀虫机理进行了试验。结果表明菌株生长环境对其捕食活性有很大影响。在２０℃、有氧条件、玉米粉浓度相对较低（０．４ｇ／Ｌ）、菌丝生长较稀疏的ＣＭＡ培养基中,捕食活性最佳。捕食线虫时,在虫体运动刺激及虫体内部某些物质诱导下,菌株会产生一些特殊捕食性结构,如粘性菌丝（Ｓｔｉｃｋｙｂｒａｎｃｈｅｓ）、粘性菌环（Ｓｔｉｃｋｙｒｉｎｇｓ）和粘性菌网（Ｓｔｉｃｋｙｎｅｔｗｏｒｋｓ）等。通过这些功能性构造,菌株将线虫捕获并杀死消化。少孢节丛孢菌ＣＩＭＨ１株在最佳条件下,对马线虫第３期幼虫的平均捕食效力为７８．１５±３．８％。     

不同氨基酸对少孢节丛孢菌（Arthrobotrys oligospora）捕食器诱导效果的研究

试验研究了11种氨基酸在玉米粉琼脂培养基上对捕食线虫性真菌——少孢节丛孢（Arthrobotrys oligospora）产生捕食器及对线虫第3期幼虫捕食睛况的影响。结果表明：氨基酸可以诱导少孢节丛孢菌产生捕食器,且不同种类氨基酸对其产生捕食器的影响表现不同,各个浓度之间差异明显,其中以浓度为0．05g/L的L-苯丙氨酸（L—Phe）、L-蛋氨酸（L—Met）、DL-缬氨酸（DL—Val）的诱导效果较好;L-苏氨酸（L—Thr）、L-异亮氨酸（L—Leu）、L-亮氨酸（L—Leu）、L-色氨酸（L—Trp）和L-缬氨酸（L—Val）属于中等;L-赖氨酸（L—Lys）、L-谷氨酸（L—Gin）和L-组氨酸（L—His）表现较差。于菌丝生长初期、中期、后期分别加入氨基酸时,不同时期捕食器的产生差异也较为显著,生长初期和生长中期加入氨基酸的试验组捕食器产生良好;前者又明显好于后者。上述现象提示,少孢节丛孢茵在没有线虫诱导的情况下,加入一定浓度的某些种类氨基酸,同样可以刺激其产生大量捕食器。而且捕食情况表明这些捕食器与线虫诱导刺激产生的捕食器一样,完全可以捕食线虫幼虫。