免套袋栽培苹果采后真菌病害鉴定及精油抑菌研究

【目的】苹果免套袋栽培是我国苹果产业发展的必然趋势,而在此模式下,苹果的病虫害发生较为严重。探究免套袋苹果采后真菌的发病情况以及精油对其抑菌效果,为免套袋苹果病虫害的绿色防控奠定基础。【方法】分别调查山东苹果主产区的免套袋、套袋2种栽培模式下苹果的采后发病情况;采用传统形态鉴定结合ITS序列比对对免套袋苹果致病真菌进行了分类统计及种属鉴定;熏蒸处理评价了肉桂精油对致病菌的离体抑菌效果,并通过电子显微镜分析了其抑菌机制。【结果】免套袋苹果的采后发病率显著高于套袋苹果(p 0.05),免套袋苹果果实上共分离鉴定出6种病原真菌,分别为葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、链格孢属(Alternaria)、粉红单端孢菌(Trichothecium roseum)、韦司梅拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis vismiae)、胶孢炭疽菌(Colletotrichum gloeosporioides)及产核枝顶孢菌(Acremonium sclerotigenum)。80μL·L~(-1)的肉桂精油对以上6种真菌的抑菌率均超过80%。精油对苹果的活体防治试验表明,80μL·L~(-1)肉桂精油可显著降低苹果果实的发病率(p 0.05)。经显微镜分析可知,精油抑制了孢子萌发,改变了病原菌的正常菌丝形态。【结论】肉桂精油作为免袋栽培苹果采后防腐抑菌剂有较好的应用前景。     

独活提取物抑制柑橘病原真菌活性成分的分离与鉴定

【目的】为了探明独活抑制柑橘病原真菌的活性成分。【方法】采用生长速率法、溶剂萃取、硅胶柱层析、气相色谱-质谱联用(GC-MS)等方法研究独活乙醇提取物对3种柑橘贮藏病害病原真菌的抑菌作用,并分离和鉴定其抑菌活性成分。【结果】独活乙醇提取物中含有高效抑制柑橘炭疽菌的活性物质。GC-MS鉴定B2组分中含有4种香豆素类化合物—异佛手柑内酯、牛防风素、茴芹内酯、异茴芹内酯。异佛手柑内酯、茴芹内酯、异茴芹内酯3种化合物对柑橘炭疽菌的EC50在45 mg.L-1左右,其中茴芹内酯的抑制活性最好,其EC50为41.521 6 mg.L-1。显微观察发现,茴芹内酯处理导致柑橘炭疽菌菌丝体分支增多、畸形,部分隔膜消失等变化。【结论】异佛手柑内酯、茴芹内酯、异茴芹内酯为独活抑制柑橘病原真菌的主要活性物质。     

野葛花乙醇提取物对植物病原真菌的抑制作用研究

以黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、柑橘青霉菌(Penicillium digitatum)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、梨黑星病菌(Venturia nashicola)5种植物病原真菌为供试菌种,采用牛津杯法,研究了野葛花乙醇提取物的抑菌活性及其对植物病原真菌的抑菌效果.结果表明:野葛花的乙醇提取物对这5种植物病原真菌均有不同程度的抑制作用;随着提取物浓度的增大,其对植物病原真菌的抑菌效果逐渐增强,当达到某一值后,抑制效果又随其浓度的增加逐渐减弱.另外,黄瓜枯萎病菌(Fusarium oxysporum)、稻瘟病菌(Magnaporthe grisea)、柑橘青霉菌(Penicillium digitatum)、番茄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、梨黑星病菌(Venturia nashicola)的最适野葛花乙醇提取物抑菌质量浓度分别为0.1250、0.2500、0.2500、0.2500、0.5000 g/mL,其中番茄灰霉病菌的最低抑菌质量浓度应大于0.0625g/mL.因此,野葛花的乙醇提取物在抑制植物真菌性病害方面具有广阔的开发利用前景,可作为新型植物源生物农药的良好剂型.     

新鱼腥草素钠对柑橘指状青霉的抑菌作用

通过离体和活体试验测试新鱼腥草素钠(SNH)对柑橘绿霉病的病原菌指状青霉(Penicillium digitatum)的抑菌效果,最小抑菌浓度和最小杀菌浓度分别为1和2 mmol·L^-1;随SNH浓度升高,指状青霉孢子萌发率显著下降,相对电导率显著上升;透射电镜结果表明,1 mmol·L^-1 SNH处理可破坏指状青霉细胞结构,导致细胞质成分溶解,线粒体结构消失,发生质壁分离。同时,1 mmol·L^-1 SNH可抑制多种柑橘真菌病害的生长,具有广谱抑菌性。采用5、10 mmol·L^-1 SNH+指状青霉孢子混合液人工接种夏橙果实,其病斑直径显著小于对照。这些结果表明,SNH可显著抑制指状青霉的生长,具有成为柑橘绿霉病防控药剂的前景。     

杧果露水斑病病原菌生物学特性测定

【目的】明确杧果新病害露水斑病病原菌(Cladosporium cladosporioides)的生物学特性,以便为该病害的发生规律研究提供理论依据。【方法】测定了不同条件对病原菌菌丝生长、产孢量和孢子萌发的影响。【结果】菌丝在杧果葡萄糖琼胶培养基和PDA培养基上生长最佳,最适生长温度20℃,最适p H值7~8,光照对菌丝生长影响不明显,菌丝对有机碳源乳糖和有机氮源氨基乙酸利用最好,菌丝致死温度为50℃、10 min;产孢量以25℃、p H 6、光暗交替、麦芽糖为碳源、L-胱氨酸为氮源时最大;分生孢子萌发率以25℃、p H7、液态水、有机碳源阿拉伯糖、有机氮源L-天冬氨酸为最适条件,分生孢子致死温度50℃、10 min。【结论】杧果露水斑病菌喜好20~25℃、弱酸至弱碱、高湿、富含有机营养的环境。     

红灯樱桃采后主要病原真菌的鉴定及Bacillus velezensis G-1天然产物的广谱抑菌效果

【目的】明确Bacillus velezensis G-1天然产物在樱桃采后抗真菌病害中的抑菌效果,为樱桃采后病害广谱生物防治药剂研发提供新型开发源。【方法】首先,以红灯樱桃采后病果为材料,通过组织块分离、纯化、形态特征、ITS序列鉴定、特异基因和科赫法则确定樱桃采后病原真菌种类;其次,以获得的病原菌为靶标,通过生长速率法和平板对扣法研究了B. velezensis G-1脂肽和2, 4-二叔丁基苯酚的广谱抑菌效果。【结果】米根霉YT-1(Rhizopus oryzae)、镰刀菌YT-2(Fusarium dlaminii)、藤仓镰刀菌YT-4(Fusarium fujikuroi)、链格孢属YT-5与YT-7(Alternaria sp.)、天竺葵葡萄孢YT-6(Botrytis pelargonii)、冻土毛霉YT-8(Mucor hiemalis f. hiemalis)和皮壳青霉YT-9(Penicillium crustosum)为红灯樱桃采后主要病原真菌;8株病原真菌中以菌株YT-1、YT-6和YT-8致病性较强;B. velezensis G-1脂肽物质(500μg·mL-1)除对M. hiemalis f. hiemalis和P. crustosum的抑菌率低于60%外,对其余各病原真菌抑菌率均高于70%;100μL挥发性物质2, 4-二叔丁基苯酚(10μg·μL-1)除对P. crustosum的抑菌率为0.41%外,对其余各病原真菌的抑菌率均高于90%。【结论】首次在红灯樱桃中发现了镰刀菌(F. dlaminii)和藤仓镰刀菌(F. fujikuroi),说明近年来红灯樱桃采后病害发生了变化,新增了镰刀菌属病原真菌;发现B. velezensis G-1脂肽物质和挥发性物质2, 4-二叔丁基苯酚可用于防治樱桃上述采后病害。     

赣南脐橙园枯枝微生物的研究初探

为探明赣南脐橙园内枯枝表层微生物群落,及时了解不同季节枯枝上的病原菌,为赣南柑橘产区从源头上防治病害提供理论依据及技术支撑,用PDA培养基进行枯枝表层微生物的筛选鉴定。结果表明,4～8月份共筛选出7株单菌株,经16SrDNA鉴定分别为Ap1-1和Au4-3为枝状枝孢菌属(Cladosporium cladosporioides)、Ap1-2和Au3-1为短小杆菌属(Curtobacterium)、Ap4-2为甲基细菌(Methylobacterium komagatae)、Au1-1为裂褶菌(Schizophyllum commune)和Au4-4为鞘氨醇单胞菌属(Sphingomonas trueperi)。     

宁夏枸杞果内生真菌多样性及其分布

以枸杞为试材,采用组织匀浆法从不同生长期的枸杞果中分离内生真菌,根据培养性状、菌落、孢子等的形态特征和rDNA-ITS序列分析,对分离菌株进行鉴定;根据枸杞果内生真菌的定殖率、相对频率、物种多样性指数、丰富度指数和相似性系数分析其组成特点。结果表明:从枸杞果中分离得到29株内生真菌,这些菌株分属于链格孢属(Alternaria)、枝顶孢属(Acremonium)、帚枝霉属(Sarocladium)、亚隔孢壳属(Didymella)、派伦霉属(Peyronellaea)、茎点霉属(Phoma)和盘二孢属(Marssonia)7个属;其中链格孢属(Alternaria)、枝顶孢属(Acremonium)和帚枝霉属(Sarocladium)为优势属,分别占总菌株数的31.0%、27.6%和27.6%;成熟期枸杞果内生真菌物种多样性指数最大,幼果期枸杞果内生真菌物种多样性指数最小。枸杞果内含有丰富的内生真菌资源,成熟期枸杞果内生真菌多样性指数和丰富度指数远远高于幼果期和变色期。     

采用UPLC-MS/MS技术分析‘枸头橙’针刺和枝代谢物

【目的】明确柑橘针刺和枝的差异代谢物,探究二者差异发育的调控因素,为深入研究针刺发育机制提供依据。【方法】以‘枸头橙’(Citrus aurantium L.‘Goutou’ Sour Orange)为材料,采用石蜡切片技术分析针刺和枝内部组织结构差异;利用超高效液相色谱—串联质谱(UPLC-MS/MS)和广泛靶向代谢组技术检测并筛选针刺和枝的差异代谢物。【结果】柑橘枝内表皮细胞存在分泌道、叶或侧枝原基细胞,而针刺中则无。共筛选到针刺和枝的差异显著代谢物138种,枝中上调代谢物81种,下调代谢物57种,以苯丙素类、黄酮类、萜类、生物碱类和多酚类等次生代谢物为主。差异代谢物注释到74条通路上,主要富集通路包括代谢通路、次生代谢物合成和黄酮(黄酮醇)类合成等路径。【结论】柑橘针刺和枝内部组织结构存在明显差异,明确了二者之间以次生代谢物为主的差异显著代谢物及其主要注释通路,表明次生代谢物在针刺和枝的差异发育中起着重要调控作用,为深入研究针刺发育机制奠定了一定的基础。     

抗生素对中华猕猴桃外植体再生的影响

【目的】为确定中华猕猴桃遗传转化中适宜的抗生素种类和浓度,【方法】以中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片为外植体,研究了抗生素对外植体再生的影响。【结果】抗生素敏感性测定发现,当卡那霉素质量浓度为20 mg.L-1时,愈伤组织及不定芽分化率均为0,因此,20 mg.L-1卡那霉素为适宜的筛选浓度;头孢霉素和羧苄青霉素对中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片分化均有抑制作用,但头孢霉素对叶片分化的抑制作用比羧苄青霉素小,结合抑菌试验,将浓度400 mg.L-1头孢霉素确定为适宜于中华猕猴桃‘伏牛95-2’叶片遗传转化的抑菌抗生素。【结论】卡那霉素20 mg.L-1和头孢霉素400 mg.L-1为中华猕猴桃‘伏牛95-2’遗传转化适宜的抗生素及质量浓度。     

拮抗放线菌MY-4的分离、鉴定及其对果蔬病原菌的抑制作用

【目的】为了鉴定从沙糖橘果实表面分离得到的拮抗放线菌株MY-4,并确定该菌株对果蔬病原菌的拮抗作用,【方法】采用分析MY-4形态学、生理生化特性及16S rDNA序列相似性方法以确定其分类地位,并采用平板对峙培养法和生长速率法测定了其抑菌活性。【结果】结果显示,菌株MY-4为小白链霉菌(Streptomyces albulus Routien),菌株MY-4及其无菌发酵液对供试16种果蔬病原真菌均具有拮抗作用,其中菌株MY-4对香蕉炭疽病菌的拮抗作用最强,平板抑菌带宽度达17.08 mm,无菌发酵液对柑橘绿霉病菌的拮抗作用最强,菌丝生长抑制率高达98.82%,【结论】小白链霉菌菌株MY-4具有活性高、抑菌谱广的特点,有望继续研究开发成新的生防剂。     

根癌农杆菌介导的CG1-400-RNase基因转化创制锦橙转基因再生植株

【目的】为了快速有效地利用基因工程的方法获得柑橘无核新种质,【方法】以我国特色多核柑橘优良品种锦橙实生苗上胚轴切段为外植体,采用根癌农杆菌介导法进行能导致种子败育基因CG1-400-RNase的转化;为快速有效地筛选出转化子,在实生苗上胚轴切段转化再生过程中,根据不同发育阶段的组织或器官对抗生素的敏感程度不同采用不同的选择压。【结果】结果表明,在抗性芽再生过程中卡那霉素质量浓度设定为50 mg.L-1,获得的362个抗性芽转入卡那霉素质量浓度为100 mg.L-1的伸长培养基中进行伸长培养后,进行早期PCR检测,获得28个阳性芽;经过不定芽诱导生根或试管嫁接,获得22株完整植株。【结论】再生植株经PCR和Southern杂交检测,获得2株目的基因以单拷贝的形式插入锦橙基因组的转基因植株,为最终获得具有无核性状且可稳定遗传的柑橘新种质奠定了基础。     

脐橙精油氧化还原性对油胞下陷病害的影响

【目的】为了探索脐橙果皮精油氧化还原性与柑橘果实油胞下陷病害的关系,【方法】以奉节脐橙为试材,对奉节脐橙正常和油胞下陷病发生较严重的果实在病变过程中果皮精油的pH、维生素C含量、活性氧产生速率及抗氧化活性的变化情况进行了分析。【结果】结果表明,在整个贮藏过程中,奉节脐橙果皮油胞下陷病发生率和果皮精油pH随贮藏时间的增加而上升,外皮组织中溢出的精油的氧化性使病变率显著增加;正常果的果皮精油产生活性氧速率低于症状果,但抗氧化活性和维生素C含量高于症状果。【结论】说明奉节脐橙精油氧化还原性是果皮油胞下陷病害的影响因素。     

锥栗植株再生体系的建立

【目的】为了建立锥栗再生体系,【方法】以锥栗胚为外植体,分析不同基因型、基本培养基及激素组合对锥栗不定芽的诱导、增殖和生根的影响。【结果】结果表明,油榛是锥栗组织培养最佳的基因型;锥栗不定芽诱导的最适培养基为M(NH4NO3804 mg·L-1+KNO31011 mg·L-1+FeSO4.H2O 27.8 mg·L-1+1/2MS其余无机盐+MS有机)+6-BA 2.0mg·L-1+IBA 0.2 mg·L-1,其出芽率为76%;芽增殖的最佳培养基为M(同上)+6-BA 0.5 mg·L-1+IBA 0.1 mg·L-1,其增殖倍数达18;诱导生根的最佳培养基为M(同上)+IBA 0.5 mg·L-1,其生根率为48%。【结论】运用上述体系可获得完整锥栗再生植株。     

Microencapsulation of clove essential oil improves its antifungal activity against Penicillium digitatum in vitro and green mould on Navel oranges

?Relatively high levels of clove essential oil (CEO) necessary for in vivo inhibition of postharvest pathogens imply that its antifungal activity should be reinforced. Hence, this study aimed to determine whether microencapsulation technology enhances the antifungal activity of CEO against Penicillium digitatum, the causal agent of citrus green mould, in vitro and on Navel oranges. Microencapsulation of CEO resulted in a respective reduction of minimum inhibitory concentration and minimum fungicidal concentration from 500 μg/ml to 125 μg/ml and 250 μg/ml, indicating the enhancement of fungistatic and fungicidal activity with respect to that of the pure oil. CEO microcapsules had the best control of lesion diameter and decay development (0.79 mm, 8.64%) in Navel oranges after 5 days’ storage at 25°C, followed by pure oil treatment (4.2 mm, 55.56%). In the vapour phase, CEO microcapsules also exhibited the highest ability to control green mould of Navel oranges. Furthermore, CEO microcapsules showed stronger suppressive activity of spore germination and germ tube elongation of P. digitatum than pure oil. These results indicate that the antifungal activity of CEO was considerably enhanced when it was converted into a microcapsule.     

抑霉唑硫酸盐在柑橘果实中的降解规律研究

【目的】为柑橘抑霉唑硫酸盐的合理使用提供科学依据,【方法】采用浸果法对抑霉唑硫酸盐在柑橘中消解动态进行了研究。样品中的抑霉唑硫酸盐用甲醇提取,液液分配去除杂质,离子对高效液相色谱检测。【结果】当添加水平为0.10～5.0 mg.kg-1时,添加回收率为73%～91%,相对标准偏差为1.5%～5.8%,最低检测浓度为0.10 mg.kg-1。抑霉唑硫酸盐在柑橘全果和橘皮中的降解动态曲线符合一级动力学方程,半衰期分别为63 d和60 d。【结论】该检测方法的灵敏度、精确度、准确度均满足农药残留检测要求。抑霉唑硫酸盐在柑橘上降解较快。     

红橘精油对橘小实蝇产卵量的影响及化学成分分析

【目的】为研究红橘(citrus reticulate)精油对橘小实蝇(Bactrocera dorsalis)产卵行为的影响。【方法】用浸泡法测试不同浓度红橘精油处理后杧果上的橘小实蝇产卵量,并对红橘精油进行GC-MS分析。【结果】结果表明,经不同浓度红橘精油处理的杧果上的橘小实蝇着卵量均显著高于对照,且随着红橘精油浓度的提高其产卵量升高。红橘精油主要成分为柠檬烯,松油烯,月桂烯,α-蒎烯,4-异丙基甲苯,芳樟醇等。【结论】初步确定,红橘精油对橘小实蝇产卵具有显著的引诱活性;这些主要成分可能是红橘精油引诱橘小实蝇产卵的主要物质。     

设施栽培‘峰后’葡萄营养元素和水分吸收规律研究

【目的】为探明葡萄树各生长发育阶段的肥水需求规律,【方法】以珍珠岩培7 a生‘峰后’葡萄为试材,循环供给Hoagland配方营养液,研究了高(N:180 mg.L-1)、中(N:120 mg.L-1)、低(N:60 mg.L-1)营养液浓度下,N、P、K、Ca、Mg、Fe、Mn、B、Zn、Cu和水分的周年吸收谱以及主要物候期叶片和浆果中矿质元素含量,并测定了树体生长和果实发育状况。【结果】结果表明,萌芽后随着新梢的快速生长,各种必需营养元素的吸收量快速增加,日均吸收量的最大值大都出现在果粒快速膨大到成熟期间,其间各种营养元素的吸收量占到全年吸收量的60%～70%。以新梢生长中庸、果实品质最佳的供给浓度(N:120 mg.L-1)处理树的吸收量及叶面积换算,666.7 m2各种营养元素和水的全年净吸收量为Ca 29.40 kg、N 18.35 kg、K 15.42 kg、Mg 4.97 kg、P 1.76 kg、Fe 106.87 g、B 32.76 g、Mn 19.73 g、Cu 11.10 g、Zn9.78 g和水210.97 m3。叶片中也以N和Ca的含量最高,其次为K、P、Mg。除K外,矿质元素在果实中的含量都低于叶片。【结论】确定了设施栽培葡萄各生长发育阶段营养元素的吸收谱和吸收总量,可供葡萄园肥水管理和葡萄专用肥料的开发作参考。