木麻黄青枯病菌的分离及强致病菌株的筛选

[目的]筛选出强致病菌株用于木麻黄抗病育种研究工作。[方法]在广东沿海木麻黄青枯病发病区采集病根,开展病原菌两种不同分离方法的比较研究,对分离出的31个病株进行16s rRNA测序鉴定及致病性测定。[结果]采用稀释分离法及根系溢出法在TTC培养基上共分离出了31个病原菌株,根系溢出法操作简便,杂菌含量低,分离率在60%左右,可作为常规稀释分离法的补充。31个菌株进行分子鉴定,只有22个菌株扩增出了特异性条带,经测序比对确定这22个菌株为青枯菌。青枯菌株致病性测定结果显示菌株致病性在无性系间、菌株间及菌株与无性系间的交互作用均具有极显著差异(P0.01),不同接种方法间菌株致病性相关系数值较小,介于0.496 6~0.731 0之间,即室内水培接种与小苗盆栽接种不存在密切的直线相关关系。[结论]综合选择在不同无性系及不同接种方法中均具有较强致病性的GL-2、H、M、TC-1、F、Q菌株作为下一步木麻黄种质资源抗性鉴定及抗病育种研究试验菌株。     

木麻黄无性系对青枯菌抗性及菌株变异初探

用３个青枯菌菌株，对７个木麻黄无性系作接种测试和菌株兔血清双向琼脂扩散试验，结果表明：木麻黄无性系对青枯菌的抗性以水平抗性为主，也存在垂直抗性；３个菌株致病力顺序与其来源无性系的抗病力顺序相一致，菌株对来源无性系接种死亡率显著高于其它菌株，显示了寄主与病原物相关变异的迹象。从同一地点不同无性系分离的菌株，存在抗原──抗体差异，表明在高抗无性系的选择压力下，青枯菌可能发生变异，而形成能克服特定抗病无性系的菌株。     

木麻黄根瘤内生菌——弗兰克氏菌对青枯病菌的抑制作用研究

试验结果揭示了木麻黄弗兰克氏菌和木麻黄根瘤浸提液能抑制青枯菌生长,弗兰克氏菌Ｏｒ９３０２和９０２１菌株的抑菌效果比其它供试菌株高;粗枝木麻黄的根瘤浸提液抑菌效果较山地木麻黄和普通木麻黄的抑菌效果好。苗圃试验表明根瘤量高的苗木对青枯病具有较强的抵抗能力。     

青枯假单胞杆菌对木麻黄致病机理的初步研究

通过用病原悬浮液及培养滤液等对木麻黄元根苗和有根苗进行接种处理，发现青枯菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｏｌｏｎａｃｅｚａｒｕｍ Ｅ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ培养滤波对木麻黄具有强烈的致萎作用。小苗枯萎主要是由滤液中毒性物质诱导植物产生填充体堵塞民管所致细菌培养滤液中毒性物质对热稳定，在ｐＨ－４－１０的范围内毒性不受影响、而且能够致萎多种针阔叶树种小枝，个有非特异性。     

青枯假单胞杆菌对木麻黄致病机理的初步研究

通过用病原菌悬浮液及培养滤液等对木麻黄无根苗和有根苗进行接种处理，发现青枯菌ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｏｌｏｎａｃｅａｒｕｍＥ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ培养滤液对木麻黄具有强烈的致萎作用。小苗枯萎主要是由滤液中毒性物质诱导植物产生填充体堵塞导管所致。细菌培养滤液中毒性物质对热稳定，在ｐＨ４～１０的范围内毒性不受影响，而且能够致萎多种针阔叶树种小枝，具有非特异性     

木麻黄Frankia菌优良菌株的筛选和应用

本文报导了从木麻黄根瘤菌中筛选优良菌株并进行回接试验的结果。筛选出Ｕ４和Ｃｃ３８Ａ优良菌株,接种后使苗木早期生物量提高９０．７％～２７５．６％,苗高增长２０．０％～３１．６％。造林７年后,粗枝木麻黄树高比对照增加１２．４５％～１５．１４％,胸径增大１０．２８％～２２．１３％;细枝木麻黄胸径增大６．３４％～９．４４％,树高增加６．０５％或生长与对照差不多。结瘤侵染力主要由菌株特性决定,但与菌体培养时间、接种菌体量和浸泡时间密切相关。     

青枯菌胞外酶对木麻黄的致病作用研究

对三个致病性不同的木麻黄青枯菌Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍ Ｅ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ产生的胞外酶活性测定显示,聚半乳糖醛酸酶（果胶酶）在活性在各菌之间无明显差别,但纤维素酶活性差别明显,并随菌株的致病性上升而增加,菌株致病性与酶活性具有高度正相关。     

几种不同抗菌素对培养桉树青枯病菌的影响

在Ｋｅｌｍａｎ的液体培养基本和固体培养基中加入一定浓度的抗菌素，然后接种桉树青枯病菌培养，培养观察２￣１５天，结果表明：在所试抗菌素中，只有６００ｍｇ／ｋｇ农用链霉素对桉树青枯病菌的培养抑制能力强最，抑制时间长达１５天以上。     

木麻黄对青枯菌的水平及垂直抗性研究

６个青枯假单胞杆菌菌株对７个木麻黄无性系的交互接种试验表明，病害的相对强度在无性系与菌株间存在着显著性差异，无性系与菌株之间的交互作用也极显著。结果说明在木麻黄－青枯菌病理系统中，同时存在着水平抗性和垂直抗性或水平致病性与垂直致病性；这一交互作用特征的揭示对于木麻黄的抗病育种及防滑战略具有重要意义。     

木麻黄青枯菌的致病性与其对寄主根表吸附的关系研究

对３个不同致病性的青枯菌菌株接种于７个不同抗性的木麻黄无性系上的研究表明：各菌株间对无性系根表吸附量达显著差异，而无性系间对同一菌株的吸附量差异不显著；根表吸附量与菌株的致病性呈负相关；说明青枯菌对木麻黄根表的吸附，就是两者的识别过程，而识别程度不同，则体现在吸附量的大小上，但是单从吸附量所反映的青枯菌致病性，难以确定出其对苗木最终的感病程度。     

青枯菌胞外酶对木麻黄的致病作用研究

对三个致病性不同的木麻黄青枯菌ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓｓｏｌａｎａｃｅａｒｕｍＥ．Ｆ．Ｓｍｉｔｈ产生的胞外酶活性测定显示,聚半乳糖醛酸酶（果胶酶）活性在各菌株之间无明显差别,但纤维素酶活性差别明显,并随菌株的致病性上升而增加,菌株致病性与酶活性具有高度正相关（ｒ＝０．９６）。     

联合固氮菌对桉树青枯病菌的抑制作用研究

采用纸碟法和液体比浊法研究了联合固氮菌对桉树青枯病菌茄拉尔氏菌(Ralstonia solanacearum (E.F.Smith) Yabuuchi)的抑制作用.结果表明两株联合固氮菌1和固氮菌2及其培养物上清液对青枯菌Ra均有不同程度的抑制作用,上清液抑制效果好于菌悬液抑制效果,混合菌株的抑制作用高于单一菌株的抑制作用.温室接种结果表明,接种固氮菌1和同时接种固氮菌1及青枯菌Ra的处理比不接种对照(CK)桉树苗高增加33.19%和31.09%;单接种固氮菌1的桉树苗地上干质量比对照(CK)增加123.23%,同时接种固氮菌1及青枯菌Ra的桉树苗比对照(CK)地上干质量增加93.22%;接种固氮菌1和同时接种固氮菌1及青枯菌Ra的处理比对照(CK)桉树苗地下干质量分别增加101.52%和71.81%.接种固氮菌可以降低桉树苗木死亡率38.24%.桉树幼苗温室接种试验证明接种固氮菌的桉树苗木生长旺盛,茎干较对照粗壮,长势整齐,固氮菌可以提高桉树苗木对青枯病的抗性.     

木麻黄青枯病菌(Pseudomonas solanacearum E.F.Smith)毒性菌株的筛选

接种实验发现,木麻黄青枯病菌存在着强致病性、弱致病性、非致病性菌株之分。致病性不同的三个菌株进行电镜观察,菌体在形态上存在差别;不同菌株的培养性状观察,菌落在形状、颜色、流动性上有差别。毒性菌株保存实验结果以在无菌蒸馏水中室温保存为好,二年不丧失致病性,分离毒性菌从病苗上比从成年发病株上容易。     

大孔吸附树脂纯化木麻黄总黄酮及对青枯菌的抑制

为探索获得较为纯化的木麻黄总黄酮的便捷有效方法,研究了利用大孔吸附树脂分离纯化木麻黄总黄酮的工艺。结果表明:选择D101大孔吸附树脂的最佳工艺条件为吸附液料比20∶1(黄酮粗提液∶大孔吸附树脂,mL.g-1);吸附液pH为2;解吸液pH为11;最佳静置吸附时间为90 min;乙醇洗脱体积分数为80%;洗脱液料比为20∶1(80%乙醇溶液∶大孔吸附树脂,mL.g-1)。分离到的总黄酮对青枯菌具有明显的抑制作用。同时也证明了气质联用不适于鉴定黄酮类大分子物质。     

普通木麻黄抗逆无性系的筛选

在室内初步筛选出抗青枯病能力较强的普通木麻黄１２个无性系的基础上，在木麻黄青枯病重病区长乐县大鹤林场进行造林对比试验，从中进一步选择出生长性状良好、抗逆性较强的５个无性系平２０—４、Ｐ１０—３３、５０１、６０１、７０１，其平均死亡率分别仅为７．２％、８．０％、０．８％、１５．４％、６．４％，可供生产上推广应用。从总体考虑，选出的５个抗性无性系中，最佳是５０１，其次是平２０一４。     

木麻黄青枯菌的根表吸附及根内增殖与其致病性关系

对 3个不同致病的青枯菌菌株和 7个不同抗病性的木麻黄无性系苗的研究得出 ,各菌株对寄主根表吸附量具有显著差异 ,吸附量与致病性呈负相关 :各菌株在寄主根内的增殖量差别明显 ,增殖量与致病性呈正相关。病菌脂多糖 (LPS)对幼苗根的预处理 ,可使其供体菌的吸附量减少5 8.5 %　 97.3% ,但胞外多糖 (EPS)对供体菌的吸附量无明显影响。洗去EPS和LPS的菌体较完整菌体对根表的吸附量减少 6 3.3%　 74 .2 %。而仅洗去EPS的菌体对根表的吸附有所增加 ,最高达19.1%。各菌体SDS PAGE电泳图谱显示出一定差异 ,其中强毒菌株 6 0 1B具有Rf=0 .35的特异谱带。结果表明青枯菌对木麻黄的致病性与其在寄主根表的吸附情况和在根内的快速增殖具有密切关系。LPS在此病理系统中 ,起着细菌识别因子的作用 ,EPS对LPS进行掩盖 ,二者都是病菌致病性的重要因子     

海南木麻黄优良无性系筛选试验研究

针对海南木麻黄人工林出现无性系品种单一,生产力退化,防护效能衰退等问题,通过选用63个木麻黄优良无性系为试验材料,并进行7年的试验观测,筛选出适应海南不同地区的优良品种。33号、28号、17号、14号、4号、21号和34号等7个无性系具有较强的抗风与抗涝性,经强台风的袭击后仍保持95%的保存率;而1号、53号、54号、41号和10号等5个无性系具有较强的耐高温和耐旱性,在西部典型的干旱地区,保存率为85%以上;21号、34号和17号等3个无性系较为适合海南东部地区种植的优良无性系,7年生综合评价指标平均每亩蓄积量达16.3 m3～17.4m3;西部干旱地区优良无性系为41号、38号;北部砖红壤地区的优良无性系为9号、3号、36号、38号。     

白僵菌优良菌株的自然筛选

球孢白僵菌[Beauveria bassiana(Ball)]制剂是防治马尾松毛虫的主要药物之一,菌粉年产量达数万kg以上。为了选育毒力强、人工培养菌丝生长快、产孢量高、优良品质稳定的菌株,从建阳、连城、莆田等地收集白僵菌虫体进行组织分离、单孢纯化、比较室内毒力以及在人工培养基上的性状,得到三个优良的白僵菌菌株,进行生产性试验,效果显著。     

华南地区山地木麻黄种源试验与筛选

依据首次建立在华南地区的各含 2 8个种源的两片山地木麻黄种源试验数据 ,分析了 1～ 4a生树高、胸径、单株材积和保存率等 4个性状的方差分量、遗传变异系数和遗传力等遗传参数。结果表明树高、胸径、单株材积和保存率在地点间、种源间及种源×地点互作间均有显著或极显著差异。当不考虑种源×地点互作效应互作时 ,3～ 4a生性状种源广义遗传力 ,树高变幅为 11 0 0 %～ 13 80 % ,胸径为 3 32 %～ 5 5 5 % ,单株材积为 5 4 0 %～ 8 30 %。以用材林为培育目的 ,依据 4a生树高、胸径、单株材积和保存率计算的综合评定值大小 ,分别对两个试验的参试种源进行了排序和选优 ,以 2 5 %的入选率 ,每试验各有 7个种源入选。E96 8试验的优良种源为 1884 4、194 89、192 4 0、17877、194 91、194 90和 192 39;E96 6中优良种源为 192 38、1884 7、1885 3、17877、1895 0、1885 2和 1894 9。筛选后树高、胸径和单株材积可获得明显的遗传增益。参试种源树高、胸径、单株材积和保存率性状间均表现出极显著正相关。树高早期表型相关和遗传相关极其显著 ,可用于树高的早期预测。最后 ,预测了山地木麻黄优良种源在中国潜在适生范围     

木麻黄毒蛾高致病力绿僵菌和白僵菌菌株的筛选

木麻黄毒蛾是我国东南沿海防护林主要树种木麻黄的主要害虫之一。通过8株绿僵菌和2株白僵菌菌株对该木毒蛾进行室内生物测定,综合考虑产孢量、校正死亡率、LT50等多项指标,筛选出M aYDTR03和BbSMYXTR03为优良菌株,此2菌株对木毒蛾的校正死亡率均超过了95%,僵虫率分别为72.5%和80%,LT50分别为6.68,6.57d,均好于其它菌株。同时,分析了绿僵菌产孢量与LT50间的相关性,结果表明,两者之间存在显著的线性回归关系。