一株多杀性巴氏杆菌的分离鉴定与耐药性研究

从扬州大学动物医院收集送检病鸡的病料,无菌采集病死鸡的肝脏、肺脏等组织接种于麦康凯平板和血琼脂平板上进行细菌分离与培养,并对分离菌进行生化试验、16 S r RNA基因序列分析和荚膜分型PCR鉴定,同时用12种抗菌药物对分离菌株进行药敏试验。细菌分离结果显示,分离菌在麦康凯平板上未见菌落生长,在血琼脂平板上呈光滑、湿润的露滴样小菌落;革兰氏染色镜检结果为革兰氏阴性小杆菌,瑞氏染色镜检可见大量两极浓染的短杆菌;生化试验结果表明分离菌株能够发酵葡萄糖、果糖、蔗糖等糖类,不能发酵乳糖和麦芽糖;同时,16 S r RNA基因序列和荚膜分型PCR测定结果显示分离菌为荚膜A型多杀性巴氏杆菌。药敏试验结果表明,分离菌株对痢特灵、左氟沙星、强力霉素的敏感性较高,而对氯霉素、美洛西林、卡那霉素等高度耐药。     

云南鸡源副禽嗜血杆菌的分离鉴定与耐药性分析

无菌棉签深入病死鸡鼻窦腔深部无菌采集病料进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、生理生化试验、革兰氏染色、血凝活性测定、16S rDNA序列测定和药敏试验。结果在富含V因子血琼脂平板上分离到一株灰白色、圆形、边缘整齐的光滑型小菌落,菌落在血琼脂平板、麦康凯等培养基上无明显菌落生长;镜检观察为革兰氏阴性菌,具有血凝活性,符合副禽嗜血杆菌生化培养特性;细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为副禽嗜血杆菌。分离菌株对妥布霉素、阿奇霉素、庆大霉素、阿米卡星具有敏感性。     

6株鸡白痢沙门菌的分离鉴定与药敏试验

无菌采集疑似沙门菌病病死禽的肝脏、心脏等脏器划线接种于麦康凯琼脂培养基上,分离得到无色、透明的菌落。对分离菌进行纯化、染色镜检、生化试验、血清学试验和16S rDNA序列分析,证明所分离的细菌中有6株为鸡白痢沙门菌。6株鸡白痢沙门菌的16S rDNA序列分析结果显示分离株的同源性达到99%以上。利用纸片法进行药敏试验,结果表明多数菌株耐药集中在萘啶酸、链霉素和罗美沙星等抗菌药物,而对氯霉素、痢特灵、头孢曲松钠和丁胺卡那霉素等药物的敏感度较高。     

15株禽源沙门菌的分离鉴定与耐药性试验

本试验旨在对沙门菌临床分离株进行鉴定及其耐药性进行研究。通过收集2012年2月-7月间具有典型沙门菌病病变特征的病例,无菌采集病死禽的肝脏、心、卵巢等脏器接种血清营养琼脂培养基,以麦康凯琼脂培养基纯化分离菌,并检测其生化特点,16S rDNA基因测序法快速鉴定分离菌株,然后进一步鉴定血清型;同时用15种抗菌药物进行药敏试验。结果显示,有15株细菌在麦康凯琼脂培养基上为无色、透明的菌落,能利用葡萄糖、甘露醇,不发酵乳糖、蔗糖,符合沙门菌的生化特性。同时,15株沙门菌的16S rDNA序列分析结果显示,分离株的同源性达到97%以上。15株沙门菌的血清学试验结果显示,有7株鼠伤寒沙门菌、5株伤寒沙门菌、2株肠炎沙门菌、1株鸡白痢沙门菌。药敏试验结果显示,分离细菌对链霉素、萘啶酸、强力霉素和美洛西林耐药率高。     

鸡源大肠杆菌M1株的分离鉴定及遗传进化分析

从鸡腹泻病例中分离到一株M1菌,为探明其生物学特性,利用传统细菌鉴定与16S rDNA、atpD基因序列分析进行鉴定与遗传进化分析。将M1菌纯化培养后进行菌落形态观察、生理生化试验;设计16S rDNA和atpD基因引物,反转录收集PCR产物并测序,利用DNAStar和MEGA6进行同源性比对分析,并构建系统进化树。结果得出:M1菌在镜下为革兰氏阴性短杆菌或球菌;生理生化试验显示其可发酵多种糖类,产酸产气,运动性试验呈阳性;吲哚(I)、甲基红(M)和触酶试验呈阳性;VP(V)试验、枸橼酸盐(C)利用试验、产硫化氢(H_2S)试验和尿素酶试验呈阴性。16S rDNA与atpD基因同源性分析表明M1菌与大肠杆菌的同源率在99%以上。综合细菌鉴定、生理生化结果、16S rDNA和atpD基因序列分析,判定M1菌株为大肠杆菌种。     

榆林部分地区湖羊乳房炎病原菌的分离鉴定及耐药性和毒力基因检测

【目的】明确规模化湖羊场乳房炎的主要病原菌种类及其耐药性和毒力基因分布情况,指导临床治疗湖羊乳房炎合理用药。【方法】在6个规模化羊场采集临床型乳房炎乳样43份,采用细菌形态学鉴定、生化鉴定及16S rDNA序列分析的方法确定引起湖羊乳房炎的主要病原菌,采用纸片扩散法检测其耐药性,并通过PCR方法检测相关毒力基因。【结果】革兰染色镜检显示获得了革兰阳性球菌和革兰阴性杆菌。革兰阳性球菌在Baird-Parker琼脂平板上呈现出边缘圆润,中间呈黑色的菌落;生化试验鉴定结果显示,分离株对甘露醇、过氧化氢和兔血浆凝固试验为阳性;经16S rDNA测序比对,与金黄色葡萄球菌高度相似的分离株共31株。革兰阴性杆菌在伊红-美蓝琼脂平板上呈现出黑紫色泛有金属光泽的菌落,在麦康凯琼脂平板上呈现出粉红色的菌落;生化试验鉴定显示,分离株对吲哚试验和甲基红试验为阳性,对VP试验和枸橼酸盐利用试验呈阴性;经16S rDNA测序比对,与大肠杆菌高度相似的分离株共12株。药敏试验结果显示,分离的金黄色葡萄球菌对环丙沙星、左氧氟沙星和头孢噻肟具有较高的敏感性,对青霉素、红霉素和链霉素耐药;分离的大肠杆菌对环丙沙星和左氧...     

一例鸡大肠杆菌病的病原分离鉴定与治疗

为确诊田东县某鸡场20日龄雏鸡发病死亡的原因,无菌采集病死鸡脾脏、肝脏组织进行细菌分离培养鉴定,并进行药敏试验和致病性试验.结果:分离菌为革兰氏阴性杆菌,在麦康凯培养基、伊红美蓝培养基上均出现与大肠杆菌一致的生长特征,生化试验鉴定均符合大肠杆菌的生化特性,致病性试验表现为较高的致病性,药敏试验显示该菌对安普霉素、丁胺卡...     

大肠杆菌分离鉴定及其耐药性试验

为了确定采集自内蒙古地区某牧场的病料内的病原菌,对其进行细菌的分离培养。将分离培养出的2株病原菌进行16S rDNA扩增、细菌生化鉴定、致病性试验以及细菌耐药性试验。结果表明,分离菌在伊红美蓝琼脂培养基上可生长出暗红色或黑色并且带有金属光泽的菌落;镜检可见,分离菌为革兰阴性杆菌;分离菌生化鉴定结果与大肠杆菌标准菌株ATCC 25922测定的结果相一致;分离菌的16S rDNA与大肠杆菌标准菌株16S rDNA PCR扩增结果相一致;分离到的2株大肠杆菌均具有致病性,对多种抗生素均有耐药性。结果提示,该次分离得到的病原菌主要为具有多重耐药性的致病性大肠杆菌。     

一株鸭源维氏气单胞菌的分离鉴定与致病性的初步研究

江苏某养殖场种鸭突然发生散发性死亡,为了探究其死亡原因,本研究通过临床解剖观察、病原分离、生化试验、药敏试验、雏鸭人工感染试验和致病性试验对分离菌株进行检测。结果显示该分离菌为革兰阴性短杆菌,在麦康凯培养基和LB培养基中呈现圆形灰白色菌落,在血琼脂培养基中呈现出β溶血;16S rRNA基因序列分析结果显示该菌为维氏气单胞菌(A.veronii);药敏结果显示该菌对头孢氨苄、氨苄西林等10种抗生素敏感;人工感染试验显示该菌可造成雏鸭的死亡;小鼠的致病性试验显示该菌对小鼠的LD50为5.0×10^6.5cfu。总之,本实验从病鸭中分离到1株A.veronii,并筛选出敏感药物,为A.veronii病的诊断和治疗提供了参考依据。     

25株禽源大肠杆菌的分离和药敏试验

收集了40例具有肝周炎、心包炎及气囊炎的典型病变的病例,无菌操作采集病死鸡和鹅的肝组织接种血平板和麦康凯平板。综合细菌生长和形态学特点及生化试验结果,有25株细菌符合大肠杆菌特点。对25株大肠杆菌进行药敏试验,结果显示：分离菌对痢特灵、菌必治和壮观霉素这3种药物敏感,而对复方新诺明、左氟沙星和多粘菌素B等药物低度敏感或不敏感。由此可见,禽源性大肠杆菌的耐药性强,对该病的治疗增加困难。     

鸡致病性大肠杆菌的分离鉴定

无菌采取病死鸡脑、肝脏、脾脏和肾脏接种于麦康凯琼脂平板,分离出特征性的大肠杆菌菌落,经生化和血清型鉴定,鉴定出该分离菌为肠埃希氏菌1型,血清型为O78,但与O92血清型有很高的交叉。药敏试验结果显示：该分离菌株对头孢拉定、头孢噻吩和头孢氨苄有耐药性,而对头孢曲松中度敏感,对卡那霉素、庆大霉素、氨苄西林、氧氟沙星、诺氟沙星和环丙沙星敏感。致病力试验显示：腿部肌肉注射的雏鸡全部死亡,腹腔注射的雏鸡部分死亡,其他鸡只健康存活。     

25株禽源大肠杆菌的分离和药敏试验

收集了40例具有肝周炎、心包炎及气囊炎的典型病变的病例，无菌采集病死鸡和鹅的肝组织接种血平板和麦康凯平板。综合细菌生长和形态学特点及生化试验结果，有25株细菌符合大肠杆菌特点。对25株大肠杆菌进行药敏试验，结果显示：分离菌对痢特灵、菌必治、壮观霉素这三种药物敏感，而对复方新诺明、左氟沙星、多黏菌素B等药物低度敏感或不敏感。由此可见，禽源性大肠杆菌的耐药性强，对该病的治疗增加了困难。     

一例鸡源金黄色葡萄球菌的分离鉴定与耐药性分析

采集关节肿胀、关节囊内有浆液性渗出物患病鸡肝脏及骨髓进行细菌分离,对分离菌进行形态学观察、革兰氏染色、生理生化试验、PCR鉴定、16S rDNA序列测定和药敏试验。结果从病鸡样品中分离出一株在普通琼脂平板上形成湿润、表面光滑、隆起的圆形菌落,菌落在血琼脂平板上能产生β溶血;分离菌为革兰氏阳性,符合金黄色葡萄球菌生化培养特性;PCR检测结果显示金黄色葡萄球菌的耐热核酸酶基因呈阳性,细菌16S rDNA核酸序列Blast比对结果显示为金黄色葡萄球菌;分离菌对阿莫西林、四环素、青霉素G、氯霉素、复方新诺明和氨苄西林具有耐药性。结果为云南鸡源金黄色葡萄球菌病的临床诊断和防治提供了依据。     

一例雏鸭大肠杆菌与金黄色葡萄球菌混合感染的分离鉴定与耐药性研究

为了明确山东省临沂市某鸭场引起雏鸭死亡的病原菌及其耐药性,试验采集病死雏鸭器官组织进行触片染色,并对病原菌进行分离培养与观察、生化试验、动物试验、16S rDNA基因序列分析,同时以药敏试验来判断分离菌株对34种抗菌药物的耐药性。结果表明:病死雏鸭器官组织触片与革兰氏染色镜检发现2种菌,一种为粉红色杆菌,另一种为蓝紫色短链状球菌,将其分别命名为菌株1与菌株2。菌株1在麦康凯琼脂培养基长出粉红色菌落,在伊红美蓝培养基长出黑色并有金属光泽的菌落;葡萄糖、赖氨酸、鸟氨酸、氨基酸空白对照管、乳糖、卫茅醇、尿素及枸橼酸钠试验为阳性,硫化氢、蛋白胨水及苯丙氨酸试验为阴性;具有一定毒力,能够致小白鼠死亡;经16S rDNA序列鉴定,扩增条带大小与预期结果相符,与大肠杆菌序列的同源性为99%。菌株2在BP琼脂培养基上呈灰黑色或者黑色,并有浅色的边缘;蔗糖、精水、木糖、甘露糖、麦芽糖、蕈糖、乙酰葡胺、蜜二糖、果糖试验为阳性,尿素、乳糖、木糖醇、甘露醇、硝酸盐还原、V-P及山梨酸试验为阴性;具有一定毒力,能够致小白鼠死亡;经16S rDNA序列鉴定,扩增条带大小与预期结果相符,与金黄色葡萄球菌序列的同源性为99%。经鉴定菌株1为大肠杆菌,菌株2为金黄色葡萄球菌。大肠杆菌对头孢西丁、大观霉素、阿米卡星等7种药物敏感,对头孢吡肟、妥布霉素、氧氟沙星3种药物中介,对苯唑西林、青霉素G、哌拉西林等24种药物耐药;金黄色葡萄球菌对头孢唑啉、头孢噻吩、链霉素等6种药物敏感,对头孢呋辛、头孢噻肟、头孢曲松等5种药物中介,对苯唑西林、青霉素G、哌拉西林等23种药物耐药。说明从病死雏鸭中分离出2种细菌,分别是大肠杆菌和金黄色葡萄球菌,这2种菌对多种抗生素具有耐药性且出现多重耐药。     

1株山鸡源致病性大肠杆菌的分离鉴定

为查明秦皇岛市某山鸡养殖场山鸡大批量死亡病因,试验对分离到的致病优势菌株进行生化鉴定和16S rRNA基因序列分析,并测试分离菌对21种抗生素的敏感性,进一步采用PCR方法检测分离菌的耐药基因。利用清洁级昆明小鼠和SPF鸡胚分别对分离菌进行致病性试验,并采用PCR方法检测分离菌的毒力基因。结果显示：分离菌为革兰氏阴性杆菌,在伊红美蓝培养基上生长出有金属光泽的菌落,生化特性与大肠杆菌生化特性符合率高达99%。BLAST分析发现,分离菌16S rRNA序列与大肠杆菌的基因相似性高达99.8%。分离菌对恩诺沙星和阿米卡星高度敏感,对青霉素、头孢曲松等15种药物耐药。分离菌的磺胺类、β-内酰胺类、四环素类的耐药基因与耐药表型基本相符,其余耐药基因与耐药表型不符,提示该分离菌可能存在其他的耐药机制。致病性试验结果显示,分离菌具有较强致病性,共检测到12种大肠杆菌主要毒力基因。研究表明,分离菌为山鸡源致病性大肠杆菌,且耐药情况复杂,具有较强的毒力和致病性。     

滁州活禽市场鸡源沙门菌的分离鉴定与药敏试验

从安徽滁州地区某活禽市场采集鸡的肛拭子样品110份,接种到麦康凯培养基分离纯化,再选取典型菌落进行三糖铁、吲哚、甲基红、VP等生化试验及16SrRNA的PCR鉴定,最后对沙门菌分离株进行药敏试验。110份样品经分离纯化得到29株疑似沙门菌菌株,通过生化试验及16SrRNA的分子鉴定,共分离到23株沙门菌,检出率为20.9%;药敏试验表明,沙门菌分离株对链霉素和阿米卡星的耐药率相对较低,而对庆大霉素、大观霉素、哌拉西林的耐药率均高达82.61%。对克林霉素的耐药率为100%。     

10株动物源肠出血性大肠杆菌的分离与药敏试验

为了探讨病死动物中肠出血性大肠杆菌的感染情况及分离菌的生化特性和药物敏感性,试验无菌采集病料,对其进行细菌分离、生化鉴定和药敏试验。结果表明:从病料中共采集到10株细菌,将其接种至绵羊血平板上出现β溶血,在麦康凯琼脂培养基上生长变为粉色;生化鉴定结果基本符合肠出血性大肠杆菌的生化特点;药敏试验结果显示分离菌对不同药物具有不同的敏感性,其中对阿米卡星的敏感率最高达到95.5%,而对多西环素的敏感率仅为4.5%。说明肠出血性大肠杆菌易感染动物,且呈现不同的药物敏感率。     

鸡大肠杆菌灭活苗的制备及使用效果观察

鸡大肠杆菌病是由大肠埃希氏菌引起的一种严重威胁养鸡业发展的传染性疾病，由于其致病菌易产生耐药性，降低了治疗效果，笔者通过采用本地典型发病鸡分离出的菌株制造出的灭活菌，对预防鸡大肠杆菌病的发生起到了良好的效果，现报道如下：一、菌株的分离与培养选择典型病变的临死病鸡肝脏，以无菌操作接种于麦康凯琼脂平板上，37℃，培养24小时，挑取边缘整齐扁平或呈波状稍凸起，表面光滑，湿润深红或粉红色菌落，作进一步生化试验和致病力试验。1．生化反应及镜检挑取疑为大肠杆菌的菌落1～2个抹片进行G染色。同时接种于乳糖发酵管中，…     

滇西树鼩源沙门氏菌的分离鉴定及生物学特性研究

【目的】确定试验滇西树鼩患病致死的原因,分析分离菌株的致病性与耐药情况。【方法】本研究按常规平板划线法对发病死亡的滇西树鼩心脏血、肝脏、脾脏、肺脏和肾脏进行病原菌分离,进一步对分离菌进行形态学观察、生化试验及16S rRNA基因鉴定,并进行药敏试验和致病性试验。【结果】从发病死亡的滇西树鼩肝脏和肺脏组织分离得到1株细菌。分离菌在麦康凯培养基上呈浅橘黄色单菌落,镜检为革兰氏阴性短杆菌。生化试验结果显示,分离菌能分解葡萄糖,不发酵乳糖,产气,产硫化氢等,符合沙门氏菌生化特性。遗传进化分析显示,分离株与肉用仔鸡源沙门氏菌CP082916菌株亲缘关系最近,16S rRNA基因核苷酸相似性为99%。药敏试验结果显示,分离菌对氯霉素、庆大霉素、新霉素、诺氟沙星等药物敏感;对克林霉素、万古霉素不敏感。致病性试验结果显示,该菌对树鼩及成年小鼠具有较强致病性,对小鼠的半数致死量(LD₅₀)为1.6×10⁶ CFU。病理组织学观察显示,感染组树鼩和小鼠肺脏肺泡间隔增宽、间隔内可见炎性细胞浸润;肝脏细胞排列紊乱,见大量坏死细胞崩解,窦状隙变形或减小,中央静脉淤血,...     

猪场新生仔猪黄痢的病原分离及药敏试验

从重庆市几个规模化猪场的发病仔猪中采集病料，分离培养的病原菌，在麦康凯培养基上菌落呈红色，革兰氏染色为G^-菌，生化试验结果显示对葡萄糖、乳糖、麦芽糖产酸产气，不分解尿素，不产生硫化氢，表明所分离菌为大肠杆菌。用分离菌对头孢唑啉等29种药物进行药敏试验，所分离的大肠杆菌对头孢类药物、氧氟沙星、氨苄西啉等药物高度敏感，而对链霉素、替硝唑产生耐药性。但从不同场分离到的菌株对药物的敏感性不一致。