东方田鼠重复感染日本血吸虫试验研究初步

本试验以1000条日本血吸虫尾蚴同时攻击感染东方田鼠洞庭湖种群和东方田鼠宁夏指名亚种进行重复感染对比试验，并在攻击后不同天数分别同时解剖相数目的两种群东方田鼠，收集其体内不同时段，不同部位的日本血吸虫童虫，比较结果证实东方田鼠对日本血吸虫具有天然的抗性，其抗性是可遗传的，不以东方田鼠的地域分布不同、生活环境的差异或传代数目的变化而有所不同，与获得必免疫无关。     

东方田鼠抗日本血吸虫抗体水平检测与分析

东方田鼠具有抗日本血吸虫病的特性，观察东方田鼠感染日本血吸虫尾蚴后的特异性抗体水平变化，可为阐明其抗病机制提供依据。本试验用间接ELISA方法检测东方田鼠抗成虫可溶性抗原（SWAP）和几种日本血吸虫基因重组抗原（Sj28-GST、LHD-SjTP1、C-SjParamyosion）的特异性抗体水平动态变化，并检测东方田鼠感染日本血吸虫尾蚴前、后的IgG3亚类特异性抗体水平。结果东方田鼠在攻击日本血吸虫尾蚴后，抗SWAP的特异性抗体水平有所升高，而抗几体基因重组抗原的特异性抗体水平低，没有显著变化。东方田鼠正常血清中抗SWAP和IgG3亚类抗体的OD值是牛血清白蛋白（BSA）对照的31倍。结果表明，在东方田鼠血清中有较高水平的SWAP的IgG3亚类抗体，值得进一步深入探讨。     

东方田鼠IgG和IgG3对日本血吸虫抗原反应特性的研究

本文对东方田鼠(Microtus fortis)总IgG和IgG3对日本血吸虫抗原的反应特性进行了研究.纯化东方田鼠IgG,用间接ELISA法检测不同浓度东方田鼠总IgG和IgG3对日本血吸虫童虫可溶性抗原(soluble schistosomula antigen,SSA)、成虫可溶性抗原(soluble adult worm antigen,SWA)、虫卵可溶性抗原(soluble egg antigen,SEA)、童虫不可溶性抗原(insoluble schistosomula antigen,ISSA)、雄虫不可溶性抗原(insoluble male worm antigen,ISMA)、雌虫不可溶性抗原(insoluble female worm antigen,ISFA),以及基因工程抗原rSj14、rSj23-HLD、rSJ28GST、rSjPP的反应情况.结果显示,HRP标记免抗东方田鼠IgG抗体和羊抗小鼠IgG3抗体作为二抗,A值变化规律一致.该结果显示东方田鼠总IgG和IgG3与日本血吸虫抗原可能存在非特异性反应.     

东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫后组织与血清蛋白组分差异比较研究

探讨东方田鼠和小鼠感染日本血吸虫前后不同时点组织与血清中蛋白质电泳谱的变化。分别提取东方田鼠感染日本血吸虫(0、7、12、25 d) 和小鼠感染日本血吸虫(0、7、12、45 d)后的肝脏、脾脏、肺脏蛋白及血清进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,对结果比较分析并进行组织病理形态学观察。结果显示,小鼠感染日本血吸虫第7和12天后肝脏150 ku附近蛋白质条带较东方田鼠表达量明显增高;东方田鼠在感染日本血吸虫后40~50 ku附近蛋白质条带较正常东方田鼠表达明显上调;感染第7天后肺脏40 ku附近蛋白质条带较其他时间点变化明显;小鼠感染日本血吸虫第7、12和45天后血清中IgG类蛋白质表达量较东方田鼠显著增高。东方田鼠和小鼠在日本血吸虫感染后不同时点间的组织及血清蛋白组分存在差异,东方田鼠肝脏和血清中150 ku附近蛋白条带较其他动物特异,蛋白质表达丰度高,该蛋白可能与东方田鼠抗日本血吸虫相关。     

东方田鼠组织与血清中抗日本血吸虫相关蛋白的分离与筛选

本试验以兔、牛、人及感染日本血吸虫后小鼠血清蛋白为对照,分别提取东方田鼠和小鼠的心脏、肝脏、脾脏、肺脏、肾脏、肌肉、皮肤、骨髓和脑组织蛋白,进行聚丙烯酰胺凝胶电泳,综合比较和筛选东方田鼠组织及血清中潜在的抗日本血吸虫相关蛋白组分。结果表明,随着感染日龄的增加,小鼠在感染日本血吸虫后12和45 d,其血清中85 ku附近蛋白质条带较东方田鼠表达量明显上调,且有继续升高的趋势;东方田鼠肝脏及血清中150 ku组分蛋白电泳条带与其他动物相同组织中相应蛋白质在表达量存在显著差异,蛋白质表达丰度高,该蛋白质组分可能与东方田鼠抗日本血吸虫作用相关。     

东方田鼠抗日本血吸虫病现象的观察

本试验分别应用１０００条、２００条和４０条日本血吸虫尾蚴人工攻击感染东方田鼠,金黄地鼠和Ｂａｌｂ／ｃ小鼠,在攻击后第１、２、３、４、７、９、１２、１５、１６、１８、１９、２１、２２、２４、４２天时分别将其剖杀,集虫、观察。结果观察到血吸虫在东方田鼠体内不能发育成熟,在攻击后１９天时虫体已全部死亡。而黄金地鼠和Ｂａｌｂ／ｃ小鼠的虫体回收率分别为６５％和６０．６％。在虫体移行时,东方田鼠肺组织和肝组织     

东方田鼠肝脏裂解物筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库

东方田鼠对血吸虫具有天然抗性。为寻找东方田鼠抗血吸虫抗性相关靶基因，探索其分子机理，我们将日本血吸虫童虫与东方田鼠不同组织／器官裂解物共培养，比较它们对血吸虫童虫的杀伤效果，之后，以杀伤效果较好的肝脏裂解物为探针，以亲和淘洗方法筛选日本血吸虫成虫（44d）噬菌体展示cDNA文库。经三轮筛选后，随机挑取92个噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析，获得了19个有效EST序列，其中15条EST序列与已知基因或表达序列标签同源，4个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性，为新的表达序列标签。对19个有效EST编码蛋白的功能预测结果显示，其中6个为卵壳蛋白（Eggshell protein）相关基因，10个EST及其编码蛋白的功能与血吸虫基因表达调控及蛋白质加工修饰相关。研究结果提示，东方田鼠直接或间接地影响血吸虫基因表达，进而影响血吸虫的发育，可能是东方田鼠具有抗血吸虫特性的一个重要分子机理。     

东方田鼠肺脏裂解物筛选日本血吸虫成虫噬菌体展示cDNA文库

目的寻找与东方田鼠抗性相关的血吸虫靶基因。方法以东方田鼠肺脏裂解物为探针,亲和淘洗筛选日本血吸虫成虫（44d）噬菌体展示cDNA文库。三轮筛选后．随机挑取76个阳性噬菌体克隆进行序列测定及生物信息学分析。结果共获得了13个有效EST序列,其中8条EST序列与已知基因或表达序列标签同源,5个EST序列与已知基因或表达序列标签均无同源性,为新的表达序列标签。功能预测结果显示．这13个有效EST编码蛋白主要与血吸虫基因表达调控及蛋白质加工修饰相关。结论东方田鼠直接或间接地影响血吸虫基因表达,进而影响血吸虫的发育,可能是东方田鼠具有抗血吸虫特性的一个重要分子机理。     

三种试验检测东方田鼠抗日本血吸虫抗体的分析

应用薄膜尾蚴抗原片的免疫酶染色试验(IEST)、可溶性尾蚴抗原的ELISA(SCA-ELISA)和可溶性成虫抗原的ELISA(SAA-ELISA)对人工繁育东方田鼠的抗日本血吸虫抗体进行检测.结果显示阳性检出率高低依次为SCA-ELISA(71.6%,48/67)、IEST(71.4%,50/70)和SAA-ELISA(68.7%,46/67).三种试验的阳性率无显著性差异(x2=0.180,P＞0.05).IEST与SCA-ELISA、IEST与SAA-ELISA及SCA-ELISA与SAA-ELISA的总符合率分别为91.2%(62/68)、86.6%(58/67)和89.2%(58/65).卡方配对检验结果表明,三种试验中任何两种方法的检查结果相比一致.     

东方田鼠净化的研究初报

东方田鼠隶属仓鼠科(Cricetidae)、田鼠亚科(Microti-nae)、田鼠属(Microtus)。早在上世纪50年代人们就注意到东方田鼠对日本血吸虫具有天然抗感染性〔1〕,近年来随着许多学者对实验室饲养和繁殖的东方田鼠从其遗传学、免疫学等多方位有了较为系统的观察研究〔2~5〕,以期推动东方田鼠抗病基因的重大突破。但要充分利用东方田鼠这一种质资源,则必须对东方田鼠进行实验动物化〔6~8〕,通过将其净化,为抗日本血吸虫机制研究提供安全、理想的动物模型。而东方田鼠的净化工作尚无先例,因此净化方案的确立要综合多方面的因素考虑,既科学又有可操…     

日本血吸虫还原性辅酶I(SjNADH)基因的克隆表达及其免疫保护效果分析

为了评估日本血吸虫还原性辅酶I(SjNADH)在小鼠体内诱导的免疫保护效果,应用PCR获得SjNADH基因片段,其开放阅读框为474 bp,编码157个氨基酸,并在大肠杆菌中成功表达,纯化得到该重组蛋白。Western blot结果显示,SjNADH在日本血吸虫童虫和成虫中的表达量稳定,SjNADH融合蛋白也能被免疫血清识别,具有较好的免疫原性。应用重组蛋白免疫小鼠能诱导产生较高的特异性抗体水平,并诱导了20.13%的减虫率和23.06%的肝脏减卵率。结果表明,获得的SjNADH重组蛋白在小鼠体内诱导产生了部分免疫保护,有作为血吸虫疫苗候选抗原分子的潜力。     

编码日本血吸虫CIAPIN1 cDNA的克隆及其重组蛋白的原核表达

本研究利用生物信息学并结合分子生物学实验对日本血吸虫细胞因子诱导凋亡因子CIAPIN1（cytokine induced apoptosis inhibitor 1）基因进行了初步研究。研究表明日本血吸虫存在CIAPIN1同源基因,将其命名为SjCIAPIN1,SjCIAPIN1基因已知cDNA长1143 bp,包括完整的CDS,编码276个氨基酸,预测分子量为30.55863 kDa。通过原核表达系统对该蛋白进行了重组表达和纯化,并制备了多克隆抗体制备。Western blot分析表明,本研究制备的多克隆抗体能与SjCIAPIN1重组蛋白特异识别。     

日本血吸虫WD40信号蛋白的原核表达

本研究克隆了编码日本血吸虫WD40信号蛋白的cDNA,并分析了WD40在日本血吸虫不同发育时期的转录情况.同时还利用原核表达系统对该蛋白的部分序列进行了表达,并进行了重组蛋白的纯化和多克隆抗体的制备,Western blot分析表明本研究中获得多克隆抗体可与重组表达的蛋白和血吸虫全虫蛋白裂解物具有特异性反应.本试验结果为进一步研究WD40信号分子的功能奠定了初步基础.     

日本血吸虫童虫冷冻保藏复苏后生活史循环的研究

本文报告了日本血吸虫童虫经液氮冻藏复苏后的生活史循环的情况。童虫冻藏３６天和５０天后腹腔注射感染小鼠，亲代成虫回收率为９．０和８．９％。感染鼠肝内的子代虫卵孵出的子１代毛蚴感染钉螺，感染率为５９和６７％；平均每个钉螺第１次逸出的子１代尾蚴数为８００～９００条。子１代尾蚴感染小鼠后，其子１代成虫回收率为５５和５６％。合抱雌、雄成虫的体长、性腺的发育和虫体对宿主的致病力与正常途径感染者无明显差异。     

日本血吸虫SJCHGC01894分子T细胞表位肽的预测及免疫原性鉴定

利用服务器SYFPEITHI、HLAPRED、MHCPred预测日本血吸虫SJCHGC01894分子的T细胞表位,采用ClusPro服务器将序列表位和MHCⅡ分子进行空间模拟结合分析,并用四分臂偶联到多聚赖氨酸骨架上的方法合成多肽,然后用CCK8法鉴定表位肽刺激小鼠淋巴细胞的增殖效果,通过流式细胞术测定免疫小鼠CD4＋T细胞内细胞因子的分泌情况。检测结果表明,人工合成的表位肽P1（NH-MSSLSKAEIEDIREV-COOH）可促进免疫鼠脾淋巴细胞增殖,P1刺激后免疫鼠CD4＋T细胞中分泌的IFNγ/IL-4数值上升。本研究初步鉴定了SJCHGC01894分子中的一个潜在的Th1细胞表位,为合理筛选抗血吸虫保护性抗原或表位提供了依据。