马驽巴贝斯虫新疆伊犁株Bc48基因克隆、表达及其多克隆抗体的制备

为表达马驽巴贝斯虫新疆伊犁株Bc48基因,制备多克隆抗体,试验根据GenBank中马驽巴贝斯虫Bc48基因序列,设计合成1对特异性引物,以提取的新疆株Bc48基因组DNA为模板进行PCR扩增,将扩增产物克隆至原核表达载体pET-28a（+）中,阳性质粒转化至大肠杆菌BL21（DE3）感受态细胞中,经IPTG诱导后表达产物进行SDS-PAGE分析,切胶纯化蛋白后免疫6周龄雌性BALB/c小鼠,制备多克隆抗体;同时把该基因克隆至真核表达载体pCMV-N-flag中,将阳性质粒转化至大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取pCMV-N-flag-Bc48质粒转染到293T细胞中进行真核表达。结果显示,获得了大小约为15 ku的融合蛋白,与预期目的蛋白大小相一致;免疫BALB/c小鼠制备的多克隆抗体经ELISA和Western blotting检测、验证,能特异地识别相应抗原,其抗体效价可达1：128 000,说明该多克隆抗体有较高的抗体效价和特异性;真核表达质粒在293T细胞中表达Bc48蛋白。本试验可为进一步研究马驽巴贝斯虫功能基因及建立快速的检测方法奠定基础,在虫株的分类学研究及候选疫苗的研制中有重要意义。     

马驽巴贝斯虫病的诊断和治疗

１９９９年春季以来,我院接连收治１０余例以高热、贫血、黄疸等为主要特征的马匹疫病,实验室诊断确诊为马驽巴贝斯虫病,后经治疗全部治愈,现将情况介绍如下。１　发病情况吉林省左家地区属半山区,春季林地草场存在大量森林革蜱,但本院从有记录的１９９３年以来,尚未收治过患梨形虫病的马匹。１９９９年春季以来陆续有马匹发病,主要表现食欲减退,体温升高,经过抗生素或清热泻火类中药治疗无效,遂来我院就诊。２　临诊症状发病初期病马精神沉郁,饮食欲减退,但二便均正常,体温升高达３９－５～４１－８℃,心率每分钟达７０～…     

马驽巴贝斯虫ddPCR检测方法的建立

马驽巴贝斯虫(Babesia caballi)病是马属动物的一种血液原虫病,被农业农村部列为二类动物疫病.本研究旨在建立一种针对马驽巴贝斯虫病的ddPCR检测技术.利用马驽巴贝斯虫特异性引物及探针对反应体系进行优化,测试了方法的特异性、稳定性及灵敏性,对30份可疑样品进行了初步检测.结果显示,该方法具有较好的稳定性,最...     

内蒙古和新疆两地草原革蜱源性马驽巴贝斯虫病病原DNA检测

为探究来源于内蒙古西部某地的草原革蜱及新疆境内广泛分布的草原革蜱携带同一种病原-驽巴贝斯虫的情况。本试验借助光学、电子显微镜进行鉴定了采自于不同植被(包括内蒙古、新疆两地)的草原革蜱;并参考驽巴贝斯虫Bc48基因序列,合成引物,提取该种蜱携带的马驽巴贝斯虫病原DNA,进行PCR扩增、检测。结果显示,来自内蒙古(N=147)、新疆(N=200)两地的草原革蜱在假头基部、多孔区、齿式、气门板等超微结构形态方面基本相似。经PCR成功扩增出了草原革蜱所携带的驽巴贝斯虫病原DNA阳性条带452 bp;来源于内蒙古西部某地的草原革蜱携带驽巴贝斯虫的阳性率为8.16%(12/147),来源于新疆和静县平原的草原革蜱驽巴贝斯虫的阳性率为13.50%(27/200)。这些参数可为草原牧区优势分布蜱虫-草原革蜱所传播家畜血液原虫病的防治提供科学依据。     

一例马混合感染驽巴贝斯虫与马巴贝斯虫病及并发症的诊治

从外地新购的马，混合感染驽巴贝斯虫、马巴贝斯虫，由于早体代谢产物的刺激与渐进性贫血，而引发一系列并发症：心衰、肺水肿、出血性素质致肠驰缓。经实验室检查确诊后，用黄色素、贝尼尔驱杀致病体并采用补液、止血、通便、强心等一系列对症治疗措施及中兽医辩证治疗后，该病例救治成功。     

甘肃省马驽巴贝斯虫病流行情况与防治对策

马驽巴贝斯虫病于上世纪90年代以采在甘肃省陇东南地区流行，开始时由于病原不清楚，未能采取有效防治措施。1996年开始，我站组成科技攻关小组，经过深入细致的流行病学调查和病原学研究，查明了病原、流行特点、媒介的生物学特性；通过大量的药物试验，筛选出有效的防治药物，并研制出咪唑苯脲缓释剂；制定了综合防治措施在流行区推广应用，取得了显著的防治效果。2000年该项目获省科技进步二等奖。2004年以来，该病在流行区的部分县又有局域性流行，因此重视该病的防治势在必行。本文就该病的流行特点和防治对策进行了综述。     

马驽巴贝斯虫PCR和qPCR检测方法的建立

马驽巴贝斯虫是一种寄生于马属动物的血液原虫,给马产业造成巨大的经济损失。本研究旨在建立两种高效、可靠的PCR诊断技术,为进一步提高口岸检疫工作效率奠定基础。根据马驽巴贝斯虫Bc48基因序列,设计了一对特异性引物和荧光探针,建立了PCR和qPCR检测方法,测试了两种方法的特异性、灵敏性、稳定性。结果显示：建立的两种方法均具有良好的特异性;PCR方法的最低检出限为4.04×10² copies/μL,qPCR方法的最低检出限为4.04×10¹ copies/μL;对33份马血样品进行检测,结果qPCR检出的阳性样品数为23份(69.7%),而PCR检出的阳性样品数为9份(27.3%)。表明两种方法均可成功用于马驽巴贝斯虫的检验,但是荧光定量PCR方法的灵敏度明显优于PCR方法。     

陇西县马属动物驽巴贝斯虫病的诊断及防治

近五年来,陇西县马属动物中流行一种以高热、贫血、黄疸等为特征的传染病,通过流行病学调查、临床症状和病原体检查,确诊为驽巴贝斯虫病。经用血虫克星或贝尼尔特异性治疗,获得满意结果。     

国产咪唑苯脲对驽巴贝西虫病治疗试验

应用国产抗巴贝西虫新药咪唑苯脲(Imidocarb)二盐酸盐。对3匹马分别按每kg体重2、4、8mg剂量进行了安全性试验。结果,2、4mg剂量的马,间隔24h肌肉注射2次,临床、血液、肝功、肾功均未见明显变化;8mg剂量的马,仅注射1次就出现呼吸困难、流涎、腹痛和排稀粪等反应,30min后消失。对14例自然发病的驽巴贝西虫病马,按2mg/kg的体重剂量进行了试治,其中8例间隔24h共用药2次,6例仅用药1次,结果均获痊愈,且无任何副作用。     

草原革蜱各发育阶段对驽巴贝斯虫传播能力的研究

将实验室培育好的“清洁”草原革蜱成，释放到驽巴贝斯虫单一种人工感染的驴体上，使其自行叮咬吸血，俊雌虫饱血脱落后，置２８℃、相对湿度约９０％的温箱中产卵孵化，而后用次代３个不同发育阶段的蜱，分别叮咬除脾或非除脾健康易感驴。试验结果表明，草原革蜱在成虫阶段被驽巴贝斯虫感染，并经卵传递。次代幼虫、若虫和成虫都具有传播该种病的能力。另外，还发现在草原革蜱卵内发育的驽巴贝斯虫，对易感宿主动也具有感染性。     

驽巴贝虫BC-48基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达

采用PCR方法扩增驽巴贝虫吉林分离株BC-48基因片段，将扩增产砌与pGEM—TEasy载体连接，重组质粒经PCR、单酶切鉴定后测序；构建BC-48的重组pGEX-4T-2表达载体．经IPTG诱导表达后，进行SDS-PAGE、Western—blotting分析。结果显示，克隆的BC-48基因片段长610bp，含有一个570bp的开放阅读框，编码189个氨基酸，与GenBank中USDA株（U46551）的同源性为96．7％；表达的融合蛋白为45ku，能被驽巴贝虫阳性血清识别；表明该融合蛋白具有较好的反应原性。     

青海省海西地区马焦虫病的血清学诊断

用ELISA方法调查了青海省海西地区马焦虫病的流行情况。从海西地区的格尔木市和乌兰县的牧户中收集了199份马属动物的血清样品，用马巴贝斯原虫的重组抗原P蚰48（GST-BcSAGlt）蛋白作为ELISA诊断抗原。进行了马巴贝斯原虫的诊断检查。从199份血清样品检出61份马巴贝斯原虫阳性，阳性率为30，65％。结果显示马焦虫病已在该地区广泛传播，并已严重威胁该地区的马属动物。     

水牛牛巴贝斯虫低温保存和复苏后的致病力研究

将含水牛牛巴贝斯虫的压积红细胞与等量的１６％二甲基亚砚阿氏液混合后分装于冷冻管内，于液氮中保存。保存２６ｄ，７８ｄ，１４２ｄ和１４９ｄ后，在３８℃温水中复苏，经皮下，静脉和静脉皮下同时感染摘腺小牛获得成功。水牛感染后，外周血液出现虫体时间短的为５ｄ，其余的为８ｄ和９ｋ。血液涂片中发现典型的牛巴贝斯虫，最高染虫率为１５％。由低温保存的含虫血与新鲜虫血和蜱感染一样使水牛发病，出现高温稽留，贫血，黄疸和     

克隆表达的犬吉氏巴贝斯虫重组GST-P130kDa 用于血清学诊断

利用抗体法（picoBlueTMImmunscreening Kit,应用B.gibsoni感染血清）从犬吉氏巴贝斯虫（B.gibsoni）裂殖子mRNA制备的吉氏巴贝斯虫cDNA文库中进行免疫筛选,选出目的基因相cDNA片段（阳性克隆）.测序验证后将该cDNA（基因）克隆至原核表达载体pGEX-4T-3,构建重组质粒,在大肠杆菌E.coli（DH5a）中以GST融合蛋白的形式表达（SDS-PAGE分析证明）;表达产物为130kDa的可溶性融合蛋白.免疫学分析（Western blot和ELISA）结果表明,犬吉氏巴贝斯虫重组GST-P130kDa融合蛋白（rBg GST-P130kDa）能与犬吉氏巴贝斯虫（B.gibsoni）感染血清起反应,且与犬巴贝斯虫（B.canis）无交叉反应.本试验利用犬吉氏巴贝斯虫重组BgGST-P130kDa融合蛋白（作为重组抗原）检测巴西（n=310）、日本（n=100）和中国（n=114,n=30）等国随机采集的自然感染狗血清,其结果为巴西狗血清阳性率为55%、日本为8%、中国为1～9%;其结果与间接荧光抗体法（IFAT）结果为一致（作为验证）.结果表明重组BgGST-P130kDa融合蛋白具有较强的免疫原性和特异性,可用于吉氏巴贝斯虫病的诊断,这为吉氏巴贝斯虫病的早期诊断和深入研究犬吉氏巴贝斯虫病的特异性重组抗原及重组疫苗奠定基础.     

南德文种牛发生巴贝斯虫病

本文报道南德文种牛发生双芽巴贝斯虫和牛巴贝斯虫病的诊断和治疗。对病牛主要采用血虫净按４ｍｇ／ｋｇ体重剂量,用无菌蒸馏水配成５％溶液肌注,每天１次,连用３天,大部分病牛停止便血尿,开始采食。     

禽白血病病毒ELISA检测方法的建立与初步应用

本研究以在毕赤酵母系统中表达并纯化的p27重组蛋白为包被抗原,HRP标记的兔抗鸡IgY为酶标二抗,建立了一种快速有效的禽蛋白血病病毒ELISA检测方法,并对其反应条件进行优化。结果显示,该方法具有良好的特异性和重复性;与市售商品试剂盒相比,符合率为96.92%,且更为敏感。应用建立的ELISA方法检测来自吉林省内鸡场314份疑似样品,阳性检出率为75.15%。本研究为禽白血病病毒的检测与诊断提供了一种简便、有效的检测方法。     

相同EAA模式下不同日粮蛋白水平对草鱼肌肉、肝胰脏蛋白周转代谢的影响

在日粮必需氨基酸模式相同条件下 ,研究不同日粮蛋白水平对草鱼肌肉、肝胰脏蛋白质周转代谢的影响。其中周转代谢参数包括 :蛋白质的合成速率 (FSR)、降解速率 (FDR)、生长速率 (FGR)、合成能力 (CS)、合成的翻译效率 (KRNA)和蛋白质沉积效率 (PRE)。试验结果表明 :1.日粮蛋白水平的增加促进了草鱼的生长 ,促进了肌肉、肝胰脏蛋白质的增长。饲料转化效率和肌肉蛋白质沉积效率在适宜蛋白水平时最高。2.肌肉FSR、FDR与日粮蛋白水平呈正相关关系 ;肝胰脏蛋白FSR不受日粮蛋白水平的影响 ,蛋白质FDR与日粮蛋白水平呈负相关关系。3.肌肉蛋白FGR的增加归因于蛋白质合成的增长较降解的增长更占优势 ,以及蛋白质合成的KRNA 的提高 ;肝胰脏蛋白FGR的增加归因于蛋白质降解的减少。4.肌肉、肝胰脏蛋白CS不受日粮蛋白水平的影响。5.肌肉PRE(生长占合成的比例 )在适宜蛋白质水平 (30 % )时最高 ,而且在该水平下饲料系数最低 ,即饲料转化率最高