马传贫强、弱毒鉴别诊断法在马传贫检疫中的应用

1990年6月下旬,黑龙江省某国营种畜场从外地购入93匹种马后突然发生了马传贫。疫情发生后,我们应用中国农科院哈尔滨兽医研究所研制的马传贫强、弱毒鉴别诊断法进行检疫,收到了良好的效果,及时扑灭了疫情。现将情况报道如下。     

马传贫强、弱毒鉴别诊断法检出马的生物学接种试验

为证实哈尔滨兽医研究所建立的马传贫强、弱毒鉴别诊断技术亡斑点(DB)试验阴性、琼脂扩散(ID)试验阳性判为病马]的准确性,我们用该技术检出的马进行了生物学试验,现报告如下。     

马传贫强、弱毒在马体内运作时的行为表现

马传染性贫血病毒(EIAV)属于逆转路病毒科满病毒亚科成员之一,它可在马体内建立持续感染,其特点是反复出现病毒血症为特征的一系列表现,由于病毒独特,临床症状复杂,     

马传贫血清学强、弱毒鉴别马及其生物学试验马病理学及免疫形态学观察

接种马传贫疫苗地区琼扩阳性、班点试验阴性4匹马.属慢性活动型传贫马;其生物学试验的8匹马,一匹呈现急性型传贫的病理变化,一匹为亚急性型传贫病理变化,5匹为慢性活动型传贫病理变化,一匹为慢性静止型传贫病理变化.斑点试验阳性、琼扩试验阴性的2匹马.无传贫病理变化.为Ⅱ型免疫马;其生物学试验的2匹马亦未见明显的病理改变.     

某猪场猪瘟强毒、弱毒抗体水平的检测

应用猪瘟单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验方法，对河南某猪场47份母猪血清进行猪瘟抗体检测，有5份血清呈猪瘟强毒抗体阳性，阳性率为10.6%，猪瘟弱毒抗体阳性率为95.7%，其群体保护率为93％。在9份仔猪血清中，猪瘟强毒抗体为阴性，猪瘟弱毒抗体阳性率为22％，只有17％的群体保护率。检测结果表明：该猪场可能有猪瘟强毒感染。     

马传贫白细胞弱毒疫苗接种马攻击强毒后脾脏超微结构的观察

选接种马传贫弱毒疫苗并经强毒攻击后有三种形态学类型马各二匹,对其脾脏进行了超微结构观察。其中Ⅱ、Ⅲ型马脾内以免疫活性细胞活化、增殖为主,且与单核-巨噬细胞构成“免疫岛”;而Ⅰ型马脾内免疫活性细胞和巨噬细胞以变性、坏死性病变为主.从而进一步证实是T、B 和单核-巨噬细胞三种细胞协同免疫的结果。     

应用单克隆抗体鉴别新城疫病毒强、弱毒株的研究

新城疫(ND)是危害家禽的主要传染病,因其分布广泛,传播迅速,对养禽业构成严重威胁,尽管自本世纪40年代未我国已开展疫苗预防免疫工作,并基本上控制了疫病的流行,但迄今免疫鸡群中仍有本病的暴发,成了养禽业的一大难题。一方面在病鸡的确诊上需要作生物学试验来区分强毒,费时费力;另     

马传贫云南强毒及其攻击弱毒苗接种马的形态学观察

本试验观察了4匹马传贫云南强毒接种马和13匹用云南强毒攻击的弱毒苗接种马的形态学改变。4匹强毒马均出现急性型马传贫病理变化,但免疫器官中免疫活性细胞的坏死程度远不及我国辽毒急性型传贫马那样严重。甚至较美同Wyoming株毒也差。13匹接种弱毒苗的攻毒马形态学有三种类型变化。第一类型具有铁逆转,组织球,淋巴样细胞反应和网内系增生等较典型的马传贫病理变化,免疫活性细胞少,且变性,坏死。第二种类型无马传贫规律性病变,免疫活性细胞活化,增殖。但肝铁反应增强,脾铁反应明显增生。第三种类型无马传贫病理性损伤,免疫系统明显活化,增殖。依此衡量,10~(-3)lml攻毒试验马中出现Ⅰ型变化的占4/7,显然弱毒苗保护效果不够理想。10~(-4)2ml攻毒马Ⅰ、Ⅱ型变化的占5/6,表明我国研制的弱毒苗对云南毒有预防作用,可用于云南马传贫防制工作。但其中Ⅱ型变化的占3/5,Ⅲ型变化在各弱毒接种马中仅占1/3,比辽毒和Wyoming株毒攻击的弱毒接种马出现Ⅲ型反应的比数均低,结果很不一致。显然云南分离到的马传贫强毒接种马的病理变化及再攻毒马形态学改变与辽寝和Wyoming株毒有差异。本试验对这种差异进行了讨论,认为云南马传贫毒可能是又一个毒株。     

马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒和驴强毒基因核苷酸序列测定

本项研究马传贫驴白细胞弱毒疫苗病毒感染后总ＤＮＡ和驴强毒感染驴中血病毒ＲＮＡ为起始材料,应用ＰＣＲ和ＲＴ－ＰＣＲ的方法,分段扩增马传贫弱毒疫苗病毒和驴毒各基因,并将各基因克隆后进行测序列,根据与国外马传贫病毒核苷酸序列比较,推导出马传贫疫苗毒和马传贫驴强毒全基因组核苷酸序列。     

马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒和驴强毒全基因核苷酸序列测定

本项研究以马传贫驴白细胞弱毒疫苗毒感染细胞总ＤＮＡ和驴强毒感染驴外周血病毒ＲＮＡ为起始材料,应用ＰＣＲ和ＲＴＰＣＲ的方法,分段扩增出马传贫弱毒疫苗毒前病毒和驴强毒各基因,并将各基因克隆后进行测序。根据与国外发表的马传贫病毒核苷酸序列比较,推导出马传贫疫苗毒和马传贫驴强毒全基因组核苷酸序列。     

马传贫病毒弱毒疫苗免疫马匹后中和抗体变化规律研究

为研究马传贫病毒(EIAV)弱毒疫苗免疫马匹后中和抗体的动态变化规律,本研究通过将表达EIAV囊膜蛋白重组质粒(pcDNA-env),与表达EIAV主要结构基因gag-pol的包装质粒(pUK-gag-pol)、表达荧光素酶的转移载体(pONY8.1)共转染293T细胞,制备了EIAV假病毒粒子(EIAV-Env)。在此基础上,利用该假病毒对2匹EIAV疫苗免疫马在免疫后6个月内不同时间点的中和抗体进行检测。即将EIAV疫苗免疫马血清通过连续4倍稀释,与EIAV-Env共孵育1 h后接种ELR1-293T细胞,36 h后通过检测细胞内荧光酶活性计算不同血清样品的中和抗体滴度。结果显示,EIAV疫苗免疫马血清可以特异性地中和EIAV-Env。EIAV疫苗免疫马后,随着时间的增加其体内中和抗体滴度逐渐升高,在6个月时能够达到最高值,这提示中和抗体可能与EIAV疫苗体液免疫成熟相关。本研究为进一步深入EIAV及其疫苗诱导体液免疫保护机制的研究提供了相关的实验依据。     

猪瘟强毒与弱毒鉴别检测方法的研究进展

<正>猪瘟(Classical swine fever,CSF)以前又名烂肠瘟,是由黄病毒科黄病毒属的猪瘟病毒(Classical swine fever virus,CSFV)引起猪的一种高度接触性、致死性的传染病,临床上主要以稽留高热、皮肤和黏膜出现大量出血点为主要特征[1]。猪瘟具有高度传染性,主要通过呼吸道和消化道传播,传播速度快、发病率和死亡率高,给养猪业造成了巨大的经济损失;世界动物卫生组织将其列为A类传染病,     

鉴别新城疫强、弱毒一步RT-PCR方法的建立及应用

设计2对引物分别用于新城疫强、弱毒的检测。使用强毒引物F1、R1可从NDV强毒株中特异性扩增出349bp的目的片段,使用弱毒引物F2、R2可从NDV弱毒株中特异性扩增出255bp目的片段,该方法对H9亚型禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)和传染性法氏囊病毒(IBDV)的检测结果均为阴性。灵敏性试验结果显示,该方法对NDV强、弱毒株的最小检出量分别为1pg和10pg。利用该方法对7份临床样品进行检测,结果与测序结果一致,说明该方法可用于新城疫强、弱毒的快速鉴别诊断。     

马传贫白细胞弱毒疫苗接种马攻击强毒后病理学和免疫形态学变化的探讨

本试验对46例马传贫白细胞弱毒接种后3～55个月的马用中国马传贫强毒辽系和美国马传贫强毒Wyoming株攻击,攻击3个月后迫杀,经剖检、组织学和组织化学观察和比较,基本可归纳为三种类型的形态学改变:Ⅰ型有典型的马传贫规律性病变,免疫活性细胞减少,其变性、坏死程度较强毒攻击对照马略轻;Ⅱ型无马传贫规律性病变,免疫活性细胞活化、增殖,但肝内有铁反应;Ⅲ型无马传贫病理性损伤,免疫系统明显活化、增殖。疫苗接种马经两强毒株攻击后出现各型变化的马匹比例数有一定差异,但80％以上疫苗接种后强毒攻击的马均呈Ⅱ、Ⅲ型形态学改变,即这些马均处于免疫状态,从而对攻毒马建立了病理形态学和免疫形态学相结合的检测手段。此外,本研究也提出了马传贫白细胞苗的免疫持续期可长达3年以上的形态学根据。