应用随机扩增多态性进行山羊致病性大肠杆菌的分子多态性分析

为了解山羊致病性大肠杆菌广西分离株的分子多态性,应用随机扩增多态性方法(RAPD)对山羊致病性大肠杆菌进行分型研究.从8条随机引物中筛选出4条能在10株大肠杆菌中具有较好多态性扩增的随机引物,4条随机引物共扩增出18条DNA片段,10个菌株无共有带谱,显示出良好的扩增多态性.菌株Nx31与Nx32曾被认为是同一菌株的两次分离,但是在RAPD分析中,两株细菌的带谱存在明显的差别,表明RAPD比传统的血清学分型具有更高的分辨性.     

RAPD技术及其在链球菌分型中的应用

微生物的分型技术包括传统的分型方法和分子生物学分型方法两种。随机扩增多态性DNA（RAPD）是一种建立在PCR基础上的新的DNA多态性检测技术，已广泛地应用于微生物基因分型。其主要特点是利用随机寡核苷酸引物扩增基因组DNA片段，继而通过凝胶电泳分析其指纹图谱特征，揭示不同菌株间的细微差别。这种方法简单、快速，现已在链球菌的分型中得到应用。     

嗜水气单胞菌分离株ERIC-PCR及RAPD分型比较

采用ERIC-PCR和RAPD 2种方法对嗜水气单胞菌2009年分离菌株及实验室保存菌株共83株进行分子分型。参考相关文献设计并合成引物,分别进行PCR扩增及琼脂糖凝胶电泳,电泳结果经Quantity One软件数值化后利用SPSS软件进行聚类分析。结果显示,除少数分离株外,使用2种方法对大多数菌株分型,均能得到多态性较好的指纹图谱。RAPD的AP12H引物能扩增出1～12个200～4 500bp之间的条带,可将嗜水气单胞菌分离株分为4群、12类。ERIC-PCR能扩增出4～16个100～5 800bp之间的条带,将嗜水气单胞菌分离株分为4群、17类,同一年代、同一地域分离株分别有聚成一类的趋势。2种分型方法均体现很好的分型能力。但ERIC-PCR分型与RAPD分型相比,重复性和稳定性更好,分辨力更高,且具备RAPD不要求模板序列已知而直接进行扩增的优点,更适合嗜水气单胞菌的分型研究。     

液相芯片技术在沙门氏菌血清型分型上的初步探索

本文利用液相芯片技术对沙门氏菌进行血清学分型实验,并与沙门氏菌传统血清学分型作比较,通过对4株沙门氏菌菌株进行检测和鉴定,得到了前2株分别为猪伤寒沙门氏菌、第3株为肠炎沙门氏菌的鉴定结果。实验结果验证了液相芯片方法在血清型分型上的快速性和高敏感性,为后续进一步研究奠定了基础。     

奶牛乳房炎病例中金黄色葡萄球菌RAPD-PCR基因分型的研究

用随机扩增多态性DNA 技术（RAPD）对来自2个集约化奶牛场不同奶牛乳房炎病例分出的16株金黄色葡萄球菌进行了基因分型。分别用3个寡核苷酸引物扩增，仅OLP11引物可扩增出质量良好、具有RAPD特征的条带图谱。对反应体系的退火温度、模板浓度进行了筛选，模板原倍浓度、33℃的退火温度能使所有检测菌株产生清晰、可分辨、具有较好重复性的带谱。分型结果表明，16株菌可分为2个类群，其中14株位于同一类群，大多数菌株的相关系数差距仅为0.04，这一结果提示这些菌株可能具有相同的来源和相似的遗传背景。     

副猪嗜血杆菌分型方法的研究进展

副猪嗜血杆菌（Haemophilus parasuis，HPs）引发一种以多发性浆膜炎、关节炎及高死亡率为特征，严重危害仔猪和青年猪的传染病。由于该病在近几年发生频繁．受到人们的广泛重视，细菌分离鉴定、血清分型等基础工作基本完成，而毒性因子、保护性抗原及其分子生物学研究并不深入。自然界中的副猪嗜血杆菌具有很大的异质性，群体形态学、荚膜材料、全细胞和外膜蛋白等方面的特性有很大的变化。传统的血清学方法将副猪嗜血杆菌分为15个标准血清型，而20％左右的临床分离菌株不能用血清学方法分型。随着现代生物技术的发展，蛋白质多态性分析技术、限制性酶切片断长度多态性分析技术和PCR技术等应用于副猪嗜血杆菌的分型鉴定，形成多种分型方法，为副猪嗜血杆菌的鉴定和副猪嗜血杆菌病的诊断提供了新技术。     

6株副猪嗜血杆菌基因组DNA的PCR指纹图谱研究

根据肠道菌基因闻重复一致序列，设计了一对特异性引物，采用ERIC-PCR和RAPD技术，研究了副猪嗜血杆菌6个分离菌株的指纹图谱和DNA多态性。结果表明，6个分离株的PCR指纹图谱与15个标准血清型指纹图谱相比较可分辨出4种血清型；6个分离株的RAPD研究结果均表现出多态性。有意义的是，6个菌株的多态性DNA片段也能明显将其分为4种类型的副猪嗜血杆菌，与特异性引物PCR结果相一致。该研究可作为流行病学调查和该菌的分子分型快速诊断方法的基础。     

鸭源沙门菌江苏分离株的生物学特性研究

为了解鸭源沙门菌江苏分离株的主要生物学特性,本研究对2012年至2013年从发病或死亡鸭中分离的33株沙门菌分离株进行鉴定,即采用玻片凝集法对分离的沙门菌进行血清学分型,多重PCR方法检测17种毒力基因的分布,按照美国临床和实验室标准化研究所制定的方法进行药物敏感性检测,通过结晶紫半定量法检测分离菌株的生物被膜形成能力.33株鸭源沙门菌的血清学分型结果显示,查理沙门菌占48.5％,为优势血清型.毒力基因检测结果显示,pagC、msgA、sipB、prgH、spaN、tolC、iroN、sopB及pefA为保守基因.药物敏感性检测显示,42.4％的菌株耐受8种以上药物.生物被膜检测显示,有14株细菌生物被膜形成能力为中等以上,其中57.1％的菌株耐8种以上的药物.     

空肠弯曲杆菌基因分型方法的研究进展

空肠弯曲杆菌(campylobacter jejuni)是最重要的人类肠道致病菌之一。随着近年来分子生物学及相关技术的迅猛发展,空肠弯曲杆菌基因分型的方法因其分辨力、特异性、分型率、敏感性显著高于传统检测方法而越来越受到人们的重视。作者就空肠弯曲杆菌基因分型方法(RFLP 分型、AFLP 分型、RAPD 分型、PFGE分型、MLST分型)的研究进展作一简要综述。     

鸡杆菌中国分离株RAPD分型方法的建立与应用

对9株鸡杆菌进行了血清分型,并应用8条随机引物对该9株鸡杆菌和3个参考菌株(1株巴氏杆菌、1株大肠杆菌和1株链球菌)共12株细菌做随机扩增多态性DNA(RAPD)分型研究。结果显示,9株鸡杆菌分别属于血清Ⅰ型(1/9)、血清Ⅱ型(3/9)和血清Ⅳ型(5/9)。所用8条随机引物中有3条呈现良好的多态性和稳定性,可产生差异显著的指纹图谱。采用SPSS13.0软件分析了不同菌株间的遗传距离,并依此绘制出菌株间的亲缘关系树状图。12株细菌共分为4个聚类群,其中9株鸡杆菌位于同一聚类群中,且又可分为4个聚类亚群。3个参考菌株各自形成一个独立的聚类群。不同血清型的鸡杆菌菌株具有相似的指纹图,同一血清型的菌株指纹图存在差异。结果表明,RAPD基因分型是目前鸡杆菌分子流行病学调查及病原分离鉴定比较理想的方法之一。     

沙门氏菌的基因分型和指纹图谱分析及其在分子流行病学中的应用

沙门氏菌的基因分型和指纹图谱分析及其在分子流行病学中的应用文其乙综述焦新安，张如宽审校（江苏农学院畜禽传染病实验室）沙门氏菌菌株的鉴定通常借助于生化反应和血清学试验，以确定所调查菌株的生化血清型。随着分子生物学的发展，现代生物技术手段已应用于沙门氏菌...     

蛋鸡场沙门氏菌快速检测方法应用比较

探索蛋鸡场沙门氏菌快速检测方法.经试纸条、分离培养初步确定沙门氏菌阳性菌株后,进行血清学分型和荧光PCR鉴定.在601份鸡棉拭子、粪便、饮水和饲料样品中分离出37株沙门氏菌,其中沙门氏菌D群2株、其他群35株.试纸条、分离培养和荧光PCR方法相比较,快速分离培养结合荧光PCR方法敏感、快速、准确,适合实验室检测;试纸条法快速、简便,适合蛋鸡场的快速初筛和日常监测;传统方法培养时间长,有待改进.     

利用随机扩增多态性DNA指纹技术对猪链球菌进行基因分型

通过优化反应条件和筛选随机引物，应用100条随机引物对分离的20株猪链球菌做随机扩增多态性DNA（RAPD）分型研究。结果表明，有27条引物呈现良好的多态性和稳定性，可产生稳定，复杂的指纹图谱。采用SPSS10.0软件分析了不同菌株之间的遗传距离，绘制出了菌株间的亲缘关系树状图，结果，20株猪链球菌被分为4个聚类群。     

鸡传染性支气管炎的病毒分型

正传统的IBV分型方法是血清学分型,即通过不同毒株间的交叉中和保护试验来确定抗原性差异,但该方法操作繁琐、难以获得全部血清型的标准阳性血清,因此限制了其在生产中的应用。近年来,随着分子生物学技术的广泛应用,根据病毒S1基因的序列差异进行基因分型逐渐替代了传统的血清学方法。扬州大学张小荣教授对2009-2012年间从国内各地区分离的54株IBV分离株和Gen Bank中发表的     

MALDI-TOF MS对河南地区鸡源沙门菌快速鉴定的研究

采集河南地区规模化种鸡场疑似沙门菌致死鸡胚和肝脏,共分离出41株沙门菌菌株;应用血清学、VITEK 2和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)方法对分离的41株沙门菌进行鉴定比较;3种方法均能鉴定出沙门菌,MALDI-TOF-MS方法能快速鉴定41株沙门菌,而且匹配度分值均大于2.300,表明鉴定结果的可信度很高。血清学鉴定的41株沙门菌血清型与MALDI-TOF-MS鉴定的沙门菌结果不一致,表明血清学分型结果和MALDI-TOF-MS分型结果没有相关性。MALDI-TOF-MS对鸡沙门菌的鉴定,操作快速简便、准确率高,为兽医微生物快速鉴定提供一种方法。     

广西猪源沙门菌血清学分型及生物被膜形成能力的研究

为了研究近年广西地区流行猪源沙门菌的血清型和生物被膜形成能力,对从广西区内不同地区规模猪场分离鉴定的35株沙门菌,用玻片凝集法进行血清学分型;应用结晶紫染色微量板定量法检测菌株的生物被膜形成能力。结果显示:试验菌株分属14种血清型,所有菌株均具有生物被膜形成能力:20株弱成膜能力,4株中等成膜能力,11株强成膜能力。其中,鼠伤寒沙门菌的成膜能力较强。     

MLVA方法对奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分型研究及效果评价

奶牛乳房炎金黄色葡萄球菌的分型对预防菌株在牛体之间传播、了解菌株地域性分布特点及针对性疫苗的研制均有重要的意义。本研究旨在将多位点可变数目串联重复序列分析(MLVA)法应用于国内乳房炎金葡菌的分型研究,以进行分子流行病学调查。同时,将其与16-23SrRNA基因间区分析法(RS-PCR)的分型结果比较,以评价MLVA法对乳房炎金葡菌的分型效果。作者建立MLVA方法(多重PCR体系)对27株乳房炎金葡菌进行分型,同时应用RS-PCR法进行分型。结果2种方法均可将8个地区17个牛场分离到的27株菌全部分型,分型率为100%。MLVA法将菌株分为19个型,不同牛场来源的金葡菌均属于不同型,相同牛场来源的菌株除上海和北京某牛场外均属于相同型;此方法的分型力为0.969。RS-PCR法将菌株分为10个型,其中Ⅰ、Ⅱ和Ⅴ型菌株均来源于不同地区,分型力为0.829。结果显示,MLVA分型法具有快速、操作方便和分型能力强等特点,可应用于乳房炎金葡菌的分子流行病学研究。同时,研究表明,我国不同牛场的乳房炎金葡菌具有型特异性,该结果与少数优势型金黄色葡萄球菌引起绝大多数乳房炎的报道相反。     

西藏部分地区牦牛源肺炎克雷伯菌的分离、鉴定、毒力及耐药基因分析

利用细菌分离纯化、生化鉴定、分子生物学及WHO推荐的K-B纸片法等研究方法,对从西藏不同地区采集的103份牦牛鼻拭子样品进行肺炎克雷伯菌的分离鉴定,对分离鉴定的疑似菌株进一步进行16S rDNA测序及系统发育分析,荚膜血清学分型、毒力基因和耐药表型及耐药基因检测.结果显示,从西藏林芝市、那曲市分离鉴定出8株牦牛源克雷伯...     

基于CRISPR序列的肠道沙门氏菌分离株CSST分型

为验证一种新的CRISPR分型方法——CSST分型方法分型沙门氏菌的可行性,分别采用传统CRISPR与CSST两种分型方法,对20株临床肠道沙门氏菌分离株进行分型.结果显示:CSST分型方法同传统CRISPR分型方法分型沙门氏菌的结果完全一致,均将20株临床肠道沙门氏菌菌株分成了15种亚型,其中CR4/CT4和CR9/...     

上海市鸡源单增李斯特菌株分子流行病学调查

为了解上海市大型超市售卖鸡肉中单增李斯特菌的污染情况,本研究于2018年7月从上海市的多个超市中随机采集冷藏鸡翅样品270份,并对分离菌株的耐药性、血清型及生物被膜形成能力进行测定.通过常规细菌学和分子鉴定方法共确定38株单增李斯特菌,总分离率为14.07％;对分离株采用PCR法进行血清学分型,结果显示分离株以血清型1...