新城疫病毒的基因组与结构蛋白特征

新城疫病毒属于副粘病毒科、Rubulavirus病毒属、Ⅰ型副粘病毒的惟一成员，为单股负链RNA病毒，整个基因组全长15586个核苷酸，编码核衣壳蛋白、磷蛋白、基质蛋白、融合蛋白、血凝素神经氨酸酶和高分子量的RNA聚合酶6种结构蛋白。为进一步做好新城疫的防治工作，对新城疫病毒的分子生物学特性，特别是对其基因组特征和编码蛋白的结构及功能等方面进行了较为详尽的综述，从而为新城疫病毒的深入研究奠定了一定的基础。     

新城疫病毒F48E9株重组NP蛋白单克隆抗体制备及鉴定

制备新城疫病毒(NDV)NP蛋白单抗,以期为NDV抗原表位研究及检测方法建立方面奠定基础。利用NDV F48E9株pET32a-NP重组蛋白免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤细胞技术,间接ELISA筛选,获得了2株稳定分泌抗NP重组蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为1G3、4B12。经间接ELISA测定,腹水抗体效价分别为1 2.56×105、1 5.12×105。亚类鉴定结果表明这两株单抗均为IgG1。Western blot分析结果显示,1G3、4B12均能特异性识别重组NP蛋白。与NDV感染细胞经间接免疫荧光试验检测均呈黄绿色荧光。经相加ELISA测定表明两株单抗识别的抗原表位不同。     

新城疫病毒F蛋白的研究进展

对新城疫病毒F基因结构,F蛋白的存在形式、裂解位点、半胱氨酸残基、潜在糖基化位点、七肽重复序列、强疏水区域,三维结构和抗原位点的研究进展进行了综述,概括了F蛋白的作用,并对其应用前景作了展望。     

犬瘟热病毒F蛋白分子生物学研究进展

犬瘟热病毒融合蛋白是囊膜糖蛋白,是产生中和抗体的主要保护性抗原,结构相对保守。融合蛋白介导病毒囊膜和细胞膜融合,决定病毒在宿主体内扩散的能力,在病毒的致病性及免疫原性上具有重要作用。因此,对犬瘟热融合蛋白基因及其蛋白的结构和功能进行研究具有重要的意义。本文从蛋白结构、蛋白功能、核酸序列比对等多方面对融合蛋白进行了阐述。     

犬瘟热病毒分子生物学特征研究进展

犬瘟热病毒 (ＣａｎｉｎｅＤｉｓｔｅｍｐｅｒＶｉｒｕｓ ,ＣＤＶ) ,是负链单股不分节的ＲＮＡ病毒 ,属于副粘病毒科麻疹病毒属 ,是当前对我国养犬业、毛皮动物养殖业和野生动物保护业危害最大的犬瘟热 (ＣａｎｉｎｅＤｉｓｔｅｍｐｅｒ,ＣＤ)的病原 ,经常引起大批犬、貂、狐等动物发病 ,病死率 3 0 - 80 % ,雪貂高达 1 0 0 % [38] ,经济损失惨重。近年来 ,包括大熊猫、小熊猫以及狮、虎、豹等食肉目所有 8个科、偶蹄目猪科、灵长目的猕猴属和鳍足目海豹科等多种动物 ,均有ＣＤ自然发病的报道 ,甚至人也有ＣＤＶ感染的病例[2 6] ,并且ＣＤＶ…     

新城疫病毒HN蛋白的抑瘤机制及其研究进展

新城疫病毒囊膜上较大的纤突样糖蛋白由新城疫病毒血凝素-神经氨酸酶(HN)基因编码。HN蛋白即血凝素-神经氨酸酶蛋白,它不仅介导病毒吸附于肿瘤细胞,而且与融合蛋白一起帮助病毒侵入肿瘤细胞,其神经氨酸酶活性能水解宿主细胞表面的唾液酸,暴露宿主细胞的生物识别位点。它还能够水解病毒粒子表面糖链末端的唾液酸,防止病毒粒子在宿主表面簇集,并且能够引入新的粘附因子和免疫原性分子,诱导机体免疫系统识别。     

犬瘟热病毒核衣壳蛋白分子生物学研究进展

核衣壳蛋白在犬瘟热病毒中含量丰富,高度保守,能够保护病毒RNA避免降解,对病毒的持续感染产生影响,是重要的抗原物质。本文从N蛋白及其编码基因分子生物学结构、功能、应用等方面进行了阐述。     

鸡新城疫病毒的分子生物学特性及应用研究进展

鸡新城疫是由NDV引起的一种高度接触性传染病,是危害养鸡业发展最为严重的疫病之一.NDV是负链RNA病毒,含有核衣壳蛋白NP、磷酸化蛋白P、基质蛋白M、融合蛋白F、血凝素-神经氨酸酶蛋白-HN和大聚合酶蛋白L这6种结构蛋白.对NDV分子生物学特性的深入研究,为NDV在分子水平上进行特异性诊断奠定了坚实的基础.这些技术不...     

新城疫病毒V4株NP和P基因及其间隔区序列的克隆与分析

采用RT-PCR技术克隆了新城疫病毒(NDV)V4株长约4 200 bp的核苷酸序列,并进行了序列测定与分析。结果表明,该序列中包含有NDV V4株NP基因编码区、NP和P基因间隔区以及P基因的全部核苷酸序列。NDV V4株NP和P基因与其他8个NDV毒株相应部分进行同源性比较,与Quuesland V4株的同源性最高。NDV V4株NP和P基因间隔区序列与其他13株NDV毒株相应部分的比较结果表明,F48E9等强毒株较La sota等弱毒、无毒毒株和试验用V4株在这个区域多了6个碱基,这6个碱基插入的位置在La sota等弱毒、无毒毒株全基因组序列的1647-1648 nt处;参比的14株NDV在这个区域的同源性为63．9％-100％,弱毒株之间的同源性较高,弱毒株与强毒株之间及强毒株之间的同源性差异较大。     

新城疫病毒的一般生物学特性及其致病的分子基础

新城疫病毒(NDV)所致疫病鸡新城疫(ND)又称亚洲鸡瘟,是禽类的一种以呼吸道、消化道黏膜出血为典型症状的高度接触性急性败血性传染病,严重危害养禽业的发展。我国于1935年首次发现有ND的流行,但到1948年才得以最后证实。由于ND给世界养禽业造成的巨大损失,故对其病原NDV的研究一直是禽病研究的重点。现就新城疫病毒的一般生物学特性及其致病的分子学基础综述如下。     

抗新城疫病毒中和性单克隆抗体研制和特性分析

应用杂交瘤技术,以纯化的NDV-lasota为免疫原结合间接ELISA筛选到了24株抗NDV单抗,其中3 株(McAb-14、McAb-18和McAb-21)具有中和活性,并与其血凝抑制效价具有很大的相关性。McAb-18和 McAb-21的免疫球蛋白亚类都属于IgG2a;McAb-14为IgG2b。特异性鉴定结果表明:3株抗NDV的单抗均不与马立克病毒、传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒等发生交叉反应。用这3株中和单抗的任2种混合液对鸡进行了被动免疫治疗和免疫预防试验,结果表明:McAb-14 McAb -18组合的免疫预防和治疗效果最好。     

15株NDV地方株的分离鉴定与生物学特性

从1998~2002年河南省洛阳地区代表性新城疫发病禽群中分离鉴定了15株新城疫病毒(NDV),并对其生物学特性进行了研究。结果表明,15株NDV均呈现良好的血凝活性和特异的血凝抑制特性;对鸡胚的致病作用可被新城疫阳性血清所抑制;对鸡胚最小致死量的平均死亡时间(MDT),1日龄雏鸡脑内接种的致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉内接种的致病指数(IVPI)的测定证实,LD-6-01和LR-2-00株是弱毒株,其余均为强毒株;弱毒株的血凝素热稳定性较好,属慢速血凝解脱型;强毒株的血凝素热稳定性差,属快速或中速血凝解脱型;所有毒株均可较好地凝集鸡和人(O型血)的红细胞,但对其他动物的红细胞凝集性差异较大。对HI抗体为6log2的12日龄雏鸡攻毒试验结果表明,15个分离株中2个弱毒株可得到100%保护;13个强毒株中,LG-1-99,LR-1-98,LD-4-01和LD-3-00得到了70%~90%的保护,而其他9个分离株(LD-1-98,LD-2-99,LD-5-01,LD-7-02,LR-3-02,LW-1-02,LG-2-00,LA-1-99和LE-1-01)基本上得不到保护(0~20%),但所有得不到保护的试验组鸡的发病死亡时间均明显向后推迟。     

新城疫GM2分离株蚀斑克隆纯化及毒力测定

新城疫（newcastle disease,ND）是世界公认的最重要的家禽疫病之一,伴随着NDV活疫苗的广泛使用,野外分离的新城疫病毒往往由多种强弱病毒混合而成。为了避免不同分离株干扰,必须通过蚀斑纯化将混杂在一起的不同NDV毒株区分开来。文章采用蚀斑纯化技术对野外分离毒新城疫GM2进行蚀斑纯化,并对蚀斑纯化前后病毒的生物学特性进行测定,结果显示,该分离毒蚀斑纯化前MDT,ICPI,IVPI分别为50.5,1.78,2.41,蚀斑纯化后MDT,ICPI,IVPI分别为47.5,1.89,2.65。     

鸡新城疫病毒F蛋白部分表位基因的克隆表达及其免疫反应性

为研究NDV-F蛋白抗原表位在动物免疫应答中的作用特点,作者克隆和表达了NDV-F蛋白基因的部分片段,并检测其免疫反应性.首先根据F基因和载体pGEX-4T-1的多克隆位点自行设计了1对引物,以已克隆的NDV(F48E9株)的F基因为模板,通过PCR扩增获得长度为594 bp的片段.接着在电泳和酶切鉴定后将其定向插入pGEX-4T-1,构建重组质粒pGEX-4T-1-F594,并经PCR、双酶切及测序鉴定后,进一步将其转化到大肠杆菌BL21中.最后用IPTG诱导表达,提取物用SDS-PAGE和Western-blotting分析.结果表明,该基因片段表达的融合蛋白大小约为46 000,以包涵体形式存在,并具有良好的免疫反应性.     

抗猪口蹄疫病毒单克隆抗体的研制及其生物学特性鉴定

猪口蹄疫病毒毒株（FMDV－B，FMDB－D，FMDV－G，FMDV－S）经乳鼠和PK15传代细胞适应传代，通过差速离心和蒸糖密度梯度离心纯化抗原，免疫BALB／C小鼠，取脾细胞和SP2／O在PEG4000作用下融合，经间接免疫荧光技术检测，有限稀释法克隆，筛选得到6株能特异分泌抗FMDV的单克隆抗体（McAb)，其中McAb-B43,McAb-B62属IgM,BcAb-D16,McAb-D16,McAb-G17属IgG1,McAb-G52,McAb-S25属IgG2b，在液氮中保存6个月，单抗效价基本保持不变，McAb0G17,McAb-G52有很强的中和特性。     

鸡新城疫病毒地方野毒株的分离鉴定与致病性试验

从某一疑似新城疫病例的蛋鸡群中分离到一株病毒，经HA和HI试验、血清中和试验和动物回归试验。最终确认所分离毒株为新城疫病毒。经对分离株的MDT、ICPI和IVPI等致病指数的测定，表明该毒株为新城疫强毒株。     

斗鸡新城疫病毒DQ株融合蛋白基因序列分析

从越南斗鸡暴发的病例中分离出1株新城疫病毒（NDV）,命名为贵州分离株（DQ）。采用RT—PCR方法扩增分离株（DQ）的整个F基因片段,并将其克隆到pMD-18T载体中。序列分析结果表明,DQ株F基因分子长为1662bp,编码553个氨基酸。该毒株与国内2株分离株（CH2000、TW2000）之间的亲缘关系较近,其核苷酸和氨基酸序列同源性分别为95．7％-96．6％和96．6％-96．8％;但与LaSota、B1及1748E9等常见毒株的核苷酸和氨基酸同源性仅为84．0％-86．5％和87．2％-89．9％。DQ分离株在F蛋白裂解住点的氨基酸顺序为^112R—R—Q—K—R—F^117,与NDV强毒株特征相符,且具有101处的K（赖氨酸）和121处V（缬氨酸）2个特征性氨基酸,与NDV基因Ⅶ型的特性完全相符。利用MegAlign软件绘制NDV的系统发育进化树表明该分离株为基因Ⅶd亚型。     

猪繁殖与呼吸综合征病毒N蛋白基因的克隆及表达

根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)核酸序列设计引物,用RT-PCR扩增出PRRSV甘肃株的核衣壳蛋白(N)基因,将N基因克隆至pGEM-T easy载体上,获得含N基因的阳性重组质粒pGEM-T easy-N.对质粒中的插入片段进行测序,应用DNAStar分析所测序列与GenBank中已登录的PRRSV毒株的同源性,再将其亚克隆至原核表达载体pGEX-4T-1中,得到重组表达载体pGEX-4T-1-N,转化E.coliBL21(DE3)细胞,用SDS-PAGE检测表达产物,并对其进行纯化.结果表明:PRRSV甘肃株N基因核甘酸序列与PRRSV-VR2332株的同源性为93.3%,与欧洲LV株的同源性为66.1%;构建的重组表达载体在大肠杆菌中获得了成功表达,表达产物为40ku的可溶性融合蛋白.     

传染性支气管炎病毒核衣壳蛋白基因变异及在大场杆菌中的表达

核衣壳蛋白(N)是传染性支气管炎病毒的主要结构蛋白之一. 以前的研究结果显示IBV-ZJ971毒株以引起腺胃肿大为特征,IBV-X和N毒株以引起肾炎为特征.为了探讨不同组织嗜性传染性支气管炎病毒N基因的变异,我们依据已发表的IBV- Beaudette 毒株N基因的序列设计和合成引物,RT-PCR扩增IBV-ZJ971、N、X和H52的核衣壳蛋白基因,并测序、分析和在E.coli中进行表达.结果显示:IBV-ZJ971、N、X和H52毒株的N基因的ORF由1230 bp组成,编码409个氨基酸.与来源于GenBank中的IBV毒株比较,IBV-ZJ971、N、X和H52与其它IBV毒株的核苷酸同源性分别是87.0-98.6%、86.6-99.7%、86.3-99.7%、87.2%-98.5%,氨基酸的同源性分别是90.0-97.8%、 90.5-98.8%、 90.0-98.8%、 91-98%.IBV-ZJ971毒株的N蛋白不同于其他IBV的独特变异是111,117, 142, 171 和 401位点上的氨基酸改变,IBV-N和X毒株的N蛋白不同与其它IBV的独特变异是46, 48, 189,190, 220, 223, 236, 237, 240, 286, 299, 301 334, 335, 336 and 351位点上的氨基酸改变.说明IBV嗜腺胃毒株(ZJ971)和嗜肾毒株(N和X)的N基因以散在的点突变为特征.将IBV-ZJ971毒株的N基因在E.coli中表达,并用western-blotting检测,发现IBV-ZJ971的N蛋白是一分子量约为45 kD的蛋白.