卵母细胞激活及孤雌发育研究进展

综述了卵母细胞孤雌激活的机制、研究方法、孤雌胚发育及影响因素的研究进展，指出孤雌发育在人类及动物繁殖技术研究领域的意义。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活及孤雌胚发育研究进展

简述了哺乳动物卵母细胞孤雌激活的方法和影响因素、孤雌激活卵的核型、孤雌激活的机制及孤雌胚体内外发育研究的进展情况，并指出了雌性和雄性基因组在个体发育中的作用以及孤雌生殖的意义。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活及孤雌胚发育研究进展

简述了哺乳动物卵母细胞孤雌激活的方法和影响因素、孤雌激活卵的核型、孤雌激活的机制及孤雌胚体内外发育研究的进展情况,并指出了雌性和雄性基因组在个体发育中的作用以及孤雌生殖的意义。     

小鼠卵母细胞孤雌激活试验

应用两种激活方法(乙醇和离子霉素 6-DMAP)激活和三种培养液(CZB，KSOM，M199)对90只小鼠卵母细胞进行了孤雌激活研究。结果显示，离子霉素结合6-DMAP的激活效果高于乙醇；三种培养液中，以CZB激活效果较为理想。在随后的卵母细胞发育率方面，CZB、KSOM和M199三者之间的差异极为明显，以CZB最高，KSOM次之，M199的发育率最低。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文对哺乳动物卵母细胞孤雌激活机制、激活方法及激活效果的影响因素等作了浅要的综述和总结。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究

研究哺乳动物卵母细胞的激活及孤雌胚发育,对了解哺乳动物早期胚胎发育、深入细致地研究核移植技术和动物克隆技术、建立生产孤雌哺乳动物品系及加速家畜育种进程等均具有重要意义。本文主要从卵母细胞孤雌激活的机制及影响因素、不同动物卵母细胞的激活、提高卵母细胞孤雌激活效果的技术途径以及对孤雌激活的研究意义和发展前景等方面作了详尽论述,为同类研究提供参考。     

猪卵母细胞孤雌激活技术概述

孤雌激活随着近年来体细胞克隆技术的兴起而成为了又一研究热点.而猪由于其生理结构与人的相似性,所以其卵母细胞的孤雌激活更具有特别的研究价值,文章就孤雌激活的概念、机理、方法、影响因素等方面全面论述了猪卵母细胞孤雌激活的研究概况.     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文主要从卵母细胞孤雌激活机制、方法及影响因素,对孤雌激活的研究意义和发展前景等方面作一综述。     

牛卵母细胞的孤雌激活研究

本文探讨了透明质酸酶(HYA)的浓度和作用时间对牛体外成熟卵母细胞脱卵丘的影响,不同强度电脉冲 乙醇 6-DMAP对牛体外成熟卵母细胞的孤雌激活作用以及和乙醇 6-DMAP激活的比较。对电融合脉冲强度、脉冲次数进行了优化。结果表明:卵母细胞成熟培养22h,用0.20%HYA作用10min或0.50%HYA作用5min效果较好。在激活电压1.6kV/cm、20μs/次、间隔1s,脉冲次数为1次的条件下的激活效果较好,在此条件下与乙醇 6-DMAP激活相比较,孤雌激活胚胎的囊胚率分别为19.6%和26.9%,差异不显著。     

哺乳动物卵母细胞孤雌激活的研究进展

本文概述了卵母细胞孤雌激活的研究历程,并从激活机制、激活方法及影响因素等方面对孤雌激活的研究意义和发展前景进行了综述。     

延边黄牛卵母细胞去核方法的研究

用改进的Willaden去核法与McGrath-Solter去核方法对延边黄牛卵母细胞进行去核操作,比较其去核操作效率。结果表明,本实验改进的willaden去核法——挤压去核法,无论在去核操作时间(1．0 min／枚,P<0．05)上,还是在去核效率(94%,P<0．01)上都显著地高于McGrath-Solter去核法(1．4 min／枚、72%)。表明改进的Willaden去核方法是一种适用于延边黄牛卵母细胞操作的快速、简单、实用的去核方法。     

微卫星DNA与延边黄牛肉用生长性状关系

选择与肉牛主要生产性状紧密连锁的 5个微卫星位点 ,以肉牛线性体型评分方法作为衡量肉牛生长发育的指标 ,运用最小二乘法拟合线性模型 ,分析了延边黄牛肉用生产性状与微卫星标记的关系 ,并分析了微卫星 ETH10和IDVGA4 6位点的不同基因型与肉用生产性状的关系。结果表明 ,微卫星 EHT10位点的等位基因 2 0 9对外貌线性评定中的背线性状、肌肉度线性评定中的肩部性状有正面影响 ,等位基因 2 13对外貌线性评定中的系部、肌肉度线性评定中的尻形状和细致度线性评定中的骨骼及皮肤性状有正面影响 ,而等位基因 2 15对外貌线性评定中的背线性状、肌肉度线性评定中的尻形状有负面影响 ;微卫星 IDVGA4 6位点的等位基因 2 4 9对背线、前肢和后肢等外貌线性评定性状 ,肌肉度线性评定的腰宽以及细致度线性评定的骨骼和皮肤性状有正面影响 ,等位基因 2 0 3对外貌评定性状的头部、背线 ,肌肉度评定性状腰宽以及细致度评定性状骨骼和皮肤有负面影响 ,等位基因 2 4 5对腰宽性状也起到负面影响     

肝素、咖啡因、丙酮酸钠、BSA对延边黄牛卵母细胞体外受精效果的影响

试验为延边黄牛体外胚胎产业化生产奠定基础,进行了肝素、咖啡因、丙酮酸钠、BSA对延边黄牛体外受精效果的影响研究。结果表明,以改良BO液为基础液,添加20 μg/mL肝素时,精子顶体反应率和受精率分别为82.52%和75.34%,高于添加20 μg/mL咖啡因组(P<0.05)和添加10 μg /mL肝素与10 μg/mL咖啡因协同作用组(P>0.05);结合使用肝素(20 μg/mL),添加0.0020 g/mL丙酮酸钠时,精子顶体反应率和受精率分别为78.13%和71.57%, 高于添加0.0015 g/mL和0.0025 g/mL丙酮酸钠组(P<0.05);结合使用肝素(20 μg/mL),添加0.006 g/mL BSA时,精子顶体反应率和受精率分别为80.78%和71.44%,高于添加0.001 g/mL和0.003 g/mL BSA组(P<0.05)。因此,添加适当浓度的肝素、丙酮酸钠和BSA可显著提高延边黄牛精子体外获能效果及体外受精率。     

6-DMAP对延边黄牛末期卵母细胞核移植的影响

为探讨6-二甲基氨基嘌呤（6-DMAP）在延边黄牛末期去核的体细胞克隆中的作用,本试验主要研究了单独使用离子霉素处理与离子霉素联合添加6-DMAP处理对体外成熟的老化延边黄牛卵母细胞的激活率的不同影响;以及不同时期添加6-DMAP对重构胚后期发育能力的影响。试验结果显示,体外成熟的老化卵母细胞,使用离子霉素单独处理后91%被激活,而在离子霉素联合添加6-DMAP处理后却没有细胞被激活,也就是没有第二极体的排出。另外,融合后使用6-DMAP处理,所得重构胚的囊胚发育率最低,而激活后的卵母细胞立即用6-DMAP处理,所得重构胚的发育能力与无6-DMAP处理的相近。综上所述,离子霉素联合添加6-DMAP可抑制老化的延边黄牛卵母细胞的激活,阻止第二极体的排出,但对重构胚的后期发育没有影响。而融合使用添加6-DMAP的培养液,抑制了重构胚的后期发育。     

延边黄牛牛肉品质特性的研究

本研究采用单因子试验设计,对我国著名的优良地方品种延边黄牛与利延一代(利木赞♂×延边黄牛♀)杂交牛背最长肌的肉质特性进行了深入的分析。结果表明:延边黄牛和利延一代杂交牛在肉质化学成分中脂肪含量高,延边黄牛的脂肪酸、矿物质和氨基酸含量丰富,具有良好的食用品质特性。分析结果表明:品种因子对肉中的脂肪含量、脂肪酸、必需氨基酸、总氨基酸和矿物质含量等有显著(P<0.05)或极显著(P<0.01)的影响。比较而言,延边黄牛在肉质中表现出风味良好,营养高等优点;利延一代杂交牛表现出脂肪含量高、风味好,矿物质元素丰富,但必需氨基酸含量较低。     

延边黄牛体细胞核移植的研究进展

牛体细胞核移植(somatic cell nuclear transfer,SCNT)是一套极其复杂的技术体系,它包括卵母细胞的成熟、供核细胞的准备、卵母细胞的显微操作、细胞融合、卵母细胞激活和胚胎培养。因此,许多因素影响着核移植胚胎发育。虽然陆续有克隆牛出生的报道,但是克隆效率依然低下。本综述对延边黄牛体细胞核移植体系的6个方面进行简单综述,以期为探究延边黄牛体细胞克隆的最优化条件、建立最优化的培养体系、提高克隆效率提供参考。     

Research Advances on Somatic Cell Nuclear Transfer in Yanbian Yellow Cattle

Bovine somatic cell nuclear transfer (SCNT) is a sophisticated technique system,including oocyte maturation,donor cell preparation and oocytes microscopic operation,fusion,activation and culture.Although the birth of cloning cattle has been reported recently,the efficiency of somatic cell cloning has remained lowly.In order to establish the optimization somatic cell nuclear transfer system of Yanbian Yellow cattle,this review summarized only from 6 main aspects mentioned above in this field.     

ADCY2基因表达对延边黄牛脂肪前体细胞成脂分化的影响

本试验旨在研究环腺苷酸（3',5'-cyclic adenosine monophosphote,cAMP）环化酶合成酶2（adenylyl cyclase 2,ADCY2）基因对延边黄牛脂肪前体细胞成脂分化的影响。选取3日龄的延边黄牛腹股沟皮下脂肪组织进行脂肪前体细胞的分离、培养和诱导分化;设计ADCY2基因的干扰片段（siADCY2-1、2、3）,构建pEX4过表达载体;分别收集正常诱导（对照组）、干扰和过表达0、5和10 d的脂肪细胞。用实时荧光定量PCR检测过氧化物酶体增殖激活物受体（PPARγ）、CCAAT/增强子结合蛋白（C/EBPα）和ADCY2在细胞分化过程中mRNA的转录水平,并用Western blotting法检测其蛋白的表达;用油红O染色检测脂滴含量的变化;用甘油三酯试剂盒检测甘油三酯含量。试验结果表明,在成脂分化过程中,与未分化相比,ADCY2基因在分化的第5和10天表达量均极显著上升（P<0.01）,而分化第10天与第5天相比水平极显著下降（P<0.01）;siADCY2-1干扰效率最高,过表达ADCY2基因使其mRNA水平升高;与对照组相比,过表达组细胞内ADCY2基因mRNA水平提高了约4 000 000倍,脂肪细胞内脂滴含量和甘油三酯的含量极显著提高（P<0.01）,成脂关键基因C/EBPα和PPARγ表达极显著上调（P<0.01）,而RNA干扰组细胞内ADCY2基因mRNA水平极显著降低（P<0.01）,脂肪细胞内脂滴含量和甘油三酯的含量极显著下降,成脂关键基因C/EBPα和PPARγ表达极显著下调（P<0.01）。因此,ADCY2基因过表达能显著增加成熟脂肪细胞的脂滴含量及甘油三酯含量,促进成脂关键基因C/EBPα和PPARγ的表达,说明ADCY2基因对脂肪细胞分化具有正向调控作用。     

延边黄牛DGATs基因克隆、生物信息学及组织表达分析

试验旨在克隆延边黄牛二酯酰甘油酰基转移酶（diacylglycerol acyltransferase,DGATs）两种亚型（DGAT1和DGAT2）的CDS区核苷酸序列,并根据生物信息学对两种亚型的氨基酸序列进行分析,以及探讨其在延边黄牛各组织中的表达规律。采用RT-PCR和实时荧光定量PCR技术分别进行DGATs基因CDS区的扩增、克隆以及其在延边黄牛8个组织中mRNA表达量的检测,利用NCBI中BLAST将其与其他物种进行相似性分析,并构建系统进化树;通过在线工具对其编码蛋白的理化性质、一级结构及高级结构进行预测。结果显示,DGAT1和DGAT2基因CDS区序列长度分别为1 470和1 086 bp,分别编码489和361个氨基酸;二者均为稳定的疏水性蛋白。DGAT1存在25个潜在的磷酸化位点、1个N-糖基化位点和8个跨膜结构域;DGAT2存在28个潜在的磷酸化位点、2个N-糖基化位点和1个跨膜结构域。二者均不存在信号肽,即不属于分泌蛋白。DGAT1主要是通过α-螺旋和无规则卷曲连接,而DGAT2以α-螺旋、无规则卷曲和延伸链连接为主。延边黄牛DGAT1和DGAT2基因分别在延边黄牛小肠和脂肪组织中表达量最高,且显著高于其他组织（P<0.05）。本试验结果对进一步研究延边黄牛DGATs基因以及探究其在脂肪沉积过程中的作用机制具有重要意义。