新农1号狗牙根愈伤组织诱导及再生研究

以新农1号狗牙根(Cynodon dactylon (L.) Pers.‘Xinnong No.1')成熟颖果为外植体,研究不同激素浓度组合对愈伤组织诱导、继代及分化的影响.结果表明:在愈伤组织诱导中,适宜的培养基为添加2.00 mg·L-12,4-D+0.01 mg· L-1 6-BA+500 mg·L-1脯氨酸的MS培养基,出愈率可达71.2％,愈伤形态为半透明水渍状且淡黄色颗粒较多;继代改造培养基中添加2,4-D 0.5 mg·L-1 +6-BA 0.5 mg·L-1+ABA 2.0 mg·L-1+ GSH 2.0 mg·L-1的MS培养基上培养4周后,愈伤组织增殖率可达41.3％;分化过程中,在不添加任何激素的1/2MS培养基中培养10 d后,将胚性愈伤组织转入添加6-BA 1.0 mg·L-1的MS培养基中,很快绿点变密,继而分化成苗,愈伤组织再生频率达25％,小植株形成的强度为16.7％.     

多花黑麦草特高和多年生黑麦草四季高频组培再生体系的优化与建立

对在贵州地区广泛种植的多花黑麦草特高(Lolium multiflorum‘Tetragold’)和多年生黑麦草四季(L.perenne‘Four seasons’)的成熟种子进行了愈伤组织诱导及植株再生的研究,建立了两个品种的胚性愈伤组织高频诱导与再生体系。结果表明,剥去成熟种子的颖壳,切除1/3胚乳端,将特高接种于CC+7mg·L~(-1) 2,4-D+0.5mg·L~(-1) 6-BA、四季接种于CC+5mg·L~(-1) 2,4-D+0.5 mg·L~(-1) 6-BA的培养基中,在明显降低组培污染率的同时,能分别得到65.52%和63.55%的最高愈伤组织诱导率;将两个品种诱导出的愈伤组织转移在MS+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.5mg·L~(-1) 6-BA+1.25mg·L~(-1) CuSO4+1.0g·L~(-1) CH的继代培养基上,能促进质量较好的Ⅱ型胚性愈伤组织的形成;根据后续转化试验所选用的植物表达载体pCAMBIA 1300的抗性特点,30~40mg·L~(-1)的潮霉素是两个品种愈伤组织最佳的筛选剂和临界浓度;特高的胚性愈伤组织接种在MS+2.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.5 mg·L~(-1) NAA+0.1mg·L~(-1) TDZ的培养基上,可以产生86.37%的最高分化率,四季的胚性愈伤组织接种在MS+6.0 mg·L~(-1) 6-BA+0.3mg·L~(-1) NAA+5.0mg·L~(-1) KT的培养基上,能得到85.40%的最高分化率;生根培养基1/2MS+0.5 mg·L~(-1)NAA+0.5mg·L~(-1) IAA能让两个品种分化出的不定芽形成100%的生根率;以腐殖土∶蛭石∶砂壤土=1∶1∶1的混合材料作为营养土,能保证组培再生苗达到99%以上的成活率。优化建立的高频组培再生体系为下一步的遗传转化奠定了基础。     

大针茅成熟胚愈伤组织诱导及分化的探索

为摸索大针茅成熟胚诱导、分化的最佳培养基,以大针茅的成熟胚为外植体,采用不同激素配比的培养基进行筛选.结果表明:在大针茅成熟胚胚性愈伤组织诱导和分化过程中,2,4-D,6-BA等激素的浓度对大针茅成熟胚的组织培养影响较大.大针茅愈伤组织诱导最佳培养基:培养基+2,4-D(2.0mg/L),平均出愈率为91.67%;继代培养基:N6+CH(500mg/L)+2,4-D(2.0mg/L)+6-BA(0.5mg/L),愈伤诱导率为80%;添加0.3mg/L ABA对非胚性愈伤组织转化为胚性愈伤组织有一定帮助,诱导率为23.3%.     

两个高羊茅品种成熟种子再生体系的建立

以2个高羊茅品种(“Plantation”和“沪坪1号”)的成熟种子为外植体,在MS培养基上分别添加不同浓度的2种植物生长调节剂,探索其愈伤组织的诱导、继代和分化的最佳激素配比及其相互间的影响,以建立简便高效的再生体系。结果表明,完整高羊茅种子最佳的愈伤诱导培养基为MS+2,4-D 3 mg/L,诱导率为71%;而把成熟种子进行纵切后得到的半粒种子的较优的愈伤诱导培养基为MS+2,4-D 2.5 mg/L,诱导率占半粒种子外植体的60%,占完整种子(2个半粒种子)外植体的90%以上;在最优诱导培养基上产生的愈伤组织的最佳继代培养基为MS+2,4-D 3 mg/L,其胚性愈伤诱导率为70%,而添加6-BA则抑制2,4-D对胚性愈伤组织的诱导;不同品种的最优的分化培养基不同——“Plantation”的最优分化培养基为MS+2,4-D 1 mg/L+6-BA 1 mg/L,而“沪坪1号”的最佳组合是MS+2,4-D 2 mg/L+6-BA 1 mg/L,分化率分别达到50%和56%。生根培养基采用已报道的组合1/2MS+NAA 0.5 mg/L,生根率达100%。     

扁穗牛鞭草再生体系的建立

以‘雅安'扁穗牛鞭草(Hemarthria compressa)的幼茎和幼叶为外植体,通过胚性愈伤组织建立扁穗牛鞭草的高效再生体系。结果表明:幼叶比幼茎更适合建立再生体系,最佳诱导培养基为MS+2,4-D 1.0 mg·L~(-1),幼叶和幼茎的出愈率分别为100%和86.96%。最佳分化培养基和不定芽增殖培养基均是MS+6-BA 1.0 mg·L~(-1)+NAA 0.2 mg·L~(-1),愈伤分化率分别为100%和72.90%,再生苗增殖系数可达18.6。1/2 MS是最适宜的生根培养基,生根率达100%。     

野生结缕草成熟胚愈伤组织诱导及再生体系的研究

以野生结缕草(Zoysia japonica)的成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织诱导进行植株再生。试验结果表明,不同的预处理方法对愈伤组织的诱导有较大的影响,经研钵研磨去除种子颖壳,30%NaOH浸泡1min,流水冲洗30 min处理的成熟胚在MS+2,4-D(3 mg/L)+6-BA(0.1 mg/L)为最佳,愈伤组织诱导率达82.67%。将愈伤组织在2,4-D(2 mg/L)和6-BA(0.2~0.5 mg/L)的继代培养基中继代1~2次,可明显改善愈伤组织状态,增加胚性愈伤数。筛选继代后的胚性愈伤组织置于分化培养基MS+KT(1 mg/L)+NAA(0.1 mg/L)中,分化率达86%。分化后的簇状植株移栽成活率达100%。     

黄花苜蓿花药培养再生体系的建立与单倍体鉴定

花药组织培养再生体系的构建是单倍体育种的重要途径之一。本研究对呼伦贝尔黄花苜蓿(Medicago falcate‘Hulunbeier’)进行了花药组织培养研究并建立了花药组培再生体系。结果显示,液体悬浮培养基比固体培养基更适合呼伦贝尔黄花苜蓿花药愈伤组织的培养,其愈伤形成的培养条件为B5培养基+0.5 mg·L~(-1) 2,4-D+0.25 mg·L~(-1) 6-BA+0.4mg·L~(-1) NAA+3.0mg·L~(-1) KT;分化培养基为MS+1.0mg·L~(-1) 2,4-D+0.5mg·L~(-1) 6-BA+2%蔗糖+0.7%琼脂;生根培养基为1/2MS+0.1mg·L~(-1) NAA+2%蔗糖+0.7%琼脂;获得的再生植株经流式细胞仪鉴定,其单倍体比例高达27%。     

铁线莲‘Blekitny Aniol’组织培养及再生体系建立

对铁线莲(Clematis florida‘Blekitny Aniol’)的带芽茎段进行诱导产生无菌苗,并对其叶片和茎段进行愈伤组织诱导成苗的分化研究,成功建立了铁线莲组织培养再生体系。结果表明,带芽茎段诱导腋芽最佳培养基为MS+1mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA,腋芽萌发率为100.0%;茎段诱导愈伤最适宜培养基为MS+2 mg·L~(-1)6-BA+0.01mg·L~(-1)NAA,诱导率为78.3%;叶片诱导愈伤组织最适宜的培养基为MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA,诱导率为81.7%;愈伤组织分化的最佳培养基为1/2MS+1 mg·L~(-1)6-BA+0.05 mg·L~(-1)NAA,分化率可达25.0%;最适宜不定芽的增殖培养基为1/2MS+3 mg·L~(-1)6-BA+0.1 mg·L~(-1)NAA,增殖倍数为4.94;筛选出最优的生根培养基组合为1/2MS+0.05 mg·L~(-1)NAA,生根率为70.2%。本研究将为铁线莲的推广应用提供参考,也为其他铁线莲属植物引种和开发利用奠定了基础。     

热研5号柱花草高频、优质愈伤组织的诱导

本研究按应用正交试验,以MS为基础培养基,分析热研5号柱花草(Stylosanthes guianensis cv.Reyan No.5)在诱导高频、优质愈伤组织过程中激素6-BA、2,4-D浓度和外植体类型对诱导效果的影响。结果表明,6-BA是影响柱花草愈伤组织的诱导率以及褐化率的最主要因素,其次是2,4-D和外植体;柱花草愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 2.0 mg·L-1+2,4-D(0.2~0.5 mg·L-1)+3%蔗糖+0.7%琼脂粉,p H 5.8。子叶、真叶、下胚轴、生长点、上胚轴、根均能诱导愈伤组织,根的愈伤诱导率为80%,其余外植体的诱导率均在95%以上,下胚轴上段形成的愈伤组织芽的分化率高于其他外植体。     

杂交狼尾草不同外植体愈伤组织诱导

本研究以杂交狼尾草(Pennisetum americanum×P.purureum)种子和心叶为外植体研究不同质量浓度2,4-D与6-BA组合对愈伤组织诱导及6-BA,NAA对分化的影响。结果表明种子最佳的胚性诱导培养基MS+5.0mg·L-12,4-D+0.4 mg·L-1 6-BA,诱导率为75%,心叶最佳的胚性诱导培养基MS+3.0 mg·L-12,4-D+0.5mg·L-1 6-BA,诱导率为60%;种子愈伤组织诱导高于心叶,为较好外植体。种子分化的最佳培养基为MS+3mg·L-1 6-BA+0.5mg·L-1 NAA,分化率62.5%。该研究建立了稳定有效的再生体系,为杂交狼尾草的遗传转化和定向改良提供了技术支撑。     

长穗偃麦草成熟种胚高频再生体系

以长穗偃麦草(Elytrigia elongata)成熟胚为外植体,在MS基本培养基的基础上,附加不同浓度的2,4-D、6-BA和NAA等植物生长调节剂,开展对其愈伤组织诱导、绿苗分化和生根等的试验研究。结果表明,适宜愈伤组织诱导的培养基为MC (MS+30 g·L~(–1)麦芽糖+1 g·L~(–1) CH+200×5 mL·L~(–1) VB+0.5 g·L~(–1) L-Pro+3 g·L~(–1)植物凝胶)+3 mg·L–12,4-D+0.025 mg·L~(–1) 6-BA,诱导率达77.78%,4周后可见淡黄色愈伤组织;最佳分化培养基为MC (MS+30 g·L~(–1)麦芽糖+1 g·L~(–1) CH+200×5 mL·L~(–1) VB+0.5 g·L~(–1) L-Pro+3 g·L~(–1)植物凝胶)+0.1 mg·L~(–1) 2,4-D+3 mg·L~(–1) 6-BA,分化率达66.67%,4周后出现芽点,同时伴随根毛发生;最佳生根培养基为MR(1/2MS+15 g·L~(–1)麦芽糖+3 g·L~(–1)植物凝胶)+0.5 mg·L~(–1) NAA,移栽后全部成活。从而建立了一套从长穗偃麦草"成熟种胚–诱导愈伤组织–绿苗分化–生根–移栽"的组培再生体系,为进一步研究其抗逆分子机制奠定了重要基础。     

草地早熟禾愈伤组织诱导的多因子正交试验研究

通过多因子的正交试验,筛选出草地早熟禾Poa pratensis Baron品种的最适愈伤组织诱导培养基为MS 2,4-D(1 mg/L) 6-BA(0.1 mg/L) CuSO4(3 mg/L) 酸水解酪蛋白CH(1 g/L),各因子影响程度为2,4-D＞CuSO4＞CH＞6-BA.对于Midnight品种,最适愈伤组织诱导培养基为MS 2,4-D(2 mg/L) 6-BA(0 mg/L) CuSO4(3 mg/L) CH(1 g/L),各因素影响程度为2,4-D＞CH＞CuSO4＞6-BA.通过用所得培养基进一步诱导比较,证明通过正交设计方法获得的结果为最佳诱导配方,用正交设计筛选愈伤组织诱导培养基是一种较好、可靠的方法.同时,在愈伤组织诱导试验中,建议使用胚性愈伤诱导率作为统计指标.     

鸭茅成熟种子愈伤组织诱导影响因素

以鸭茅(Dactylis glomerata)成熟种胚为外植体,探讨了种子预处理、品种选择、培养基及激素配比对其愈伤组织诱导过程的影响,为鸭茅高频再生体系建立奠定了基础。结果表明,3个预处理条件中,次氯酸钠浓度对安巴鸭茅种子愈伤诱导率影响达显著水平(P 0.05)。10个鸭茅品种中,以安巴愈伤诱导能力最佳。不同培养基愈伤诱导率及愈伤形成后的形态发育存在差异,SH、MS、LS培养基均具有较高的愈伤诱导率,其中SH诱导效果最好,愈伤呈现淡黄或黄、干爽松脆。在添加2,4-D的基础上配合30μmol·L~(–1) dicamba可以促进鸭茅种子的愈伤诱导;同时,2,4-D与较低浓度的6-KT组合也有利于愈伤的诱导。综上所述,鸭茅种子先放置于4℃处理24 h,而后用75%酒精处理5 min,1.1%NaClO灭菌处理30 min,最佳诱导培养基为SH+2.0 mg·L~(–1) CPA+0.1 mg·L~(–1) 6-KT+30μmol·L~(–1)dicamba+0.5 mg·L~(–1) 2,4-D,愈伤诱导效率较高且在后期较易形成胚性愈伤,初步建立了一套鸭茅高效稳定的组织培养再生体系。     

蒙农杂种冰草成熟胚愈伤组织的诱导及植株再生

以蒙农杂种冰草成熟胚为外植体,通过胚性愈伤组织的诱导进行植株再生,结果表明:在附加甘露醇(0.2mol/L)和2,4-D(2.0mg/L)的MS培养基中,冰草成熟胚可诱导产生愈伤组织,诱导率为87.6%,但质量较差;将其在降低2,4-D浓度和添加6-BA的继代培养基中继代改造,可明显改善愈伤组织质量,增加胚性愈伤;将筛选改良的愈伤组织置于分化培养基MS+ZT(3.0mg/L)+NAA(1.0mg/L)中,分化率为82%;分化小苗在1/2MS培养基上可生根并得到完整植株.本研究还建立了一套有效的以成熟胚为外植体的蒙农杂种冰草组织培养再生体系.     

不同浓度激素对狗牙根愈伤组织的诱导与分化的影响

以狗牙根成熟种子为外植体,以N6为基本培养基,研究不同浓度2,4 D和6 BA组合对狗牙根愈伤组织诱导与分化的影响。结果表明:(1)1mg/L的2,4 D对愈伤组织诱导有很大的促进作用;(2)种胚愈伤组织的诱导宜采用N6+1mg/L2,4 D+0.7mg/L6 BA的培养基;(3)愈伤组织的分化缓慢,1mg/L2,4 D+0.7mg/L6 BA培养基所产生的愈伤组织分化情况较好。     

南方紫花苜蓿不同外植体离体培养的研究

以南方紫花苜蓿5～7d无菌苗下胚轴、田间栽培株叶片和花药为外植体,对愈伤组织诱导的基本培养基及其分化培养基的外源激素组合和浓度配比进行试验。结果表明,下胚轴、叶片和花药愈伤组织诱导适宜基本培养基分别为BSH、MB和NB;激素的组合浓度配比对愈伤组织诱导及其分化或体细胞胚发生因外植体不同而有较大差异,下胚轴和花药以2,4-D0.05～0.5mg·L-1 NAA0.1～2.0mg·L-1 KT1.0～3.0mg·L-1 6-BA0.5mg·L-1较好,具潜在芽分化能力的绿色愈伤组织诱导率分别为61.1%和78.0%;叶片胚性愈伤组织诱导以2,4-D5.0～8.0mg·L-1 KT3.0mg·L-1为宜,诱导率68.6%。同时,补加水解乳蛋白(LH)对胚状体的形成和发育有一定作用。绿色愈伤组织或胚性愈伤组织转移到MS 6-BA1.0～2.0mg·L-1 KT1.0mg·L-1 NAA0.05～0.1mg·L-1分化培养基上培养,15～30d均能再生出小植株。     

两个高羊茅无性系的营养器官组织培养及再生体系的建立

以2个高羊茅无性系上农矮生高羊茅(SACD)和98-19的幼穗、叶尖、幼茎和幼节等营养器官作为外植体,在MS培养基上分别添加不同浓度的2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D),探索其对愈伤组织的诱导、继代和分化的最佳浓度,以建立高羊茅无性系的高效再生体系。结果表明,幼穗是诱导愈伤组织的最好的营养器官外植体,出愈率最高达94%,而幼叶尖、幼茎、幼节则未能诱导出愈伤组织;不同浓度2,4-D诱导愈伤组织的出愈率存在显著差异,最佳诱导浓度范围为7～9 mg/L,出愈率可以达83%～94%;2个无性系愈伤诱导率间有显著差异,但与2,4-D浓度之间的互作不显著;继代培养基以MS加入2,4-D 4 mg/L的处理方案最好,胚性愈伤组织出愈率和绿色芽点诱导率最高,分别达到98%和78%,所得的胚性愈伤组织在MS+2,4-D 2 mg/L+6-苄氨基嘌呤(6-BA )1 mg/L分化培养基中的绿苗分化率较高,为57%;生根培养基采用1/2 MS+α-萘乙酸(NAA) 0.5 mg/L,生根率达100%。     

羊草种子胚性组织培养高频再生体系的研究

羊草(Leymuschinensis)是禾本科优良牧草，构建羊草“外植体—体细胞胚—分化芽”的高频组培再生体系，为后续遗传转化提供技术支撑并为扩繁育种建立基本体系。本研究以羊草成熟种子为外植体，开展了外植体处理、组培污染率控制、改善愈伤组织生长状态，提高其分化能力等组织培养技术的研究。结果表明，种子去稃后并在100 mg·L^-1赤霉素(GA₃)浸泡24 h,可减少组培内生菌污染和外植体褐化；诱导愈伤组织的最佳培养基为添加2.0 mg·L^-12,4-D和0.5 mg·L^-1 KT的MS培养基，诱导率为83.11%;在添加2.0 mg·L^-12,4-D的MS培养基上继代，胚性愈伤诱导率为53.26%;最佳分化培养基为添加1.0 mg·L^-16-BA和0.5 mg·L^-1 NAA的MS培养基，分化率为84.29%,成苗率达52.86%;不定芽移栽至1/2MS培养基上成活率为100%。利用简单重复序列间扩增(Inter simple sequ...     

不同激素和外植体对柱花草愈伤组织诱导及体细胞胚的影响

以MS为基本培养基,以柱花草无菌苗的幼根、下胚轴、子叶、茎和真叶为材料,采用正交设计方法,研究不同外植体和激素对柱花草愈伤组织诱导和体细胞胚的影响。结果表明:外植体类型及2,4-D、KT、NAA、6-BA浓度对愈伤组织诱导率的影响均达极显著水平(P0.01),其中2,4-D浓度是最主要的影响因素,其次为外植体类型。下胚轴和真叶为柱花草愈伤组织诱导的理想外植体,愈伤诱导培养基的最优配方为MS+1.0mg/L 2,4-D+0.5mg/L KT+0.01mg/L NAA+0.1mg/L 6-BA。NAA、6-BA浓度对柱花草体细胞胚产生率的影响达极显著水平(P0.01),NAA浓度是主要影响因素,体细胞胚产生的最佳培养基配方为MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L 6-BA+2.0g/L CH。     

紫花苜蓿组织培养再生体系的建立

以紫花苜蓿无菌苗的下胚轴、子叶、叶片和叶柄为外植体,研究了不同培养基、不同激素种类和配比对胚性愈伤组织诱导的影响以及不同分化培养基对胚状体分化的影响.结果表明:下胚轴外植体胚性愈伤组织诱导率最高;最佳胚性愈伤组织诱导培养基为改良SH 2.0mg/L 2,4-D 0.5 mg/L 6-BA;最佳胚状体诱导培养基为MSO 2.0 mg/L 6-BA 0.5mg/L NAA;成苗培养基为1/2 MS 1% 蔗糖 0.7%琼脂.