矮牵牛愈伤组织诱导及原生质体的分离与纯化

研究了影响诱导矮牵牛(Petunia hybrid)形成愈伤组织和分离、纯化其原生质体效率的关键因素。结果表明,矮牵牛无菌苗叶片可在含1.0 mg/L 6-苄氨基腺嘌呤(6-BA)和0.1 mg/L萘乙酸(NAA)的MS培养基上形成愈伤组织,用酶液(2%纤维素酶R-10 + 0.5%果胶酶Y-23 + 0.3%离析酶R-10,0.5 mol/L甘露醇)对继代培养10~15 d的愈伤组织在黑暗条件下静置酶解12 h,原生质体产量和活性分别达到3.4×10⁶个/g 和83%。     

冬枣花药愈伤组织的诱导及原生质体分离

[研究目的]研究冬枣花药愈伤组织的诱导,悬浮系的建立和培养及愈伤悬浮系原生质体的分离.[方法]以冬枣花药为试材,通过选择愈伤诱导培养基和原生质体分离所用酶的浓度找到最佳诱导和分离条件.[结论]使用1/2MS基本培养基附加TDZ 0.2 mg/L、NAA 0.5 mg/L和PVP 2.0 g/L,对诱导冬枣花药愈伤组织有较好效果;愈伤组织增殖采用培养基1/2MS+TDZ 0.4mg/L+NAA0.2mg/L;悬浮细胞系培养采用1/2MS+TDZ 0.4 mg/L+NAA0.2 mg/L液体培养基;冬枣花药愈伤组织悬浮系原生质体分离时以0.6M甘露醇+0.1%MES+20～25 g/L纤维素酶.酶解时间为16h时得到的原生质体产量和活力较高.     

罗布麻愈伤组织原生质体分离培养

[目的]探究罗布麻愈伤组织原生质体的分离培养及其影响因素,[方法]以罗布麻无菌苗子叶与下胚轴诱导的愈伤组织为材料,研究MS培养基附加不同激素组合对原生质体分离培养的影响以及愈伤组织继代培养、不同浓度纤维素酶与离析酶组合、DPD和MS等4种培养基对原生质体产量的影响。[结果]激素组合中以6-BA0．5mg／L＋NAA0．5mg／L组合获得最高愈伤组织诱导率,达100％;用固体培养基进行继代培齐的愈伤组织的原生质体产量高于液体培养基,尤其以从继代1次愈伤组织收集的原生质体最为适宜;纤维素酶0．30％＋离析酶0．30％组合获得的原生质体产量最高,且细胞碎片较少;DPD培养基的原生质体较其他培养基的分裂得早,MS培养基的培幂效果最差,[结论]该研究为罗布麻遗传转化、突变体筛选及体细胞融合育种提供了技术途径：     

适宜原生质体分离的美味猕猴桃愈伤组织的愈选

由美味猕猴桃东山峰７９－０９品种诱导产生的４种类型愈伤组织，其分离原生质体的效果不同；Ａ型愈伤组织分离的原生质体数量多，但活力较低；Ｂ型愈伤组织分离的原生质体不仅数量较多，而且活力也高；Ｃ型愈伤组织分离的原生质体数量少，但活力高；Ｄ型愈伤组织分离的原生质体数量较多，但活力低。     

枇杷原生质体培养形成愈伤组织

把茂木、尾早生、解放钟、长红等枇杷品种的心脏形至完全成熟的胚,离体培养于分别附加一定浓度植物生长调节剂的B_5,MS和改良MS(大量元素减半,简称mMS)的培养基中,诱导产生胚性愈伤组织.这种愈伤组织在添加低浓度的2,4-D的mMS培养基上产生体细胞胚.以初代和继代培养若干代的愈伤组织作为分离原生质体的材料来源.酶解液的主要成分为纤维素酶、离析酶和崩溃酶,附加0.6 mol/L的山梨醇作为渗透压稳定剂,原生质体的最高得率为1.65±0.6×10~7/g.原生质体经液体浅层培养或半固体培养4—5d后,观察到第1次细胞分裂,2周后形成小细胞团.培养2个月后,获得了愈伤组织.     

适宜原生质体分离的美味猕猴桃愈伤组织的筛选

由美味猕猴桃东山峰 79- 0 9品种诱导产生的 4种类型愈伤组织 ,其分离原生质体的效果不同 :A型愈伤组织分离的原生质体数量多 ,但活力较低 ;B型愈伤组织分离的原生质体不仅数量较多 ,而且活力也高 ;C型愈伤组织分离的原生质体数量少 ,但活力高 ;D型愈伤组织分离的原生质体数量较多 ,但活力低     

盐地碱蓬愈伤组织原生质体的分离纯化

探索了盐地碱蓬愈伤组织原生质体提取过程中所需要的酶浓度及其比例、最适甘露醇浓度,以得到最佳盐地碱蓬原生质体的纯化方法。结果表明,原生质体分离的最佳条件是:甘露醇0.7 mol/L、纤维素酶3.0%、离析酶1.0%和果胶酶0.2%。     

基因型和聚乙二醇预处理对甘蔗胚性愈伤组织原生质体分离的影响

对福农８６／１７、桂糖１１号和粤糖５７／４２３等３个甘蔗基因型的胚性愈伤组织进行了原生质体分离，研究了聚乙二醇（ＰＥＧ）预处理对福农８６／１７胚性愈伤组织原生质体分离的影响．结果表明，桂糖１１号的原生质体活力较高，但得率较低，福农８６／１７的原生质体活力和得率都较低，粤糖５７／４２３的原生质体得率较高，但活力也较低．ＰＥＧ预处理可以提高胚性愈伤组织分离的原生质体活力．一定质量浓度和一定时间的ＰＥＧ预处理能够成倍地提高原生质体的得率，以质量浓度为０．５０ｍｇ·Ｌ－１的ＰＥＧ预处理１５ｍｉｎ，甘蔗福农８６／１７每克胚性愈伤组织可分离获得１×１０６个有活力的原生质体     

柚类、橘类叶肉原生质体分离方法研究

原生质体是植物遗传改良的重要实验体系之一,而原生质体的分离是该体系的基础。对柑橘叶肉原生质体来说,柠檬、橙类等品种的叶肉原生质体比较容易分离,而柚类、橘类等柑橘品种则相对困难。本研究采用椪柑、黄岩本地早、沙田柚、冰糖橘4个品种为试材,枳壳试管苗为对照,系统研究了不同基因型、不同叶龄、不同酶种类、不同酶液组合对叶肉原生质体分离的影响,探讨了影响柚类、橘类等柑橘叶肉原生质体分离的因素,从中找出了各品种较适宜的分离条件。在适宜条件下,4种供试品种的原生质体得率(FW)可达10×106~20×106g-1。     

杂种落叶松愈伤组织诱导培养基的建立和优化

[目的]建立一种高效稳定的杂种落叶松组织培养体系。[方法]以杂种落叶松成熟合子胚作为外植体材料,对其按照不同处理方式进行消毒,且以不同种类培养基和激素种类及浓度进行愈伤组织的诱导,测算愈伤组织的体积。[结果]将去皮种子用流水冲洗2 d,用70%乙醇消毒1 min转入4%NaClO消毒15 min后,再将剥出的胚放入0.5%NaClO消毒2 min胚存活率最高;在光照条件下,BM培养基中添加2.0 mg/L TDZ愈伤组织的诱导效果最好,愈伤组织的诱导率为90.5%;愈伤组织的L、W、H与t呈类线性关系,体积与时间呈类指数关系。[结论]为落叶松稳定组织培养体系的构建和优化提供方法。     

草木樨愈伤组织的诱导及其原生质体的制备

为建立草木樨的细胞融合原生质体杂交体系,以白花草木樨嫩叶为材料,以MS为基本培养基,在2,4-D和6-BA不同激素水平下研究愈伤组织诱导率,并在不同的酶液组分和酶解时间下对愈伤组织进行酶解制取原生质体。结果表明:随着激素2,4-D和6-BA浓度的增大,愈伤组织的诱导率呈先增大后减少的趋势变化,当激素2,4-D和6-BA浓度分别为1.5、0.3 mg/L时,诱导率最高,可达90%。草木樨愈伤组织在2.0%纤维素酶、0.3%果胶酶、1.0%离析酶中酶解15 h为最佳,此时有活力的原生质体产量最高,可达1 890×104个/g。     

桂花愈伤组织的诱导与增殖

[目的]探索影响桂花愈伤组织诱导及增殖的激素组合。[方法]以紫银桂的幼叶、茎尖和幼胚为材料,对影响桂花愈伤组织形成和继代培养的激素组合进行研究。[结果]叶片、茎尖和幼胚在不同培养基中均能产生愈伤组织。在诱导培养基中NAA浓度为0.3 mg/L的条件下,当幼胚、幼叶和茎尖培养基中6-BA浓度分别为3.0、5.0和5.0 mg/L时,愈伤组织的诱导率最高。在诱导培养基中NAA浓度为0.5 mg/L的条件下,当幼胚、茎尖和幼叶培养基中6-BA浓度为3.0、3.05、.0 mg/L时,愈伤组织的诱导率最高。从节省成本的因素考虑,最适合愈伤组织增殖的激素组合应为6-BA 2.0+NAA 0.5 mg/L。[结论]该研究为桂花愈伤组织的诱导和增殖的进一步研究奠定了基础。