科技消息

1985年12月18日吉林省农牧厅组织省内有关专家对吉林省兽医科学研究所的“鸡新城疫免疫荧光抗体诊断技术的研究”和“绵羊胰吸虫病防治技术的研究”两项科研项目进行了鉴定。专家们认为“鸡新城疫免疫荧光抗体诊断技术的研究”选题结合生产实际、方     

间接荧光抗体法快速鉴别猪肺炎支原体的初步研究

1941年,Coons等首先应用荧光素标记抗体,奠定了免疫荧光技术的基础。由于免疫荧光技术有高度特异性,操作方法简单,并能快速测定抗原或抗体,近年在兽医科学中得到广泛应用     

免疫荧光技术

兔疫荧光技术又称荧光抗体技术。它是把抗原抗体反应的敏感性和特异性同显微形态学相结合,可以特异、敏感、快速地检测和定位某些未知抗原和抗体。自Coons等(1941)建立免疫荧光技术以来,免疫荧光技术已在医学、农学、兽医学和生物学等领域广泛应用。结合我们的体会,本文对免疫荧光技术作一概括的介绍。     

玻片固相抗体吸附免疫荧光技术(SPAIF)在食品沙门氏菌快速检出中的应用

为了排除食品沙门氏菌免疫荧光快速检验中杂菌和杂质对结果判断的干扰,我们应用红细胞吸附免疫荧光技术(EAIA),取得了较普通免疫荧光技术(OIF)明显为好的结果。但是本技术所使用的红细胞须予先用抗体致敏,一般基层实验室难以做到,而且由于红细胞上的抗体量少,吸附菌也少,因而对于个别菌量少的标本,漏检的可能     

应用FA及PPA-ELISA技术对猪瘟的检测

用免疫荧光抗体诊断技术及单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术对疑为猪瘟病毒感染猪进行了检测 ,重点阐述了 2种方法的技术原理和操作过程。通过用免疫荧光抗体诊断技术检测了 5份病料 ,其中有 2份为阳性 ,阳性率为 40 % ;用单克隆抗体纯化酶联免疫吸附试验诊断技术检测了猪瘟血清抗体 ,在 40头母猪血清样品中 ,猪瘟弱毒抗体效价 OD值较高 ,有 1 0 0 %的保护率 ,但是发现母猪群中有 1 0 %隐性猪瘟感染 ,其强毒抗体效价 OD值大于 0 .5,体内带有猪瘟病毒。结果及过程表明此两种诊断方法检测快速、鉴别准确、分辨率高     

免疫荧光检测技术及其在寄生虫检测中的应用进展

免疫荧光技术(immunofluorescence technique)是在生物化学、显微镜技术和免疫学基础上发展起来的一项检测技术,是用荧光标记的抗体或抗原与被检样品中相应的抗原或抗体结合,在显微镜下检测荧光,并对样品进行分析的方法。它把显微镜技术的精确性和免疫学检测的特异性、敏感性有机地结合在一起。这一方法的特点是特异性强、灵敏度高。作为一种快速诊断方法,目前广泛应用于病毒、细菌病的诊断,也是许多动物寄生虫病(如弓形虫病)的常规诊断方法。随着标记抗体、抗原的普及,免疫荧光技术在寄生虫病诊断方面的应用将更加广泛。     

猪圆环病毒间接免疫荧光方法的建立

将接种PCV2且经多次传代的PK-15带毒细胞分散到96孔细胞培养板上，制成抗原诊断板，应用间接免疫荧光技术检测血清中PCV2的抗体。通过对各种反应物的工作浓度与作用时间的优化，建立了PCV2抗体的间接免疫荧光检测技术，可用于PCV2抗体水平的监测，为今后的猪圆环病毒疫苗抗体检测的研究提供了检测方法。     

禽流感研究概述(下)

5．3．2．5 免疫荧光技术(IFT) 免疫荧光技术就是荧光抗体技术(FAT)。IFT早在1961年就开始用于人类流感的快速诊断。1984年美国宾西法尼亚州爆发禽流感时Skeeles将IFT首次用于AIV的检测。IFT最早用于病毒的鉴定和定位病毒感染细胞中特异性抗原，主要是核内荧光；用MP抗原的荧光抗体主要出现胞质荧光，核内也有部分荧光。     

免疫荧光技术在兽医临床中的应用研究

免疫荧光技术在兽医临床中的应用研究青海畜牧兽医学院韩志辉，贾秉安免疫荧光技术是把血清学方法和显微镜示踪方法结合起来的一种技术。其原理系将抗体标记上荧光素与相应抗原结合后，在荧光显微镜下呈荧光现象的一种特异免疫荧光反应方法。此种方法结合了免疫学反应的特...     

应用间接免疫荧光抗体技术检测鸡传染性贫血病毒抗体

用MDCC－MSB1细胞增殖鸡传染性贫血病毒（CAV）CuX-1毒株制备抗原,建立了检测CAV抗体的间接免疫荧光的方法。应用该方法检测CAV基因工程亚单位苗首免、二免和三免后鸡体内的CAV抗体,结果表明首免一个月后,鸡血清中CAV抗体的滴度很低或几乎测不到抗体;二免一个月后,鸡血甭中可测到较高的CAV抗体;三免一个月后,鸡血清中的CAV抗体滴度更高。另外,应用此方法调查了某禽场3个批次鸡体内的CAV抗体,其中32日龄黄鸡和1日龄乌骨鸡体内的 CAV抗体为阴性,而1日黄鸡体内的CAV抗体为阳性。     

网状内皮组织增殖病病毒感染SPF雏鸡后病毒在各器官内的分布

以间接免疫荧光抗体技术研究了１日龄ＳＰＦ雏鸡感染网状内皮细胞增殖病病毒（ＲＥＶ）后，病毒在机体各器官内的分布。结果表明，雏鸡感染ＲＥＶ后中在腔上囊、脾、肝和胸腺内大量存在，其它器官分布少。这与ＲＥＶ造成机体各免疫器官和肝的严重变性、导致机体免疫功能降低密切相关。     

应用ELISA间接法检查牛流行热病毒抗体的研究

前言目前用于牛流行热的特异性血清学诊断方法有免疫荧光法(直接法和间接法)、补体结合试验以及中和试验等。酶联免疫吸附试验(ELISA)是一种简便、快速、敏感的血清学诊断方法,因此,在医学和兽医学研究领域特别受到广泛的重视。我们在研究补体结合试验和免疫荧光技术的基础上,进行了ELISA检查牛流行热病毒抗体的研究。现将初步结果报告如下。     

免疫荧光技术在猪弓形体病早期及快速诊断上的应用

免疫荧光技术(或称荧光抗体技术)自1941Coos等创立以后,到现在已有三十多年历史。这种技术只有在近十年来才有较大的发展,广泛应用于医学及生物学研究中,国外在动物疾病的诊断研究中,如细菌、病毒。寄生虫病应用较为普遍,据报道日本已     

免疫荧光技术在兽医学上的应用

免疫荧光技术（Ｉｍｍｕｎｏｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）又称荧光抗体技术。它是在免疫学、生物化学和显微镜技术发展的基础上建立起来的一项技术，把免疫的特异性、敏感性和显微镜技术的精确性有机地结合起来，使之成为现代生物学、医学和兽医学广泛应...     

抗chTLR3单克隆抗体制备及其初步应用

Toll样受体3(TLR3)是激发机体天然免疫的模式识别受体,为了制备能与天然结构的鸡TLR3(chTLR3)蛋白结合的单克隆抗体,将前期构建的可以在细胞内表达的真核重组质粒pVAX1-Igk-chTLR3免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术制备抗chTLR3单克隆抗体;并应用该抗体采用Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光技术检测镉中毒雏鸡外周血淋巴细胞与脾内chTLR3的表达变化。结果发现,获得1株阳性杂交瘤细胞,该细胞株单个细胞染色体数量为(94±2)条,细胞上清效价为1∶25,抗体亚类鉴定为IgG3,细胞上清能够与原核表达的chTLR3胞外区蛋白及鸡外周血淋巴细胞中的chTLR3特异性结合。应用此抗体采用Western blot、流式细胞术及间接免疫荧光技术均能够在对照组和染镉组雏鸡外周血淋巴细胞及脾内检测到chTLR3的蛋白表达。结果表明,成功制备了具有天然活性的chTLR3单克隆抗体,该抗体可用于Western blot、间接免疫荧光技术及流式细胞术研究chTLR3在鸡组织细胞的分布定位、表达变化,为示踪chTLR3蛋白分布、表达及研究其在鸡发病机制中的作用提供了重要的物质基础。     

血清学检测的雄性特异性抗原Fab抗体的特异性鉴定

旨在研究血清学检测的雄性特异性抗原噬菌体Fab抗体的特异性。以从噬菌体Fab抗体库中筛选到具有较高雄性特异性结合活性的重组噬菌体克隆为基础,构建Fab抗体的可溶性表达噬质粒,并诱导和纯化该抗体片段,利用免疫荧光FITC/DAPI共染技术和ELISA分析其特异性。结果表明,该抗体在约49 ku处有条带出现。在Fab抗体和H-Y抗血清的细胞免疫荧光比较分析试验中发现,从雌、雄鼠脾细胞的阳性细胞数量和平均荧光强度的角度分析,Fab抗体的雄性特异性强于抗血清。石蜡切片免疫荧光定量分析显示,Fab抗体与雄鼠肝脏的结合活性明显高于对应雌鼠,差异极显著(t=20.73,P=0.002 3<0.01),而H-Y抗血清与雄鼠肝脏的结合活性略高于对应雌鼠,差异显著(t=7.11,P=0.019 2<0.05)。以C57BL/6雄鼠脾细胞、睾丸细胞作为抗原的ELISA分析显示,Fab抗体具有雄性特异性,但Fab抗体的OD值低于抗血清。结果提示,Fab抗体的雄性特异性高于H-Y抗血清,但其雄性特异性结合活性低于H-Y抗血清,Fab抗体在具备雄性特异性的同时,仍有少量雌性非特异性结合,Fab抗体的体外亲和力成熟可作为后续研究工作,以获...     

抗H5N1亚型高致病性禽流感猴源噬菌体scFv的构建和表达

为探索治疗禽流感的方法,本实验从免疫H5N1亚型禽流感疫苗的猕猴淋巴细胞中提取总mRNA并扩增重链和轻链可变区(VH、Vλ和Vκ),用重叠延伸PCR方法构建VH-Linker-Vλ和VH-Linker-Vκ形式的单链抗体(scFv),采用噬菌体展示技术构建了噬菌体抗体库,从2.2×106的噬菌体库中淘选得到具有较高亲和力的H6株scFv,并通过ELISA、SDS-PAGE、western blot、间接免疫荧光(IFA)和竞争抑制ELISA对其进行鉴定,证实所获得的scFv为32ku,并且能与病毒发生特异性结合。IgBlast序列分析发现,所得到的scFv基因Vλ与人免疫球蛋白胚系基因同源性达91.5%,而VH同源性为75%。本研究所得到的猴源抗体可变区为人源化抗体的构建以及禽流感的治疗奠定了基础。     

抗欧洲型和美洲型PRRSV抗体的鉴别

PRRSV有欧洲型和美洲型两种毒株已众所周知,但能检测和鉴别这两种毒株所产生抗体的方法还未见有报道。Seuberlish.T等建立了一种双重ELISA同时检测并鉴别这两种抗体。这种串联的PRRS ELISA是用在E.coli中表达的亲和纯化的重组核衣壳蛋白构建的。在本试验中,用IDEXX Herdchek PRRS ELISA试剂盒和间接免疫荧光技术     

应用荧光抗体法诊断猪瘟的研究 Ⅱ有关扁桃体冰冻切片荧光抗体法在应用上的几个问题

前报已报导了用免疫荧光抗体法对人工感染猪瘟猪扁桃体冰冻切片诊断猪瘟的研究结果,证明这是一种特异的、快速的实验室诊断方法。本报提出了制备荧光抗体用高免血清效价的测定方法、活体扁桃体病料的采样方法、感染猪瘟病毒猪扁桃体免疫荧光的检出时间和猪瘟兔化弱毒疫苗接种后是否产生免疫荧光等研究结果。     

猪IL-15多克隆抗体的制备及其生物活性的检测

猪IL-15与人IL-15具有较高的相似率,为进一步研究其生物活性,本研究将去除信号肽的猪IL-15克隆至原核表达载体pET-30a,并成功获得其重组蛋白。将纯化的重组蛋白用于多克隆抗体的制备,并利用琼脂扩散方法、ELISA方法、Western blotting试验及免疫荧光试验对其抗体效价、特异性、灵敏度等生物活性进行了检测。结果表明,该抗体具有较高的抗体效价和很好的特异性,可以作为IL-15特异性抗体用于今后的试验研究。