壳聚糖、ε-聚赖氨酸、Nisin抑制沙门氏菌效果研究

为研究生物防腐剂壳聚糖、Nisin（0.1 mol·L^-1EDTA）、ε-聚赖氨酸能否代替化学性食品防腐剂,本研究通过敏感性测定、杀菌动力学测定、正交优化实验、应用效果试验研究了其对指示菌沙门氏菌的抑制效果。结果表明,壳聚糖、Nisin、ε-聚赖氨酸的最小抑菌浓度分别为10 mg·mL^-1、62.5μg·mL^-1、31μg·mL^-1。在EDTA为0.1 mol·L^-1的条件下,当壳聚糖、Nisin、ε-聚赖氨酸的浓度分别为5 mg·mL^-1、10μg·mL^-1、40μg·mL^-1时对沙门氏菌的抑制作用最好,在这一最佳组合条件下对沙门氏菌杀菌率达87.75%。     

产ε-聚赖氨酸菌株的筛选、鉴定及发酵

分别在培养基中添加2 g/Lε-聚赖氨酸(ε-PL)和复合抗生素抑菌剂,结合ε-聚赖氨酸与亚甲基蓝形成透明圈的现象初筛产ε-PL的菌株,根据ε-聚赖氨酸与道夫根试剂的特殊沉淀反应现象复筛获得5株菌株,经生理生化试验和16S rDNA分析鉴定,5株菌株中包括1株解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),1株蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus),1株链霉菌属(Streptomyces sp.,未鉴定到种)菌株,1株糖多孢属(Saccharopolyspora sp)菌株,1株白色链霉菌(Streptomyces albulus),其摇瓶发酵ε-聚赖氨酸产量分别为0.06、0.08、0.70、0.82、1.56 g/L;采用2阶段法对wzj4、wzj5进行5 L发酵罐发酵,结果发现,其ε-聚赖氨酸最大产量分别为2.54、6.99 g/L。凝胶色谱分析表明wzj5发酵液中ε-聚赖氨酸分子量大小与对照品相近,最小抑菌浓度为250μg/mL,对大肠杆菌的抑菌效果良好。     

连翘精油- ε-pL-Nisin复合涂膜保鲜液配制

以商洛连翘为研究对象,采用超临界CO₂萃取连翘精油,将萃取精油与壳聚糖、ε-聚赖氨酸、Nisin复配制备涂膜保鲜液。对萃取精油进行抑菌实验,结果表明连翘精油对大肠杆菌、金黄色葡萄杆菌均有较好的抑菌效果,且抑菌效果随着精油组分浓度的增加,抑菌活性亦增强。设计单因素实验,选取影响显著的三个因素,以番茄的失重率、Vc含量为响应值,通过响应面软件优化分析,结果表明涂膜保鲜液最佳复合配方为连翘精油1.50%、壳聚糖2.0%、ε-聚赖氨酸0.50%、Nisin 0.05%;在25℃、相对湿度65%的条件下,番茄储藏10d,失重率为0.75%,维生素C含量为0.42 mg/g,能有效减少失水量、营养物质的损失,将为延长果蔬的货架期提供参考。     

天然生物保鲜剂对麻辣鸭脖抑菌效果的研究

对天然保鲜剂纳他霉素、乳酸链球菌素(Nisin)和ε-聚赖氨酸应用于麻辣鸭脖保鲜进行了研究。通过单因素实验,从六种天然抑菌剂中选取对麻辣鸭脖中腐败菌抑制作用较强的纳他霉素、Nisin和ε-聚赖氨酸作为实验抑菌剂。采用三因素三水平正交试验设计,把三种抑菌剂复合使用,确定复合保鲜抑菌剂的最佳配比为:ε-聚赖氨酸0.05 g·kg~(-1),Nisin 0.40 g·kg~(-1),纳他霉素0.20 g·kg~(-1)。在此条件下,麻辣鸭脖在常温下货架期可以达到20 d。研究结果能够为麻辣鸭脖质量控制研究提供理论基础。     

黄芩中黄芩素的提取与抑菌效果的初步研究

本文以黄芩根为原料,采用单因素及正交试验,研究料液比、酶料比、超声时间、超声温度等因素对黄芩素得率的影响,结果表明:优化提取方法为料液比1:22、酶料比2:1、酶提6 h、50℃超声处理20 min,黄芩素的得率为23.122 mg·g~(-1)。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌为供试菌,以最低抑菌浓度为评价指标,对黄芩素的抑菌效果进行研究,结果表明:金黄色葡萄球菌添加黄芩素溶液浓度超过10 mg·mL~(-1)、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌添加黄芩素溶液浓度超过20 mg·mL~(-1)时,表现出抑菌效果。研究结果可作为提取黄芩中黄芩素和研究天然食品防腐剂的技术参考。     

黄芩中黄芩素的提取与抑菌效果的初步研究

以黄茶根为原料,采用单因素及正交试验,研究料液比、酶料比、超声时间、超声温度等因素对黄芩素得率的影响,结果表明:优化提取方法为料液比1:22、酶料比2:1、酶提6 h、50℃超声处理20min,黄芩素的得率为23.122 mg·g~(-1)。以大肠杆菌、枯草芽孢杆菌、金黄色葡萄球菌为供试菌,以最低抑菌浓度为评价指标,对黄芩素的抑菌效果进行研究,结果表明:金黄色葡萄球菌添加黄芩素溶液浓度超过10 mg·mL~(-1)、大肠杆菌和枯草芽孢杆菌添加黄芩素溶液浓度超过20 mg·mL~(-1)时,表现出抑菌效果。研究结果可作为提取黄芩中黄芩素和研究天然食品防腐剂的技术参考。     

溶菌酶快速诱导蜡样芽孢杆菌L型的研究

[目的]研究溶菌酶诱导蜡样芽孢杆菌L型的技术条件。[方法]利用溶菌酶诱导蜡样芽孢杆菌L型,观察其形成、形态、生长及其对渗透压的敏感性等特性。[结果]在培养基中加入2 mg/ml的溶菌酶能够较好地诱导蜡样芽孢杆菌L型的产生,通过连续的培养获得了稳定的L型蜡样芽孢杆菌。L型蜡样芽孢杆菌呈球状,革兰氏染色阴性,对渗透压敏感。[结论]确定了蜡样芽孢杆菌溶菌酶法诱导L型的最佳浓度。     

Nisin和EDTA联合抑制金黄色葡萄球菌效果研究

[目的]为Nisin与其他防腐剂的混合使用提供参考依据。[方法]以金黄色葡萄球菌为受试菌,通过单独与联合抑菌试验研究EDTA与Nisin的抑菌效果。[结果]Nisin对金黄色葡萄球菌的抑制作用随着浓度增加而逐渐增强。当浓度低于0.05 mg/ml时,Nisin的抑菌效果不明显,当浓度高于0.50 mg/ml时,Nisin的抑菌效果变化不大。EDTA对金黄色葡萄球菌的抑制作用很小,当浓度高于0.10mg/ml时,EDTA的抑菌效果变化不大。当EDTA浓度不变时,随着Nisin的浓度增加EDTA与Nisin的联合抑菌效果不断增强。Nisin与EDTA联合使用时表现出协同作用,Nisin与EDTA的浓度分别为0.50和0.10 mg/ml时,其抑菌效果显著。[结论]复合防腐剂能有效提高各自对金黄色葡萄球菌的抑菌效果,能有效地抑制金黄色葡萄糖球菌的生长繁殖。     

31种瑶药提取物抑菌活性的筛选

以烟草青枯菌(Ralstonia solanacearum)为供试菌株,采用二倍稀释法筛选了31种瑶药提取物的抑菌活性,并测定了初筛高活性瑶药提取物对烟草青枯菌、蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的最低抑菌浓度(MIC)。结果表明:在500 mg·L~(-1)的质量浓度下,有18种瑶药提取物表现出显著的抑菌活性;在100 mg·L~(-1)的质量浓度下,穿破石、独脚风、贯众等3种瑶药提取物对烟草青枯菌具显著的抑菌活性。穿破石、独脚风、贯众等3种提取物对烟草青枯菌的MIC分别为25,25,25 mg·L~(-1),对蜡状芽孢杆菌(Bacillus cereus)的MIC分别为12.5,50,50 mg·L~(-1),对金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)的MIC分别为50,25,50 mg·L~(-1)。     

调理石斑鱼产品腐败菌的分离及抑菌研究

为研究天然防腐剂对调理石斑鱼腐败菌的抑菌效果,对调理石斑鱼的腐败菌进行分离纯化,选择能适应低温环境或能产生芽孢的腐败菌作为试验菌。使用滤纸片法测定乳酸链球菌素、茶多酚、聚赖氨酸对试验菌的抑菌效果,同时采用平板培养法测定天然防腐剂对试验菌的最低抑菌浓度(MIC)。试验结果表明,乳酸链球菌素对7种试验菌都有抑菌效果,茶多酚对5种试验菌有抑菌效果,聚赖氨酸对3种试验菌有抑菌效果。乳酸链球菌素对试验菌中革兰氏阳性菌抑菌效果最好,其中对S-3、S-9、S-11和S-13的MIC分别为0.1、0.4、0.5、0.4 mg/mL;茶多酚对S-3、S-5、S-8、S-10和S-11的MIC分别为0.5、8.0、2.0、0.5、1.0 mg/mL。聚赖氨酸对试验菌S-5、S-8和S-10的MIC分别为2.5、1.5、2.0 mg/mL。     

猪源高产蛋白酶芽胞杆菌的分离与鉴定

利用酪蛋白培养基从猪粪便样品中分离产蛋白酶的芽胞杆菌,采用福林酚法测定其酶活力,对筛选到的高酶活菌株进行形态学、生理生化和分子鉴定。结果表明,从86株分离茵中筛选了一株酶活较大的菌株B．A464,革兰氏阳性菌,呈粗杆状,能形成卵圆形芽孢,16SrDNA序列长度是1463bp,与蜡样芽孢杆菌的同源性高达99％,鉴定为蜡样芽孢杆菌,所产蛋白酶活力为2．19×10^3U·mL^-1。     

外源微生物强化蓖麻对铅的吸收与积累研究

采用温室盆栽(土壤Pb浓度为300 mg·kg-1)试验,将3株Pb抗性菌株——蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)和铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)分别接种于蓖麻根际,研究铅抗性菌株对蓖麻吸收积累铅的影响.结果表明,蜡样芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌和铜绿假单胞菌处理的植物地上部Pb吸收量分别比对照增加40%、18%和19%(P＜0.05).这说明上述细菌对蓖麻积累Pb均有促进作用,外源微生物对强化蓖麻修复铅污染土壤具有一定的潜力.     

虾源蜡样芽孢杆菌D7的生态安全性评价

为了评价蜡样芽孢杆菌菌株D7的生态安全性,分别测定了蜡样芽孢杆菌D7对氨氮、亚硝酸盐、磷酸盐浓度的影响,以及对小球藻、大型蚤、斑马鱼、凡纳滨对虾和草鱼等水生动植物的安全性。研究结果表明,蜡样芽孢杆菌菌株D7浓度≥1×10⁷ cfu·mL^-1时,水中氨氮及亚硝酸盐含量显著降低(P<0.05)。蜡样芽孢杆菌菌株D7浓度≤1×10⁶ cfu·mL^-1时,对氨氮及亚硝酸盐含量无显著影响。蜡样芽孢杆菌菌株D7浓度在10⁴~10⁸ cfu·mL^-1时,水中磷酸盐含量无显著变化。小球藻含量与菌体浓度呈正相关。处理96 h,对大型蚤、斑马鱼和凡纳滨对虾死亡率均无显著影响。以不同细菌剂量(10⁸~10¹² cfu·mL^-1)灌胃草鱼,处理96 h后,未出现草鱼死亡现象。表明虾源蜡样芽孢杆菌D7生态安全性较好,对水体及养殖动物无明显危害。     

戊二醛-明胶-纳米SiO_2复合膜的抑菌试验研究

测定了12种戊二醛-明胶-纳米SiO2复合膜对6种供试菌的抑制效果,并采用平板稀释法对其最低抑菌浓度(MIC)进行了测定.结果表明,12种戊二醛-明胶-纳米SiO2复合膜对供试菌具有较好的抑制效果,12种材料对同一供试菌株的最低抑菌浓度相同,而对不同种类的供试菌株的最低抑菌浓度却有所不同(64.0~256.0 mg/ml),其中对蜡样芽孢杆菌的最低抑菌浓度最高(256.0 mg/ml),对链球菌、葡萄球菌和变形杆菌的最低抑菌浓度较低(64.0 mg/ml),对大肠杆菌和棒状杆菌的最低抑菌浓度为128.0 mg/ml.     

蜡样芽孢杆菌特征性蛋白的分离与纯化

蜡样芽孢杆菌是一种致病性病原菌,能引起胃肠感染和非胃肠感染。本研究从实验室分离的蜡样芽孢杆菌、蜡样芽孢杆菌1.026 0、巨大芽孢杆菌1.015 1、蕈状芽孢杆菌1.085 6和苏云金芽孢杆菌1.101 4这五株菌中提取蛋白,利用SDS-PAGE方法纯化,并测定出蜡样芽孢杆菌有3种分子量约为28.5、26.5和20.0 KDa的特征性蛋白,而苏云金芽孢杆菌、巨大芽孢杆菌和蕈状芽孢杆菌则没有此特征性蛋白。     

三种微生物对铀胁迫下凤眼莲荧光生理及铀累积特性的影响

为探究微生物对植物修复铀(U)污染效果的影响,获得更好的放射性重金属生物修复模式。通过大棚水培实验,研究了3种微生物(枯草芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌和黑曲霉)在不同U浓度下(0、5、15、25 mg·L~(-1))对凤眼莲生物量、荧光生理特性及U富集特征的影响。结果表明:在U胁迫下,3种微生物对凤眼莲均有促生作用。在U浓度为25 mg·L~(-1)时,枯草芽孢杆菌可使凤眼莲根系干质量增长34.8%,胶质芽孢杆菌使凤眼莲茎叶干质量增长60.5%。黑曲霉对凤眼莲的3种抗氧化酶活性有抑制作用,而枯草芽孢杆菌和胶质芽孢杆菌则对它们有促进作用。在实验浓度下,3种微生物对凤眼莲的最大光化学效率(FV/Fm)的影响均有明显提高,但是,光合性能指数(PIabs)与可变荧光强度(Vj)仅在5、15 mg·L~(-1)下有明显上升。实验条件下,3种微生物对凤眼莲富集U均有明显影响,在U浓度为25 mg·L~(-1)的条件下,胶质芽孢杆菌可使凤眼莲根系U富集浓度提高36.6%,枯草芽孢杆菌可使凤眼莲茎叶富集浓度提高14.1%,并且3种微生物对凤眼莲植株的U富集量及富集浓度均有促进作用,其中胶质芽孢杆菌对U富集量提高最为明显(51.8%)。枯草芽孢杆菌能明显提高凤眼莲的转移系数(TF),最高为1.192,黑曲霉则对生物富集系数(BCF)提升明显,最高为272.8。在植物根系接种微生物可能会对植物修复过程产生影响,凤眼莲根系接种枯草芽孢杆菌、胶质芽孢杆菌或黑曲霉可以提高凤眼莲的生物量和U富集能力。     

ε-聚赖氨酸复合物对大肠杆菌和沙门氏菌抑制作用研究

为了研究ε-聚赖氨酸对食品中常见G-菌的复合抑制效果,采用圆滤纸片法对大肠杆菌和沙门氏菌的抑菌效果进行了研究。试验结果表明:ε-聚赖氨酸对于大肠杆菌、沙门氏菌均能起到抑菌作用,随着ε-聚赖氨酸浓度的增大抑菌效果逐渐增强。不同浓度的ε-聚赖氨酸与0.1%双乙酸钠复合时抑菌圈虽然都有所增大,但协同增效作用不十分显著,而与0.2%曲酸复合试剂协同抑菌作用更为显著。     

牛心朴子体外抑菌作用的研究

[目的]研究牛心朴子的抑菌作用,为开发利用牛心朴子资源提供理论依据。[方法]将牛心朴子全草烘干粉碎后,用乙醇溶剂浸提。以金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌为供试菌,研究其抑菌活性,并测定其相应最小抑菌浓度（Mc）。[结果]牛心朴子生物碱提取物对金黄色葡萄球菌、无乳链球菌、蜡样芽孢杆菌、大肠杆菌具有较好的抑制作用,其MIC分别为12．500、1．563、3．125及L6．250mg／ml;但对猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌及鼠伤寒沙门氏菌无抑制作用。[结论]牛心朴子生物碱提取物对动物致病菌有一定的抑菌效果。     

天然保鲜剂对低温肉制品的保鲜作用

冷却肉制品因其口味独特、营养成分较高和相对安全而受到消费者们的热爱。但是随着冷却肉制品贮藏时间的变化,肉制品在嗜冷菌和酶的作用下,蛋白质和脂肪等许多营养物质都受到了分解效果的影响,在一定程度上破坏了肉制品的营养价值。为了解决这个问题,通过ε-聚赖氨酸以及ε-聚赖氨酸和壳聚糖复合保鲜剂对冷却猪肉进行保鲜,在对冷却猪肉保鲜的过程中测定猪肉的菌落总数、挥发性盐基氮含量、p H值、红度值以及保水力等指标,综合各项指标分析其保鲜能力。结果表明,0. 24%ε-聚赖氨酸+1. 8%壳聚糖的保鲜能力最优。     

基于实时荧光PCR技术快速检测饲料中的蜡样芽孢杆菌

蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)在自然界中广泛存在,而且大部分菌株能产生肠毒素和呕吐毒素,是引起养殖动物中毒的常见致病菌。在饲料生产过程中,为对该病原菌进行有效监控,以蜡样芽孢杆菌肠毒素FM基因(entFM)和肠毒素T基因(bceT)保守区域片段为靶序列,利用DNAMAN设计两对特异性引物,建立一种基于实时荧光PCR (real-time PCR)技术的蜡样芽孢杆菌快速检测方法,并对所建立方法的重复性、特异性及灵敏度进行分析。结果表明:所设计的引物可以实现对蜡样芽孢杆菌的快速检测而且具有较高的重复性;对8株蜡样芽孢杆菌和8株非蜡样芽孢杆菌共16株菌株进行特异性检测,8株蜡样芽孢杆菌检测全部为阳性,8株非蜡样芽孢杆菌检测全部为阴性,无漏检和误检现象;对纯培养条件下蜡样芽孢杆菌提取的DNA模板进行10倍梯度稀释并进行灵敏度检测,两种肠毒素基因的检测限均为1.0×10~4CFU·mL~(-1);对人工染菌的饲料样品进行检测,在增菌18～20h后进行实时荧光PCR检测,检测限均可达到10CFU·mL~(-1),证明该方法具有良好的特异性和灵敏度,是快速检测饲料中蜡样芽孢杆菌的有效方法。