HPLC法测定贯叶金丝桃中金丝桃素的含量

[目的]用HPLC法测定贯叶金丝桃（Hypericum perforalurnL.）提取液中金丝桃素含量,以期为贯叶金丝桃的开发利用提供理论依据。[方法]HPLC条件为：岛津VP-ODS C18（4.6 mm×150 mm,0.5μm）色谱柱;流动相为甲醇-乙酸乙酯-磷酸盐缓冲溶液（V∶V=60∶20∶20,pH=2.0）;流速为1.0 ml/min;柱温25℃;检测波长590 nm;进样量10μl。[结果]贯叶金丝桃提取液在金丝桃素含量为2.56～19.20μg/ml浓度范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 9）,测得金丝桃素的含量为0.79 mg/g,提取率0.079%。[结论]该方法精密度良好,重现性好,稳定性好,适合贯叶金丝桃中金丝桃素含量的测定。     

贯叶金丝桃的电子束辐照杀菌研究

研究电子束辐照贯叶金丝桃杀菌的可行性,为科研和生产中有效地应用该方法提供理论依据。辐照样品中微生物数量的测定依据《中华人民共和国药典》提供的方法;应用高效液相色谱检测有效成分金丝桃素和金丝桃苷含量;依据微生物存活对数与辐照剂量的线性关系,求得D10;采用目测、鼻嗅、品尝的评定方法,评定样品辐照前后的外部性状变化。结果表明:细菌、霉菌+酵母菌的D10值分别为2.91 kGy和4.69 kGy,霉菌和酵母菌相对于细菌对电子束有更强的耐受力,适宜的辐照加工剂量为4.5~6.5 kGy,经过辐照后,样品可以保存30~150 d,卫生指标仍达到国家药典中规定的中药粉剂微生物限度标准,金丝桃苷和金丝桃素的含量未发生显著变化。因此,利用电子束辐照贯叶金丝桃杀菌是一种行之有效的方法。     

贯叶连翘金丝桃素的提取及干花茶的研制

以朵大饱满的贯叶连翘花朵为原材料,利用甲醇、吡啶和甲醇(1∶1)、吡啶分别在20,40 min条件下提取金丝桃素,筛选提取金丝桃素的最佳方法。在贯叶连翘花瓣中加入不同比例的绿茶,通过感官评价茶汤色泽、汤色、香气和鲜味,确定一种最好的花茶制作方式。结果表明:甲醇、吡啶和二者混合液均可提取出金丝桃素,其中吡啶提取40 min的金丝桃素含量最大;当贯叶连翘花瓣与绿茶的比例为4∶3时窨制的混合花茶感官评价最好,茶的风味和颜色最佳。     

贯叶金丝桃过氧化氢酶基因的生物信息学分析

利用生物信息学软件分析了贯叶金丝桃过氧化氢酶基因编码蛋白的氨基酸组成、理论等电点、结构域、特征位点、二级结构等蛋白质性质。结果表明：贯叶金丝桃过氧化氢酶基因编码蛋白分子式为：C2580H3880N718O728S13,属于稳定蛋白;二级结构以无规则卷曲为主。     

南京地区贯叶金丝桃的引种试验

2000年至2007年,对分布于中国西南4省13个样点的贯叶金丝桃(Hypericum perforatum)引种至南京后的生长发育规律进行了比较研究.观察其播种出苗情况和茎、叶、花等器官的植物学性状表现.对其形态学及内含物成分的比较分析结果表明,异地栽培后,贯叶金丝桃仍保持原有的生物学特征.同时对贯叶金丝桃在南京地区的不同栽培方式、管理技术等进行了初步探讨.     

贯叶连翘愈伤组织诱导及其金丝桃素检测

采用不同培养基及激素诱导贯叶连翘愈伤组织,研究了不同蔗糖浓度对愈伤组织生长的影响,同时采用HPLC对不同生长状态的愈伤组织中金丝桃素含量进行检测。结果表明:MS + 2 ,4 -D 0 .2mg/L +KT 0 .0 2mg/L的培养基中愈伤组织的诱导率最高;提高蔗糖浓度可以促进愈伤组织生长,但合成金丝桃素的最佳蔗糖浓度为30g/L ;褐化的愈伤组织中金丝桃素含量明显高于生长状态好的愈伤组织,增加量可达7.5～9倍。     

贯叶连翘的组织培养和金丝桃素的生产

以贯叶连翘种子为材料,对贯叶连翘组培苗进行生根培养,筛选和优化生根培养基,进一步在生物反应器内诱导培养不定根,并研究了蔗糖浓度、铵态氮/硝态氮配比以及MS培养基浓度对不定根中金丝桃素含量积累的影响.结果表明:贯叶连翘在3/4MS+IBA 2.5 mg/L+蔗糖30 g/L+琼脂8g/L(pH 5.8)培养基上的生根效果最佳;40 g/L的蔗糖有利于金丝桃素的积累,此时不定根中金丝桃素的含量最高、达0.94 mg/g;当铵态氮/硝态氮配比为30/30时,金丝桃素的含量和生产量达到最大,分别为0.98 mg/g和12.41 mg/L;不定根在不同浓度范围的MS培养基中均可生长,金丝桃素在2MS培养基上的生产量最大、为15.70 mg/L.     

矮壮素对贯叶连翘生长和金丝桃素含量的影响

[目的]研究矮壮素对贯叶连翘生长和金丝桃素含量的影响。[方法]对贯叶连翘喷施不同浓度的矮壮素,测定其生长形态、叶绿素荧光特性和金丝桃素含量金丝桃素含量的动态变化。[结果]尽管矮壮素对贯叶连翘的生长发育具有抑制效应,但是其对提高金丝桃素含量有较为明显的促进作用。适度的矮壮素处理对贯叶连翘光合荧光生理有明显的调控作用。[结论]在贯叶连翘的规模化生产和栽培中,恰当浓度的植物激素处理能提高贯叶连翘的产量和药用成分含量。该研究首次通过叶绿素荧光这一生长指标来研究不同生长激素对贯叶连翘生长生理的调控,也为中草药的安全生产与调控提供一种的新的思路。     

湖北小连翘与贯叶连翘中金丝桃素的含量比较

[目的]比较测定贯叶连翘和湖北小连翘中金丝桃素的含量,以期为湖北小连翘这一新金丝桃素植物资源的开发利用奠定基础。[方法]采用HPLC法测定金丝桃素含量,色谱条件为：Supelcosi lODS色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）,流动相为甲醇-乙腈-水-0.3%磷酸,（V∶V=45∶50∶4.5∶0.5,用三乙胺调pH值至6.0）,流速为1ml/min,检测波长为590nm。[结果]相同生长环境下的湖北小连翘中金丝桃素含量约为贯叶连翘中的3倍;湖北小连翘中金丝桃素的含量随着海拔高度的升高呈逐渐下降趋势;金丝桃素在湖北小连翘各部位中以花和幼果中含量最高,可达0.617%～0.877%,在叶和成熟果实中的含量约为0.35%,根和茎中含量极低。[结论]该试验为湖北小连翘的人工种植和科学采收研究提供了理论指导,为湖北小连翘这一新金丝桃素植物资源的开发利用奠定基础。     

贯叶连翘的化学成分及药理作用研究

贯叶连翘是具有很高药用价值的植物。它作为镇静剂、抗炎药、抗抑郁、抗肿瘤药物具有广阔的应用前景,因而越来越受到人们的重视。介绍了贯叶连翘提取物的化学成分,并总结其药理作用,以期为进一步研究和开发利用贯叶连翘提供理论基础。     

贯叶连翘化学成分分析

从贯叶连翘地上部分带花全草的95%乙醇提取物中分离出6个化合物,经理化常数和光谱分析鉴定了其中4个化合物,分别为槲皮素( )、陈皮甙( )、芦丁( )、金丝桃素( ),化合物 、 由于量太少,未能进行全面鉴定,其中化合物( )陈皮甙为首次从贯叶连翘中获得。     

贯叶金丝桃离体培养及植株再生体系的建立

[目的]研究贯叶金丝桃的组培快繁技术,以提高其繁殖率和生根率,并建立一套高效的离体培养再生体系。[方法]以贯叶金丝桃幼芽为外植体,对适宜的丛生芽繁殖和生根培养基进行了筛选。[结果]适宜的繁殖培养基为MS+6-BA 1.0 mg/L+IAA 0.1 mg/L;适宜的生根培养基为1/2 MS+IAA 0.5 mg/L+ABT 0.2 mg/L。[结论]研究结果为贯叶金丝桃的种质保存和良种选育工作奠定了基础。     

贯叶连翘愈伤组织和不定根培养的研究

为探索贯叶连翘愈伤组织和不定根反应器大量扩繁的最佳条件,以贯叶连翘种子为材料,对愈伤组织的诱导和增殖条件进行优化,并对不同培养条件下愈伤组织和不定根增殖生长情况进行调查。结果表明,愈伤组织在附加吲哚丁酸(IBA)4mg/L,激动素(KT)0.02mg/L和蔗糖30g/L的MS培养基中增殖效果佳。无论是愈伤组织还是不定根的增殖,反应器培养效果好于固体培养和振荡培养。在生物反应器内培养不定根的过程中,研究了培养基中pH值对不定根增殖生长和不定根中金丝桃素含量的影响,结果pH值为4.8～7.8时不定根生长不受pH值的影响,但金丝桃素的含量在pH值为4.8和5.8处理中显著高于pH值为6.8和7.8的处理,金丝桃素生产量也在pH值为4.8和5.8处理中较高(7.09和6.77mg/L)。说明利用反应器进行愈伤组织和不定根培养是短期内获得有效物质的有效方法之一。     

贯叶连翘的离体培养与四倍体诱导

以贯叶连翘种子发芽后的无菌苗为外植体,进行了贯叶连翘的组织培养与四倍体诱导研究。结果表明,贯叶连翘的子叶和下胚轴具有较高的愈伤组织诱导率,在2,4-D 1.0 mg/L或NAA 0.5 mg/L配合6-BA0.5 mg/L使用,并添加500 mg/L CH时能提高愈伤组织诱导率,并提高愈伤的质量;分化培养基中添加6-BA0.5~1.0 mg/L和NAA0.05~0.1 mg/L的效果最好;培养基中添加0.5 mg/L 6-BA与500~800 mg/L CH能使丛生苗快速增殖,并生长粗壮,叶色浓绿;采用0.3%秋水仙碱溶液浸泡茎尖24 h,效果最佳,存活率28%,四倍体诱导率为6%。     

攀枝花地区麻疯树天然群体表型多样性研究

为揭示攀枝花地区麻疯树现有天然群体的表型变异程度和变异规律,采用巢式方差分析、相关分析、聚类分析等方法,对该地区麻疯树天然分布区具有代表性的5个群体、云南元谋的1个群体种子及叶片性状进行比较分析．结果表明：该地区麻疯树表型性状在群体间和群体内存在丰富的遗传变异;群体间表型分化系数的变幅为22．00％-72．63％,均值为42．01％,群体间变异（42．01％）小于群体内变异（57．99％）;米易和鳃鱼群体的平均变异系数较大,分别为12．81％和12．70％,而拉蚱和同德群体的平均变异系数较小,分别为10．50％和10．36％;鲢鱼和米易群体的重复力分别为0．27和0．29,均低于平均值0．35;利用群体间欧氏距离进行UPGMA聚类分析,把攀枝花地区麻疯树天然群体分为5类,只有鳃鱼和米易群体聚合为一类,其余群体均单独聚为一类．     

陕西栓皮栎天然群体同工酶遗传多样性研究

利用凝胶电泳法研究了陕西省境内3个栓皮栎天然群体的遗传变异和分化情况,测定和分析过氧化物酶（POD）,酯酶（EST）,苹果酸脱氢酶（MDH）和乙醇脱氢酶（ADH）的多态位点百分率、等位基因平均数、等位基因频率、平均期望杂合度和基因分化系数,结果表明：陕西栓皮栎天然群体的遗传变异绝大部分在群体内,占总变异的95．1％,群体间变异仅占总变异的4．9％,多态位点百分率为75％,等位基因平均数为2．708,平均期望杂合度为0．388．