酶联免疫吸附试验(ELISA)方案

A.试剂1、饱和硫酸铵溶液煮沸溶解足够的(NH_4)_2SO_4,最少764克/升水放凉到室温。2、磷酸盐缓冲盐水(PBS),pH7.4。8.0克 NaCl0.2克 KH_2PO_42.9克 Na_2HPO_4.12H_2O0.2克 KCl0.2克 NaN_3将各种成分溶解在800毫升蒸馏水中,加到1,000毫升,核对 pH。3、吐温 PBS 液加1.0毫升吐温20到1,000毫升 PBS 液中,     

酶联免疫吸附技术—Ⅰ酶联免疫吸附法(ELISA)实验技术

从植物检疫的任务着眼,为了防止传染性病害的传入和散布,早期准确诊断是十分重要的。由于这个原因,高度敏感和特异性强的血清学诊断方法已经得到广泛的应用。随着免疫学理论的进展,血清学实验技术也有很大发展,主要表现在抗原、抗体纯化,操作技术的微量化、自动化、标准化,以及荧光素、同位素、特别是酶标记抗体球     

酶联免疫吸附测定(ELISA)检测苏云金杆菌伴孢晶体蛋白质研究

用酶联免疫吸附测定(ELISA)检测Bt伴孢晶体毒素蛋白质,最低可检值7.79ng/0.15ml,灵敏、精确,具高度专化性。测定标准品HI—1—S—1980和Bt乳剂产品中伴孢晶体蛋白质含量,分别为108.06mg/g粉剂和4.57—6.17mg/ml乳剂。用标准品与待测样品(Bt乳剂)的晶体蛋白质含量,就可计算出待测样品的相对毒力效价。ELISA与昆虫生测之间有良好的相关性。     

大豆花叶病毒单克隆抗体(SMV-McAb)的研究

 用大豆花叶病毒免疫的BALB/c小鼠脾细胞与Sq2/0鼠骨髓瘤细胞融合,获得3株分泌抗大豆花叶病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株,S-1、S-2和S-3。它们的鼠腹水滴度高达1:10⁷,能被大豆花叶病毒兔抗血清所阻断。单克隆抗体与其它三种植物病毒不起反应,对大豆花叶病毒的不同株系有特异性差异。     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测花生种子带毒的研究

 利用花生上分离到的花生轻斑驳病毒(PMMV),黄瓜花叶病毒CA株系(CMV-CA),花生矮化病毒Mi株系(PSV-Mi)所制备的抗血清,从中提取IgG、应用ELISA间接法检测花生种子,在花生种子中不程度地都检测出带有PMMV、CMV、PSV病毒,而且有复合带毒现象。经催芽的花生种子子叶、胚芽及胚根分别用PMMV和CMV免疫制备的抗体进行检测,花生的上述三部分均带有PMMV和CMV病毒,且胚芽中病毒量最高。萌发种子及未萌发种子的子叶无论从带毒率还是病毒含量上均看不出明显的差异。ELISA间接法由于直接利用商品酶标抗体,简化了试验程序,利于对种子带毒进行快速检测。     

酶联免疫吸附技术——Ⅱ酶联免疫吸附法(ELISA)实验中的几个问题

一、酶联免疫吸附法(ELISA)的实验材料及其影响因素 ELISA试验的理论比较简单,但是要成功地应用于常规诊断,需要做很多预试工作,以确定最适当的条件。ELISA的基本操作原则是:固相吸附(抗体或抗原)→洗     

电化学酶联免疫分析检测烟草花叶病毒和烟草环斑病毒

以邻苯二胺 (OPD)底物为例 ,用抗原直接包被法 (DAC -ELISA)同线性扫描极谱法 (LSV)相结合 ,检测烟草花叶病毒 (TMV)的提纯液 ,检出限可达 0 2 5ng/ml,TMV粗提液的最高稀释比为 1 :1 0 2 4 0 0 ;检测烟草环斑病毒 (TRSV)提纯液 ,检出限为 1 0ng/ml,粗提液的最高稀释比为 1 :1 0 0 0 0 ,该方法的灵敏度比DAC -ELISA光度法提高了 5倍以上     

酶联免疫吸附反应(ELISA)在烟草病毒病检测中的应用

本文综述了酶联免疫吸附分析法(ELISA)在烟草病毒检测中的应用。对EIISA的基本类型,改进和提高灵敏度的方法进行了分析,并阐述了该技术的某些发展趋势。     

南方菜豆花叶病毒酶联试剂盒的测评

南方菜豆花叶病毒酶联检测试剂盒,采用直接双抗体夹心法。主要由已包被特异性的酶联板、碱性／磷酸酯酶标记的抗体、对硝基苯磷酸盐底物以及浓缩清洗液等几部分组成。该试剂盒的检测灵敏度可达８ｎｇ／ｍｌ提纯病毒。检测大豆病叶可达１：１０００。检测大豆病种子可达１：１００,与黄瓜花叶病毒,马铃薯Ｙ病毒,烟草环斑病毒,烟草花叶病毒呈阴性反应,同时选用大柬告示５和阴性对组,ＯＤ值读数均较低,背景反应好,未出现假阳性     

酶联免疫吸附法(ELISA)检测豆类种传病毒的研究

本文介绍使用微量板酶联免疫吸附法(ELISA)检测TMV(杆状)、SMV(线状)、CMV(球状)、AMV(杆菌状多粒体)四种不同形态、不同分类组群的病毒。此法非常灵敏,能够检测病毒提纯液的最低浓度为7.6～10亳微克/毫升,也能检出稀释1563～10240倍病叶粗澄清液中的病毒,灵敏度比琼脂双扩散法高1000倍以上。 ELISA可以直接检出单粒种子中的病毒,而且可以分别检出单粒种子不同部位如大豆的种皮、种胚、胚乳及胚根中的病毒存在。该法适用于检测大量标样,对植物检疫来说,这是一个很好的方法。     

梨中AVERMECTIN B1残留的酶联免疫吸附测定

本文建立了检测梨中Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１的间接竞争酶联免疫吸附测定法（ＥＬＩＳＡ）。以结合物４″－Ｏ－（单）琥珀酰Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１－ＢＳＡ免疫家兔，制备特异性针对Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１的多克隆抗体。梨样本经甲醇提取后用ＥＬＩＳＡ检测。在６．０￣６０ｍｇ／ｋｇ添加浓度范围内，Ａｖｅｒｍｅｃｔｉｎ Ｂ１的回收率为８６％￣１０５％，变异系数（ＣＶ）为４％￣８％。样本检测限为０．１ｍｇ／     

应用Dot-ELISA检测马铃薯卷叶病毒

 以硝酸纤维素膜(NCM)为固相载体,应用间接ELISA法对纯化的马铃薯卷叶病毒(PLRV)、感染PLRV的马铃薯植株的茎、叶、休眠块茎顶端、脐部、块茎打破休眠后萌发的芽,以及饲毒后的桃蚜体内的PLRV分别进行了测定。结果表明检测纯病毒的灵敏度为45.83pg~4.583pg,测定茎、叶、休眠块茎顶端、脐部、芽的稀释度分别可达到1/2048、1/512、1/2048~1/8192、1/512~1/2048和1/2048~1/8192,和常规DAS-ELISA相比,检测的灵敏度提高至少8倍。应用Dot-ELISA至少可检测1/2头带毒蚜虫体内的PLRV。     

应用A蛋白免疫电镜技术快速检测病株中大麦黄花叶病毒

 用A蛋白免疫电镜技术,检测大麦病汁液中的大麦黄花叶病毒(BaYMV),其捕获抗血清的适宜工作浓度范围很宽,320-20,480倍均能达到满意的结果;抗原孵育条件以室温(约25℃)下30分钟或冰箱(约4℃)中3小时,捕获到的病毒粒子数量较多。应用这项技术,在稀释3,125倍的病汁液中还能检测到BaYMV粒子,比普通免疫电镜方法的灵敏度至少高5倍。BaYMV在病株中的分布以症状明显的花叶中含量最高,黄化叶中较少,茎和根中找不到病毒。利用该技术可以快速而灵敏地进行大麦品种抗病性的鉴定与筛选。本文最后还讨论了BaYMV的稳定性。     

大豆花叶病毒的株系鉴定

作者用江苏省大豆重花叶(S_A)、轻花叶(S_B)、黄斑坏死(S_C)、顶枯(S_E)以及黑龙江的黄斑花叶(S_D)和顶枯(S_F)的分离物,在菜豆品种“Top Crop”的离体叶鉴定都产生局部枯斑。6个分离物都可以由几种蚜虫(桃蚜、萝卜蚜、苜蓿蚜)传毒,温度钝化点在50～55℃或55～60℃之间,稀释限点为10~(-2)或10~(-3),体外存活期(室温在25℃以上)为24～36小时,电镜下粒体形态都是线条形,它们的寄主范围都很窄,只侵染豆科植物中的少数几个种。这6个分离物都属于大豆花叶病毒。但是它们的寄主范围和在大豆品种上的反应有所不同、S_A和S_B对扁豆的侵染力很强,S_D和S_F不侵染扁豆,S_C和S_E侵染力居中,S_A和S_B在菜豆品种家雀蛋上发生系统花叶,其余四个分离物只在接种叶上出现黄斑和叶脉坏死。温室内测定了37个大豆品种或品系对6个分离物的反应,没有对6个分离物都免疫的品种,6个分离物在1138—2、493—1等9个品种都出现系统花叶,在合丰23、南农133—3、齐黄1号、徐豆1号和科系8号上,6个分离物的反应有稳定的明显的差异。根据6个分离物在大豆品种、扁豆和菜豆(家雀蛋)上的症状反应,认为6个分离物是大豆花叶病毒的6个不同株系,S_A和S_B的性状相似。室内测定同一个株系在不同品种上反应的症状不同,例如南京重型花叶S_A,轻花叶S_B在许多品种上出现系统花叶但在齐黄1号和徐豆1号上形成系统枯斑。黑龙江的顶枯S_F只在合丰23等少数品种上出现顶枯症状,多数品种是系统花叶。因此,症状类型不能代表株系的特征、而是株系与品种组合之间的特异性反应。我们认为用症状的表现来作为株系的名称是不一定确切的。     

利用DAS-ELISA进行番茄花叶病毒的田间检测

 从制备的番茄花叶病毒(ToMV-S1)抗血清中提纯IgG,并用过碘酸钠法进行辣根过氧化物酶(HRP)标记,建立了检测ToMV的DAS-ELISA系统。利用此检测系统并结合生物学方法,对浙江及山西等地的田间病样进行测定,结果发现茄子、番茄等茄科作物中均有ToMV的侵染,其中茄子中有50%左右的发生率,番茄中ToMV发生率南北差异较大,在浙江发生率仅为10%左右,而在山西有60.7%的发生率,辣椒中未测到ToMV。这是在我国首次进行ToMV的田间发生情况检测。     

接种大豆花叶病毒条件下大豆上位叶离体培养物的生长与形态发生

 本研究从接种大豆花叶病毒(SMV)江苏株系Sa、Sg的大豆植株上取上位叶为外植体,研究不同株系对愈伤组织产生及芽与根分化的影响。结果发现,愈伤组织的诱导率及其形态特点在接种与未接种间无明显差异;接种Sa的其芽分化率低于未接种的,但接种Sg的其芽分化率反略高于未接种Sg的;接种Sa、Sg后,根的发生能力减弱,但对抗病品种的影响小于感病品种。     

RT—PCR检测南方菜豆花叶病毒

根据南方菜豆花叶病毒（ＳＢＭＶ）两株系Ｂ和Ｃ的核酸序列设计两对引物，利用ＲＴ－ＰＣＲ可以特异地区分纯化的和０．２ｇ病叶中的两株系，ＲＴ－ＰＣＲ检测ＳＢＭＶ－Ｂ的灵敏度为１０ｐｇ。