浙江地区传染性法氏囊病毒变异株分离及鉴定

７株鸡传染性法氏囊病的法氏囊组织直接在鸡胚成纤维细胞盲传２－１５代后,均能不同程度产生细胞病变效应,并通过病毒血清中和试验,动物回归试验,电镜观察,琼脂免疫扩散试验,理化特性测定等试验证实七株病原为传染性法氏囊病病毒。在此基础上将７个浙江地芡的ＩＢＤＶ野毒株,１个四川地区的ＩＢＤＶ野毒株和２个疫苗毒株经病毒－血清交叉中和试验获得了抗原性不同的五个亚型毒株或变异株。     

河南省鸡传染性法氏囊病病毒株的分离及其某些生物学特性

应用鸡胚培养、电镜观察、血清学试验及病理组织学检查,分离与鉴定了来自河南省鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）免疫鸡群Ｈｅ１、Ｈｅ２、和Ｈｅ３三株ＩＢＤＶ毒株。鸡胚传代试验表明,Ｈｅ１和Ｈｅ２株连续传代到第４代出现规律性死亡和ＩＢＤ病变,而Ｈｅ３株在第１代时鸡胚即全部死亡,且出现ＩＢＤ典型鸡胚病变。Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株对易感鸡致病力有一定的差异。病死率分别为２０％、１０％和４０％,多数为弱毒株。免疫保护试验证明,用常规的ＩＢＤＶ血清Ｉ型病毒株Ｂ２疫苗对Ｈｅ１、Ｈｅ２和Ｈｅ３毒株的免疫保护试验,与对照组相比保护率分别为０％、０％和１０％。未死亡扑杀的免疫试验鸡法氏囊有不同程度的病理组织学病变,表明Ｉ型毒株疫苗对ＩＢＤ基本上无免疫保护作用。所分离的毒株可能是ＩＢＤＶ的变异株。     

BWEL-SPF鸡群对鸡传染性法氏囊病强毒的敏感性试验

用三种不同鸡传染性法氏囊病强毒株,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡群１－１０个家系３周龄鸡进行敏感性试验,观察比较鸡群各家系对不同敏感性,测定不同毒株的毒价。广西强毒株（ＩＢＤＶ－ＧＸ株）〈ＬＤ５０为１０＾５．０／０．２ｍｌ;湖南强毒株,ＬＤ５０为１０＾５．２／０．２ｍｌ;吉林强毒株（ＩＢＤＶ－ＪＬ株）,ＬＤ５０为１０＾５．５／０．２ｍｍｌ,以１００ＬＤ５０攻毒剂量,对ＢＷＥＬ－ＳＰＦ鸡１￣１０家系的致死率为     

鸡传染性法氏囊病病毒野毒株VP2基因高可变区酶切位点分析

参照澳大利亚鸡传染性法氏囊病病毒（ Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ）００２７３ 毒株基因组序列设计的 １ 对引物,位于 Ｖ Ｐ２ 高可变区两端,通过 Ｒ Ｔ Ｐ Ｃ Ｒ,扩增了 ５ 个 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 山东分离株 Ｖ Ｐ２ 基因的 ６０７～１ ０８０ 位核苷酸片段（ａａ２０３～３０６）。 Ｐ Ｃ Ｒ 产物经纯化后,分别用 Ｄｒａ Ⅰ、 Ｓａｃ Ⅰ、 Ｓｓｐ Ⅰ、 Ｐｓｔ Ⅰ和 Ｓａｕ３ Ａ Ｉ共 ５ 种限制性内切酶（ Ｒ Ｅ）进行消化处理,结果 ５ 个分离株均为 Ｄｒａ Ⅰ（－ ）、 Ｓａｃ Ⅰ（－ ）和 Ｓａｕ ３ Ａ Ｉ（＋ ）, Ｌ Ｃ２ 和 Ｔ Ａ 株为 Ｓｓｐ Ⅰ（＋ ）, Ｌ Ｃ１ 和 Ｊ Ｎ 株为 Ｓｓｐ Ⅰ（－ ）, Ｌ Ｃ１ 和 Ｌ Ｃ２ 株为 Ｐｓｔ Ⅰ（＋ ）, Ｊ Ｎ、 Ｌ Ｌ 和 Ｔ Ａ 株为 Ｐｓｔ Ⅰ（－ ）;５ 个分离株的酶切图谱与美国变异株迥异,而 Ｔ Ａ 株与日本超强毒株 ９０１１ 相类似。５ 个分离株与现用疫苗株对比,至少在 Ｖ Ｐ２ 可变区内存在着一定的差异,这可能是 Ｉ Ｂ Ｄ Ｖ 接种免疫鸡群仍然暴发 Ｉ Ｂ Ｄ 的原因之一。     

应用鸡胚法氏囊原代细胞培养鸡IBDV的研究

试用鸡胚法氏囊奈代细胞传代，增殖鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），均不同程度地产生特征性细胞病变效应，采用双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ和细胞毒回归鸡试验证实，ＩＢＤＶＨ株组织感毒适应于鸡胚法氏囊细胞，并随传代次数增加，病毒增殖能力增强，而在鸡胚成纤维细胞上盲传２代之后才开始出现细胞病变效应，比较了ＩＢＤＶ在鸡胚法氏囊细胞和鸡胚成纤维细胞上增殖能力的差异，讨论了培养基ＰＨ值，小牛血清浓度对鸡胚法氏囊细胞培     

应用鸡胚法氏囊原代细胞培养鸡IBDV的研究

试用鸡胚法氏囊原代细胞传代、增殖鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ），均不同程度地产生特征性细胞病变效应。采用双抗体夹心法ＥＬＩＳＡ和细胞毒回归鸡试验证实，ＩＢＤ－ＶＨ株组织毒适应于鸡胚法氏囊细胞，并随传代次数增加，病毒增殖能力增强；而在鸡胚成纤维细胞上盲传２代之后才开始出现细胞病变效应。比较了ＩＢＤＶ在鸡胚法氏囊细胞和鸡胚成纤维细胞上增殖能力的差异，讨论了培养基ＰＨ值、小牛血清浓度对鸡胚法氏囊细胞培养及病毒增殖的影响。     

鸡传染性法氏囊病病毒山东地方野毒株的分离与鉴定

从山东省多个地区患传染性法氏囊病的鸡群中,分离到５个野毒株,经过琼脂双向双扩散试验、ＥＬＩＳＡ试验、血凝试验、病毒感染力测定、回归试验、电镜观察等６项鉴定,证明是鸡传染性法氏囊病病毒。并且,各毒株毒力差异较大,有的毒株感染力相当强,ＥＬＤ５０／０．２ｍＬ＝１０６．００。     

传染性法氏囊病RT-PCR诊断方法研究

本文在研究传染性法氏囊病病毒的Ａ片断ｃＤＮＡ结构的基础上,用Ｐｒｉｍｅｒ　 Ｄｅｓｉｇｎ引物设计软件,在ＶＰ_５和ＶＰ_２的重叠基因区设计了一对引物,使用该引物对６种ＩＢＤＶ的标准毒株,１０例自然发病病鸡组织标本,８例ＩＢＤＶ Ｊ_１Ｃ_７Ｆ_３种毒株攻毒病理法氏囊组织标本,进行了ＲＴ－ＰＣＲ检测均得到了阳性的扩增结果。２种参考鸡病病毒和８例健康鸡的法氏囊组织在同样条件下进行扩增均为阴性结果。本法具有扩增方法简单,对各种病毒株的适应性广,特异性高,检测成本较低的特点。     

鸡传染性法氏囊病野毒株的分离鉴定及河北弱毒株培育的研究

从河北省６个地区鸡传染性法氏囊病（ＩＢＤ）的鸡群中，分离到６株强毒，均能使易感鸡３６小时发病并死亡，发病率达６０～１００％，死亡率１０～７０％。人工感染鸡能见到与野外病例相同的病变。经血清学试验、鸡胚接种、电镜观察均证明，分离物为传染性法氏囊病毒（ＩＢＤＶ），其中有的毒株，毒力非常强。利用其中毒力最强的１株病毒，经鸡胚多次传代培养育成１株免疫原性好，免疫期长，免疫效果容易监测的弱毒株，经野外试验证明，该毒株是防治ＩＢＤ的一个很理想的毒株。     

表达传染性法氏囊病病毒VP2基因的重组鸡痘病毒的构建及其免？…

以脂质体转染技术构建了表达鸡传染性法氏囊病病毒（ＩＢＤＶ）ＶＰ２基因的重组鸡痘病毒ＦＰＶ－ＶＰ２,该病毒性在鸡胚成纤维细胞及鸡体内均能稳定产生子代病毒,经翅皮下５×１０＾５ＰＦＵ／羽免疫１日龄ＳＰＦ鸡,免疫后４周以１００ＬＤ５０／羽ＩＢＤＶ超强毒株Ｇ株攻毒,获得了５／６的保护,但不能有效预防临床发病及法氏囊受损萎缩,实验结果证明了ＶＰ２是ＩＢＤＶ的宿主保护性抗原,提示Ｔ细胞介导的免疫可能在ＩＢＤＶ     

Newcastle disease vaccination: A comparison of vaccines and routes of administration in Pakistan

Twelve-day-old chickens were vaccinated once with different Newcastle disease (ND) vaccines ( F, La Sota and Mukteswar) by two different routes (intraocular and drinking water). Chickens from a seventh group were uninoculated controls. At weekly intervals for 7 weeks after vaccination, 20 chickens from each vaccinated group and 20 chickens from the control group were examined for the production of haemagglutination-inhibition (HI) antibodies and for protection as assessed after challenge with velogenic, viscerotropic ND virus.

La Sota ND vaccine used intraocularly ranked the best and Mukteswar vaccine by the drinking water route the worst for their HI antibody titres prior to challenge. Differences between the treatments in protection were examined. For all three vaccines intraocular vaccine produced higher protection than drinking water vaccine. An inverse relationship between prechallenge and postchallenge HI titres was also recorded.     

山羊痘病毒疫苗株与野毒株PCR-RFLP鉴别方法的建立及应用

为了建立区分疫苗株与广西分离株的检测方法,根据GenBank上的山羊痘病毒序列设计1对引物,用来扩增山羊痘病毒P32基因,通过对国内疫苗株及6株广西分离株的P32基因进行克隆、测序比较发现,所有广西分离株核苷酸651位的碱基全部由T变为C,647位~652位核苷酸构成由TGTATA变异为TGTACA,多了1个限制性内切酶Bsp1407Ⅰ位点,因此用特异性引物扩增出739 bp的目的片段后,再用限制性内切酶Bsp1407Ⅰ进行酶切分析,疫苗株可以切成135 bp和604 bp 3个片段,广西分离株可以切成135、226、378 bp 3个片段。结果表明,所建立的PCR-RFLP方法可以区分疫苗株和广西分离株。     

鸡新城疫流行毒株与标准毒株的交叉免疫保护试验

用新城疫(ND)分离强毒油佐剂灭活苗和NDV La Sota油佐剂灭活苗分别免疫母源抗体平均为2 log2的12日龄公雏。免疫后每隔1周采集血清，用微量血凝抑制试验检测HI抗体。免疫后21 d抗体水平达到峰值，抗体水平在6log2以上，维持30 d以上。免疫40 d后，用ND分离强毒株和NDVF48E9分别进行攻毒试验，2种疫苗的保护率均为100％，攻毒结果表明，ND分离强毒株和NDVF48E9株的免疫原性差异不显著。     

新城疫CHR株与La Sota株2种疫苗近期免疫效力比较试验

鸡新城疫CHR 株冻干疫苗中试产品3 批以及La Sota 株冻干疫苗( 符合质量要求) , 以5 种免疫途径: 肌注、滴鼻、喷雾、饮水、拌料分别接种11 日龄雏鸡。每批疫苗每种途径接种1 组, 20 只/ 组, 共20 组。雏鸡群免疫前血凝抑制抗体(HI) 效价为1∶2-13 , 于14 d 、28 d 后再测HI抗体水平, 并分别用10 000 鸡胚半数致死量(ELD50) 新城疫标准强毒北京株攻击。从而检测2 种疫苗用5 种免疫途径免疫后在不同时间的近期免疫效力。结果表明, 近期内CHR 株疫苗HI抗体呈上升趋势, 而La Sota 株疫苗HI抗体先升高后下降; CHR 株疫苗以饮水和拌料途径效果较好, 其它3 种途径效果相似。接种后14 d 攻毒, 2 种疫苗均能较好保护强毒攻击; 28 d 后, CHR 株保护率高于La Sota 株。     

猪流行性腹泻病毒疫苗株与野毒株RT-PCR检测方法的建立与应用

根据GenBank中猪流行性腹泻(PED)疫苗株与野毒株ORF3的特点设计特异性引物,建立能够快速区分PEDV疫苗株与野毒株的RT-PCR检测方法。建立的RT-PCR检测方法能够对PEDV疫苗株与野毒株扩增出特异性片段,其大小分别为278 bp和327 bp。该方法具有快速、特异、通用等特点,可用于实验室快速诊断、野毒株的区分,为该病的诊断及免疫防控提供参考依据。     

基于US区缺失位点猪伪狂犬病病毒疫苗株与野毒株鉴别诊断方法的建立

依据GenBank中公布的猪伪狂犬病病毒全基因组序列,针对gI、gE、28K、TK四个基因序列,设计、合成了5条引物,并对野毒株SA株、gI-/gE-/PRVSA双基因缺失株和Bartha K61疫苗株进行了扩增,得到2061bp、1323bp、801bp和963bp特异性目的条带,其中BarthaK61疫苗株基因组检测最小浓度为136pg/μL。建立了针对野毒株和两种疫苗株的鉴别诊断方法。     

桑树根际固氮细菌的分离鉴定及固氮酶活力测定

利用固氮细菌可降低桑园化肥使用量和提高桑叶产量与品质。采用选择性培养基,从桑树根际分离获得24个具有固氮能力的细菌分离株,以rep-PCR基因指纹分析聚类为18个聚类群。经固氮酶活性测定,PA19、PA2和PK1菌株具有较强的固氮酶活性。利用菌落形态特征观察及16S rDNA碱基序列测定和同源性分析,对3株细菌进行鉴定的结果是:PA19菌株为中慢生根瘤菌属(Mesorhizobium sp.),PA2菌株为假单胞菌属(Pseudomonas sp.),PK1菌株为土壤杆菌属(Agrobacterium sp.)。     

Blocking ELISA's for the distinction between antibodies against European and American strains of porcine reproductive and respiratory syndrome virus

A double blocking ELISA was developed in order to satisfy the need for large scale serological screening for PRRS and simultaneous distinction between infection with European and American strains of PRRSV in pig herds. The Immunoperoxidase monolayer assay (IPMA) and the double blocking ELISA enabled distinction on serological basis between infection with European and American strains of PRRSV. The distinction was possible from about day 7 after infection of pigs with PRRSV. The double blocking ELISA enabled the distinction at later stages of infection compared to the IPMA, irrespective of the strain involved.     

鸡传染性法氏囊病病毒SD株毒力测定

从一个免疫失败鸡场中分离到一株鸡传染性法氏囊病病毒野毒株,命名为SD株.经血清学试验、鸡胚接种、病毒形态观察等证实了分离物为鸡传染性法氏囊病病毒(IBDV).测定病毒效价ELD50达到10-6.5/0.2 mL;动物回归试验表明,该SD株接种4周龄鸡后引起鸡群发病率为100%,病死率达85%,剖检可见法氏囊呈"紫葡萄样...