影响绒山羊母羔卵母细胞体外成熟因素的研究

研究了母羔超排方法、成熟培养时间及成熟液添加EGF对绒山羊母羔卵母细胞体外成熟的影响。结果表明,直径〉130μm组PbI率（73．27％）显著高于直径120～130μm组（P〈0．05）,直径〈120μm组PbI率（32．22％）极显著低于其他组（P〈0．01）;卵母细胞成熟培养24～27h组PbI率（68．06％）显著高于21～24h组（P〈0．05）,27～30h组PhI率（73．47％）高于24～27h组,但差异不显著（P〉0．05）;10ng／mL组和20ng／mLEGF组PhI率极显著高于对照组（P〈0．01）,20ng／mLEGF组pbI率（71．43％）显著高于10ng／mL（P〈0．05）。     

EGF和IGF-I对绵羊卵母细胞体外成熟和卵裂的影响

本文研究了EGF、IGF-I以及EGF和IGF-I联合对绵羊卵母细胞体外成熟和卵裂的影响,以确立绵羊卵母细胞体外成熟的最佳条件。结果表明：50ng／mL的EGF的成熟率和卵裂率分别为71．2％和45．5％,显著高于对照组和10、20、30、40ng／mL组（P〈0．05）,当EGF浓度达到100ng／mL时,成熟率和卵裂率最高,分别为72．9％和45．7％;40ng／mL IGF-1的成熟率和卵裂率分别为70．7％和58．5％,显著高于对照组和10、20、60、80、100ng／mL组（P〈0．05）,当IGF-I的浓度为100ng／mL时,成熟率和卵裂率最低,分别为38．8％和20．0％,与对照组和其它各试验组差异显著（P〈0．05）;50ng／mLEGF和40ng／mLIGF-I联合使用,成熟率和卵裂率分别为85．6％和61．0％,同对照组和50ng／mLEGF组、40ng／mLIGF-I组之间差异显著（P〈0．05）。     

绒山羊卵母细胞体外成熟培养试验

<正>绒山羊母羔卵母细胞在体外成熟过程中,成熟培养液中添加12mg/ml的进口牛血清白蛋白(BSA)可以替代血清培养液,即含10%胎牛血清(FBS)的培养液,并不影响卵母细胞最终成熟。绒山羊母羔卵母细胞体外成熟后的核成熟率可达到55%左右,但其胞质成熟的质量与成年羊的卵母细胞相比有较大差距。     

不同培养液对牛卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎发育的影响

为研究表皮生长因子(EGF)、β-巯基乙醇(β-ME)、亚硫磺酸(HTAU)对牛卵母细胞体外成熟(IVM)及孤雌激活胚胎体外发育(IVC)效果的影响,实验采集牛卵巢采用切割法收集卵丘-卵母细胞复合体(COCs)随机处于不同浓度EGF、β-ME培养液成熟培养24 h后孤雌激活,研究其在不同胚胎培养液中的后续发育,以期筛选出最好的牛卵母细胞IVM-IVC条件。结果表明:添加25、50、100 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率均高于对照组,其中50 ng/mL EGF组的成熟率、卵裂率与对照组差异显著(P<0.05);50、100、500μmol/L的β-ME对牛卵母细胞体外成熟没有促进作用;50 ng/mL EGF与50、100μmol/Lβ-ME组合并无协同作用;胚胎培养基中添加不同浓度EGF对早期胚胎的体外发育无显著影响;而添加100μmol/Lβ-ME组的囊胚率、囊胚细胞数均极显著高于对照组(P<0.01);在成熟液中添加50 ng/mL EGF和100μmol/Lβ-ME、胚胎培养液中添加0.5 mmol/L HTAU孤雌胚发育最好。     

牛卵母细胞的体外成熟

在卵母细胞体外成熟液（含FSH）中分别添加10、30、50μg/L表皮生长因子（EGF）,24 h检查成熟率。结果表明,添加10、30μg/L EGF组牛卵母细胞成熟率为79.8%、71.5%与对照组（未添加EGF）成熟率（70.4%）无明显差异（P〉0.05）,但EGF添加至50μg/L时牛卵母细胞第一极体（PB1）排出率显著提高,达85.4%（P〈0.01）;在此基础上,比较了成熟液中添加尿促性素（HMG）对牛卵母细胞体外成熟的影响,结果发现在含FSH和EGF的成熟液中添加HMG未能显著提高牛卵母细胞体外成熟效果（P〉0.05）;最后,比较了HMG对牛卵母细胞体外成熟的效果,结果发现单独添加HMG成熟效果显著高于FSH（P〈0.05）,表明成熟液中如不含其他生长因子,则单独添加HMG较FSH对牛卵母细胞体外成熟的效果好。     

不同添加成分对绵羊卵母细胞体外成熟的影响

卵母细胞体外成熟是胚胎工程中的一项基础性研究。试验比较了不同添加成分对绵羊卵母细胞的体外成熟及其后续发育的影响。分析了EGF不同添加量、FSH∶LH的不同配比和不同大小卵泡的卵泡液对绵羊卵母细胞的体外成熟的影响。结果表明,①添加30ng/mLEGF的成熟率显著高于其他试验组（85.0%VS60.0%,71.7%,72.7%,P〈0.05）,并可提高绵羊孤雌激活胚的囊胚发育率;②成熟液中添加FSH1μg/mL,LH5.0IU/mL成熟率最高;③在绵羊卵母细胞成熟液中添加3%绵羊大卵泡液,在成熟率上极显著高于20%小卵泡液的添加组（78.6%VS36.5%,P〈0.01）,显著高于3%小卵泡液的添加组和未添加组（78.6%VS60.0%,67.5%,P〈0.05）。     

Leptin和ITS对牛卵母细胞体外培养和胚胎生产的影响

利用Leptin和ITS促进体外成熟和体外培养的牛卵母细胞的发育和质量,探讨提高胚胎体外生产的质量和数量的方法和技术。试验1：体外受精胚胎的培养液：添加BSA的KSOM中添加10mL/L浓度的ITS,结果使胚胎的桑椹胚率和囊胚率显著（P〈0.05）高于培养液中不加ITS的对照组（桑椹胚率：43.48%vs29.07%,囊胚率：22.83%vs11.63%）,卵裂率、正常分裂率和8细胞率与对照组差异不显著（P〉0.05）。试验2：在卵母细胞的体外成熟液中添加10μg/L具有生物学活性的重组鸡Leptin成熟肽融合蛋白,Leptin处理组和对照组卵母细胞经体外成熟、受精后转入加有10mL/LITS的KSOM培养液进行体外培养。试验组卵裂率和正常分裂率极显著（P〈0.01）高于对照组（88.96%vs66.81%和61.11%vs29.36%）,8细胞率显著（P〈0.05）高于对照组（84.84%vs69.57%）。Leptin处理的卵母细胞在受精后的桑椹胚率和囊胚率与对照组差异不显著,但最后的囊胚数量较对照组增加1倍多,分别为IVF卵母细胞总数的14.8%和6.4%（P〈0.01）。这说明,添加Leptin对牛卵母细胞体外成熟有促进作用,可显著提高卵母细胞受精后早期胚胎的卵裂率、正常分裂率和8细胞率;加入ITS则能提高桑椹胚率和囊胚率;而Leptin和ITS的按顺序结合使用,则能大大增加体外生产胚胎的桑椹胚和囊胚的数量,从而提高胚胎体外生产的效率。     

促卵泡素对奶牛卵母细胞体外成熟的影响

为研究促卵泡素（FSH）在奶牛卵母细胞的成熟过程中的促进作用，在牛卵母细胞成熟液中添加0μg／mL、10μg／mL、25／μg／mL、50μg／mL、100μg／mLFSH统计成熟率。结果表明，添加FSH各组与对照组相比，卵母细胞的成熟率均显著提高。而添加10μg／mL、25μg／mL、100μg／mL组卵母细胞的成熟率之间差异不显著，50μg／mL组卵母细胞的成熟率最高。无论是否添加FSH都不会影响到孤雌激活的卵裂率。说明FSH具有促进奶牛卵母细胞成熟的功能。     

辽宁绒山羊母羔体外胚胎生产技术研究

以辽宁绒山羊母羔为研究对象,通过超排母羔、卵母细胞体外成熟、体外受精、胚胎移植技术等试验研究,建立了绒山羊母羔体外胚胎生产技术体系。结果表明:PMSG+FHS组与FSH+PMSG组超排方法获得的卵母细胞数无显著差异(P0.05),但PMSG+FHS组卵裂率和囊胚率均极显著高于FSH+PMSG组(P0.01)。成熟液添加EGF组PBⅠ率、卵裂率均显著高于对照组(P0.05);20 ng/m L EGF组PBⅠ率显著高于10 ng/m L组(P0.05),卵裂率差异不显著(P0.05)。卵母细胞成熟培养24~27 h组第一极体率与卵裂率均显著高于21~24 h组(P0.05);SOF受精体系卵裂率显著高于TALP(P0.05),囊胚率极显著高于TALP受精系(P0.01)。秋季胚胎移植受体母羊16只,产羔3只。     

几种激素对Beagle犬卵母细胞体外成熟的影响

由于犬独特的生殖生理,其卵母细胞体外成熟率远远低于其它动物。本实验旨在探讨几种激素对犬卵母细胞体外成熟的影响。将采集的犬卵丘-卵母细胞复合体置于添加不同浓度激素成熟培养液中,对照(CK)组不添加激素,A、B、C组分别添加FSH+P4+E2量为:0.5IU/mL+2.5μg/mL+2.5μg/mL、1 IU/mL+5μg/mL+5μg/mL、2 IU/mL+10μg/mL+10μg/mL。通过72 h体外成熟培养后核染色观察成熟率。结果显示,各种组卵母细胞发育至GV、GVBD、MI-MII的比率差异不显著,其中以B组达到MI-MII比率最高(18.63%)。本试验表明,添加此几种浓度激素对犬卵母细胞体成熟培养没有显著促进作用,需继续探讨犬卵母细胞体外成熟培养体系。     

Effects of EGF and IGF-I on in vitro Maturation and Cleavage of Ovine Oocytes

The study investigated the effects of epidermal growth factor(EGF) and insulin-like growth factor 1(IGF-I),alone or together,on the in vitro maturation and cleavage of ovine oocytes,aimed to optimize the in vitro maturation conditions for ovine oocytes.The results showed that the maturation and cleavage rates were 71.2% and 45.5% respectively when the medium was supplemented with 50 ng/mL EGF alone,which was significantly higher than other EGF supplemented groups (0,10,20,30,and 40 ng/mL) (P<0.05).The highest maturation and cleavage rates were 72.9% and 45.7% when the EGF concentration reached 100 ng/mL.The maturation and cleavage rates were 70.7% and 58.5% with 40 ng/mL IGF-I supplemented,which were significantly higher than other treatments (0,10,20,60,80,and 100 ng/mL) (P<0.05).The lowest maturation and cleavage rates were 38.8% and 20.0% when the IGF-I concentration reached 100 ng/mL (P<0.05).When 50 ng/mL EGF and 40 ng/mL IGF-I were used concomitantly,the maturation and cleavage rates were 85.6% and 61.0% respectively,which were significantly higher than the treatments with EGF or IGF-I alone (P<0.05).     

不同浓度雌二醇对猪卵母细胞体外成熟和孤雌激活胚胎的影响

为了探讨雌二醇（17β-estrodiol,E2）对猪卵母细胞体外成熟及孤雌激活后胚胎早期发育的影响,在卵母细胞体外成熟培养基中添加不同浓度雌二醇,研究卵裂率和囊胚率的变化。以未添加雌二醇的基础液为对照组,比较分析各组卵母细胞核成熟效率、孤雌激活后胚胎的卵裂率、囊胚发育率。结果表明,成熟液中添加1μg／mL雌二醇（E2）对猪卵母细胞的体外成熟具有明显的促进作用,而添加100μg／mL雌二醇（E2）对猪卵母细胞体外成熟具有明显的抑制作用。     

水牛卵母细胞在不同培养液中成熟与凋亡的比较研究

为了解卵母细胞体外成熟与凋亡过程,进而提高卵母细胞体外成熟率,本试验研究了在培养液中添加不同浓度的表皮生长因子(EGF)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)对水牛卵母细胞体外成熟和凋亡的影响。结果表明:(1)添加各种浓度的EGF(10,20,30,50,100 ng/mL)均可以提高水牛卵母细胞的成熟率,降低卵母细胞的凋亡率,其中50 ng/mL EGF有显著影响(P<0.05);(2)添加各种浓度的IGF-1(10,30,50,100 ng/mL)均能提高水牛卵母细胞体外成熟率,降低卵母细胞的凋亡率,以30 ng/mL效果明显(P<0.05);(3)添加20 ng/mL EGF+30ng/mL IGF-1组卵母细胞体外成熟率和凋亡率分别高于和低于单独添加IGF-1和EGF组。     

博落回提取物在仔猪生产中的应用效果研究

试验旨在研究博落回提取物（MCE）对病原微生物的抑菌效力、断奶仔猪生产性能,血清免疫应激和抗氧化参数的影响.选用大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌,测定不同浓度MCE的抑菌效力及最小抑菌浓度.选用猪皮肤成纤维细胞进行细胞培养,以10 μg/mL脂多糖（LPS）刺激细胞,建立细胞应激模型,分别加入MCE至终浓度为0（对照组）,50 ng/mL、100 ng/mL、150 ng/mL,阳性对照为加入土霉素至终浓度为50 μg/mL.培养24 h之后,检测免疫球蛋白（IgG）和溶菌酶（LSZ）.动物试验选用60头PIC五元杂交断奶仔猪,随机分成5个处理组,各处理仔猪分别饲喂添加0（对照组）、2.5 mg/kg、5.0 mg/kg、7.5 mg/kg MCE的试验日粮,50 mg/kg土霉素为抗生素对照组.60日龄时测定仔猪血清免疫应激和抗氧化参数.结果表明,MCE对革兰氏阴性菌（大肠杆菌、沙门氏菌）及革兰氏阳性菌（金黄色葡萄球菌）,枯草芽孢杆菌均有抑制作用,除了对沙门氏菌中度敏感外,对其它三种微生物都高度敏感;MCE对大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌的最小抑菌浓度分别为1 280 μg/mL、1 280 μg/mL、2 560μg/mL、2 560 μg/mL.添加5.0 mg/kg MCE可显著提高仔猪的平均日增重和日采食量（P＜0.05）,料重比降低（P＜0.05）.MCE可极显著提高断奶仔猪血清中IgG和LSZ含量（P＜0.01）,极显著降低血清丙二醛（MDA）含量（P＜0.01）,与抗生素组比较,极显著提高血清总超氧化物歧化酶（T-SOD） （P＜0.01）,降低血清MDA含量（P＜0.01）.LPS刺激细胞后,加入不同浓度MCE,极显著提高细胞IgG及LSZ含量（P＜0.01）,极显著高于土霉素组（P＜0.01）.结果提示,MCE替代抗生素应用于仔猪生产是可行的.     

培养时间和表皮生长因子对兔卵母细胞体外成熟的影响

本试验旨在探讨培养时间和表皮生长因子(EGF)对兔卵母细胞体外成熟及受精的影响。分别用切割法和针刺挤压法取经超排后母兔卵巢表面的卵母细胞颗粒细胞复合体(COCs),将COCs分别在不同时间(24、30、36及40h)和在基础培养液中添加不同浓度表皮生长因子(0、50、100ng/mL)进行体外成熟培养并观察其第一极体排出率。结果表明:①针刺挤压法获得COCs数明显高于切割法(P0.05);②体外成熟培养时间30(36)h的第一极体排出率高于24(40)h(P0.05);③添加50和100ng/mLEGF组卵母细胞第一极体排出率明显高于对照组(P0.05)。因此,①兔卵巢卵母细胞的获得方法以针刺挤压法较好;②兔卵母细胞成熟时间以30～36h为宜;③EGF对兔卵母细胞体外成熟有促进作用,在基础培养液中添加100ng/mLEGF为宜。     

表皮生长因子对水牛卵母细胞体外培养核质成熟的影响

为了探讨表皮生长因子（EGF）对水牛卵泡卵母细胞体外培养核质成熟的影响，在以TCM199为基础的成熟液中加入不同浓度的EGF（0、10、25、50、100 ng/ml），体外成熟培养24~26 h，观察第一极体（PB1）的排放；随后进行孤雌激活检测其分裂率、囊胚发育率、囊胚孵化率，并用Hoechst33342染色后计算囊胚的细胞数。结果发现添加EGF各组的卵母细胞第一极体排放率显著提高（P<0.05）；成熟液中添加25 ng/ml EGF时，卵裂率及囊胚发育率（分别为80.0%、44.8%）明显高于对照组（分别为69.3%、31.9%，P<0.05），但对囊胚的细胞数影响不大。EGF不仅促进水牛卵母细胞体外培养的核成熟，而且有利于卵母细胞的胞质成熟，其中EGF的最佳浓度为25 ng/ml。     

卵丘细胞对卵母细胞成熟、受精和胚胎发育的影响试验

将从猪卵巢上获取的卵母细胞根据卵丘细胞层数的多少分为两类,并将这两类卵母细胞进行成熟培养、体外受精和孤雌激活,以验证两类卵母细胞的发育潜能.结果显示,将两类卵母细胞分别进行成熟培养时,优级卵的成熟率高于次级卵（67.42±177;1.52％vs 48.33±177;2.85％）,且差异极显著（P＜0.01）;将成熟的卵母细胞进行孤雌激活后,优级卵的囊胚率高于次级卵（58.00±177;2.88％ vs 41.00±177;6.40％）,且差异极显著（P＜0.01）,但囊胚总细胞教两者无显著差异（P＞0.05）;将成熟的卵母细胞进行体外受精后,优级卵的囊胚率、囊胚总细胞数均高于次级卵（18.00土5.70％ vs 4.25±177;2.31％,41.7±177;3.33 vs 36.2土2.10）,且差异极显著（P＜0.01）;进行受精卵孵育时,未去除卵丘细胞的胚胎卵裂率、囊胚率、囊胚总细胞数均高于去除卵丘细胞的（88.14土7.48％ vs 58.69±177;2.89％,51.2±177;7.33％ vs 11.92±177;2.29％,41.7±177;3.33 vs 36.8±177;3.15）,且差异极显著（P＜0.01）.以上结果说明：卵丘细胞层数较多的卵母细胞成熟率高,且其孤雌和体外受精胚胎的发育潜能也好;卵丘细胞存在时,有助于卵母细胞的受精及以后的胚胎发育.     

卵丘细胞对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响

为探讨表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)的添加浓度及脱卵丘细胞时间对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育的影响.试验通过在体外成熟液中添加不同浓度(0、10、15、20、30、40 ng/mL)的EGF来研究其对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响;在培养开始后的不同时间(18、24、38、44 h)进行脱卵丘细胞处理来研究不同时间脱卵丘处理对培养44 h的卵母细胞成熟率以及孤雌胚胎发育的影响.结果表明,成熟培养基中添加10 ng/mL EGF能显著提高卵母细胞的卵裂率和囊胚率(P <0.05).共培组和独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞成熟率均低于44 h,但差异不显著(P >0.05);共培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率和囊胚率显著高于培养44 h(P <0.05);独培组卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞的卵裂率与44 h无显著差异(P >0.05),但囊胚率显著高于培养44 h后脱卵丘细胞(P <0.05).添加10 ng/mL EGF对猪卵母细胞体外成熟及孤雌胚胎体外发育较好;卵母细胞培养18 h后脱卵丘细胞可提高孤雌胚胎早期发育能力.     

表皮生长因子和胰岛素样生长因子对水牛卵母细胞胞质成熟的影响

以皮层颗粒（CG）单层分布于质膜下做为卵母细胞胞质成熟的标志,利用CG荧光染色法,研究了不同浓度表皮生长因子（EGF）和胰岛素样生长因子（IGF-1）及其组合对水牛卵母细胞胞质成熟的影响。结果发现：（1）添加不同浓度的EGF（10、20、30、50ng／mL）都可以提高胞质的成熟率,但是组间差异不显著（P〉0．05）;皮质颗粒的分布随着EGF浓度的升高逐步由中间分布向皮层分布转变;（2）在成熟液中添加IGF-130ng／mL时效果较好,能显著提高卵母细胞胞质的成熟率;皮质颗粒的分布随着IGF-1浓度的升高逐步由中间分布向皮层分布转变,在添加IGF一130ng／mL时,在皮层分布最好,随着IGF-1量的进一步增加,皮质颗粒又向中间分布转变;（3）添加20ng／mL EGF＋30ng／mL IGF-1组卵母细胞体外成熟率高于添加30ng／mL的IGF-1组,显著高于添加20ng／m LEGF组和对照组（P〈0.05）。由此表明,EGF和IGF-1对水牛卵母细胞体外成熟有协同作用。     

Influence of cysteine in conjunction with growth factors on the development of in vitro-produced bovine embryos

Cysteine supplementation to in vitro maturation (IVM) media of bovine oocytes increases cellular glutathione production. Beneficial effects of growth factors for improving the rate of blastocyst development have been reported, but combined effects are unknown. This study was conducted to determine the additive effect of cysteine with epidermal growth factor (EGF) and/or insulin-like growth factor-I (IGF-I) on embryo development. Bovine oocytes from slaughterhouse ovaries were matured in TCM-199 (control), with or without the addition of 0.6 mm cysteine (C) at 0 or 12 h of maturation. After in vitro fertilization, embryos were allocated to culture treatments containing synthetic oviductal fluid medium. Culture treatments included fetal calf serum (FCS, 4%) alone; IGF-I (100 ng/ml); EGF (10 ng/ml); and IGF-I + EGF (100 + 10 ng/ml). Although rates for blastocysts development were not different among treatments, an increased proportion of embryos attaining morula formation was achieved when cysteine was added to the maturation media (12 h C IGF-I + EGF, 41.4%; 0 h C EGF, 40.0%) as compared to control (FCS: 34.6%). When cysteine treatments were combined, percent cleavage was greater for IGF-I + EGF (70.8%) compared to FCS (61.2%). The abundance of mRNA from the apoptotic genes, Bax and Bcl-2, and the oxidative stress genes, copper (Cu)-zinc (Zn) superoxide dismutase (SOD) and manganese (Mn) SOD in embryos was assessed. No treatment effect was observed on the expression of these genes. In conclusion, supplementation of cysteine during IVM of oocytes, in conjunction with growth factors could effectively be used as a replacement for FCS.