甘肃金昌西门塔尔牛MSTN基因外显子多态性研究

[目的]为分析金昌地区西门塔尔牛 MSTN 基因三个外显子的遗传多态性及变异特征。[方法]采用 PCR-SSCP 方法检测了61头西门塔尔牛 MSTN 基因三个外显子的多态性。[结果]显示：金昌西门塔尔牛 MSTN 基因的第1外显子存在 A、B 两个等位基因以及AA、AB 两种基因型,其基因型频率分别为0.7705和0.2295;第2外显子存在 A、B 两个等位基因以及 AA、AB、BB 三种基因型,其基因型频率分别为0.0328、0.3443和0.6229;第3外显子只有 AA 一种基因型。序列分析表明,金昌地区的西门塔尔牛 MSTN 基因第1外显子在269bp 发生了 A→G 的突变和第2外显子在41bp 发生了 C→T 的突变,但都未导致氨基酸发生改变,属于同义突变;外显子3并未检测到突变。[结论]统计结果表明,金昌地区的西门塔尔牛 MSTN 基因第1外显子呈低度多态,第2外显子呈中度多态。     

甘肃西门塔尔牛高台类群MSTN基因多态性与生物信息学研究

为分析甘肃西门塔尔牛高台类群MSTN基因的遗传多态性、变异特征及MSTN基因的基础数据。采用PCR-SSCP方法检测了62头高台西门塔尔牛MSTN基因的多态性,对群体内各等位基因进行了克隆,得到西门塔尔牛MSTN基因的完整CDS区序列及部分5'端和3'端UTR区,并进行了相关生物信息学分析。高台西门塔尔牛MSTN基因第1和3外显子只发现一种纯合基因型,第2外显子发现一种杂合基因型。序列分析结果表明,高台西门塔尔牛MSTN基因第2外显子在41bp处发生了C→T的突变,第1和3外显子无突变。生物信息学分析表明,西门塔尔牛MSTN基因CDS区全长1128bp,编码375个氨基酸残基组成的蛋白质,分子量约为42.5kD,理论等电点为6.14;二级结构是以β-转角和无规卷曲为主。西门塔尔牛MSTN与牦牛、绵羊等物种之间存在较高的同源性。统计结果表明,甘肃西门塔尔牛高台类群MSTN基因未发现有多态,对MSTN生物信息学的分析表明,甘肃西门塔尔牛高台类群MSTN是一个由375个氨基酸残基构成的不稳定的可溶酸性蛋白质,二级结构预测为一个混合型蛋白。本研究结果为进一步研究甘肃西门塔尔牛高台类群MSTN基因的遗传特性和生理机制奠定了基础。     

中国牛亚科6个物种MSTN基因外显子2多态性及分化研究

采用PCR扩增了6个中国牛种共101个样本的MSTN基因外显子2的编码区,序列分析显示,MSTN基因外显子2编码区含372个碱基对,在所检测样本中,存在10个核苷酸多态位点,定义了7种单倍型,雷琼牛、蒙古牛、独龙牛与巴音郭楞牦牛享有共同的单倍型;MSNT基因外显子2在6个牛种中多态性较丰富。结果表明:两水牛与牛属群体间分化明显;牛属群体中牦牛独自聚成一类;大额牛存在一个独立分支;雷琼牛与一部分独龙牛、大部分蒙古牛和瘤牛聚成一支,说明蒙古牛、雷琼牛、独龙牛种间存在着基因交流。牦牛与普通牛、瘤牛的分化较明显,亲缘关系较远;研究证实了水牛的属分类地位,一定程度上支持牦牛及大额牛划为牛亚科中单独的一个属。     

中国西门塔尔牛、利木赞牛和夏洛莱牛MSTN基因多态性分析

分别以20头中国西门塔尔牛、利木赞牛和夏洛莱牛为研究对象,采用创造酶切位点PCR与降落PCR相结合的方法对3个品种的基因外显子1的突变位点扩增,分析了3个肉牛品种之间的Myostain(MSTN)基因多态性。运用1对特异性引物扩增3个肉牛品种的MSTN基因已知外显1SNP位点,扩增片段大小为217bp。运用CRS-RFLP方法鉴定60头牛MSTN基因在3个群体中的分布情况。结果表明,在西门塔尔群体中等位基因C占优势,等位基因频率为60%,AA基因型频率为0;在夏洛莱群体中等位基因A优势,等位基因频率为57.5%,CC基因型频率为0;而在利木赞群体中未检测到这一突变。     

中国西门塔尔牛AGPAT6基因外显子多态性及其与肌内脂肪酸含量的相关性

磷酸甘油酰基转移酶6(AGPAT6)是真核生物甘油三酯合成的关键酶,其在褐色脂肪组织、乳腺上皮细胞以及其他许多组织中高水平表达。为了研究AGPAT6基因与中国西门塔尔牛脂肪酸组成的相关性,本试验采用PCRRFLP的方法对AGPAT6基因的多态性进行检测,并将AGPAT6基因的遗传多态性位点与脂肪酸组成进行关联性分析。结果显示,在AGPAT6基因Exon1的303bp处有一个TC的多态性位点,其中等位基因C为优势基因。在中国西门塔尔牛群体中携带CC基因型的肉牛个体具有较高十七碳一烯酸和较低的亚油酸含量(P0.05)。本研究结果可为中国西门塔尔牛分子选育、进一步提高肉用性能提供试验依据。     

西门塔尔牛CS基因多态性与肉质性状的相关性分析

以柠檬酸合成酶基因（citrate synthetase,CS）为候选基因,分析了该基因外显子3的遗传多态性与西门塔尔牛肉质性状的相关关系。选用95头西门塔尔牛为试验材料,采用PCR-RFLP的方法对该基因的外显子多态性进行检测,并利用SPSS软件对该外显子多态性与肉质性状的相关性进行分析。结果表明：CS基因第三外显子第206bp处存在G/A突变,该基因多态性与脂肪颜色呈显著相关,AA型显著高于BB型。对其他性状的影响差异不显著。通过研究CS基因外显子的多态性,为西门塔尔牛利用该基因的多态性进行分子育种提供了试验依据。     

BMY牛MSTN基因exon 2克隆及序列分析

[目的]克隆BMY牛MSTN基因外显子2的序列,以期分析其遗传变异.[方法]通过对PCR产物进行克隆,比较哺乳动物MSTN基因外显子2之间的同源性,并构建其系统发育关系.[结果]通过PCR扩增,对PCR产物克隆得到BMY牛MSTN基因exon 2序列为372 bp编码124个氨基酸残基,牛亚科物种间的核苷酸同源性较高,在98.7％～100.0％之间,BMY牛、瘤牛、牦牛与大额牛079-gayal(Bos frontalis)的氨基酸序列一致,而日本和牛在第89位发生了天冬酰胺(Asn)→丝氨酸(Ser)的突变.构建的牛亚科几个物种之间的系统发育关系表明,含有瘤牛血统的BMY牛与瘤牛、牦牛的关系较近,且大额牛079-gayal与瘤牛的关系也近,推测大额牛在其形成历史中曾经受过瘤牛的基因渐渗.牛亚科物种的牦牛、大额牛、日本和牛、瘤牛与BMY牛聚为一支,而与水牛的关系较远.人与黑猩猩、猕猴聚为明显的一支.[结论]BMY牛MSTN基因外显子2长度为372 bp,系统聚类分析表明BMY牛含有瘤牛血统和典型的瘤牛特征.     

MSTN基因内含子2多态性与山羊体重性状相关研究

以波尔山羊以及波尔山羊与唐山奶山羊的杂交后代共计102只山羊为材料，根据山羊MSTN基因序列（GenBank登录号：DQ167575）设计一对引物，用PCR—RFLP法进行多态性分析。对该片段测序发现共有2处突变。对突变位点产生的不同基因型与体重进行分析表明：AA型个体的断乳重显著高于BB型和AB型（P〈0.05）。CC型个体的初生重显著高于CD型（P〈0.05）。由此初步推断MSTN基因可能是影响山羊体重性状的主基因或与主基因相连锁，可以用该位点对山羊体重性状进行标记辅助选择。     

西门塔尔牛改良甘肃土种牛进展

西门塔尔牛属于大型肉、乳、役兼用品种 ,它具有生长强度大、产奶量高、乳质好和耐粗饲、适应性强、能放牧饲养等优点。其肉用和乳用性能不亚于当今世界大多数肉用和纯乳用的品种 ,在同样的饲养条件下 ,西门塔尔牛的产奶量虽还赶不上荷斯坦牛 ,但乳脂率却高于荷斯坦牛。肉用性能仅仅低于夏洛莱、利木赞 ,而高于海福特、安格斯、短角等肉用品种。根据甘肃省家畜繁育中心测定 6 4头西门塔尔公牛 ,1 5月龄前平均日增重为1 2 30 ｇ ;母牛 4 8头 ,头胎泌乳期平均产奶量为 4 540ｋｇ ,平均乳脂率 4 0 3%。1　西门塔尔牛在甘肃的适应情况我省属于…     

西门塔尔牛的杂交育种效果

西门塔尔牛的杂交育种效果宁亻布塔娜刘萨仁（内蒙古哲盟扎鲁特旗畜牧工作站０２９１００）扎鲁特旗从旗情出发，坚持奶肉并重的正确育种方向，经过３个五年的连续选育，西门塔尔牛的群体生产性能有很大程度的提高，草原类群雏形已可见；以西门塔尔牛为父本的科尔沁牛新...     

西南矮马肌肉生长抑制素基因启动子区PCR-RFLP 多态性检测

利用PCR-RFLP技术对贵州矮马、德保矮马和宁强矮马3个品种的45个个体的肌肉生长抑制素(myostatin, MSTN)基因的启动子区进行多态性分析。结果表明,大小为204 bp的扩增片段经限制性内切酶SspⅠ酶切后,不同基因型经过测序发现156T→C突变,产生AA和AB两种基因型,没有发现BB基因型。贵州矮马和宁强矮马中AB基因型频率大于AA基因型,德保矮马中AA基因型占优势,在3种矮马品种A等位基因频率均大于B等位基因。卡方检测结果发现,贵州和德保矮马在该酶切位点处于平衡状态(P＞0.05),而宁强矮马在该位点分布差异显著(P＜0.05)。     

不同品种马肌肉抑制素基因的克隆与PCR-RFLP多态性分析

肌肉生成抑制素(MSTN)又称GDF-8(growth differentiation fartor8)，属于TGF-β(transformny growth fartor beta转化生长因子)超家族一员。是一种对肌肉具有负调控作用的重要激素。研究以三河马、锡尼河马、乌珠穆沁马、乌审马、纯血马5个不同马种群共250匹为研究材料，对马肌肉抑制素基因的第一内含子进行PCR、克隆、测序，然后进行PCR-RFLP分析，扩增产物经Seal、Mspl、Hhal、DraI、SrfI等5种限制性内切酶酶切，结果DraI在5个种群中具有多态性，并表现为两种基因型(AA和AB)，而其他的内切酶均未发现多态位点。     

鲁西黄牛MSTN基因上游序列多态性对转录表达的影响

肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因是转化生长因子-β（transforming growth factor-β,TGF-β）超家族的新成员。为了研究鲁西黄牛MSTN基因上游序列多态性与转录表达的关系,本试验提取鲁西黄牛腿肌组织细胞的基因组,扩增出MSTN基因上游序列,构建进化树并通过基因测序确定其上游序列中存在单核苷酸多态位点,多态位点位于起始密码子上游805 bp处。构建表达载体,在体外对C2C12细胞进行转染,从而验证MSTN基因上游序列多态位点对转录的影响。结果显示,MSTN基因上游序列中单个核苷酸的改变会影响其下游基因的表达水平。推测在体内MSTN基因上游序列中单核苷酸多态性能够影响基因的转录活性,在调节基因转录的过程中起着重要作用。     

东佛里生羊MSTN基因多态性及其与生长性状的关联分析

试验旨在研究肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因多态性及其对东佛里生羊生长性状的影响。从324只东佛里生羊全血中提取DNA,对MSTN基因外显子序列和非翻译区(untranslated region,UTR)序列进行PCR扩增,采用一代测序技术鉴定单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点,分析不同位点的遗传多态性,并将不同基因型与东佛里生羊的生长性状进行关联分析。结果显示,在东佛里生羊MSTN基因外显子中未检测到突变;在3'-UTR区的272 bp处存在G→A单碱基突变,该位点只检测到AG和AA基因型,且AA基因型频率高于AG基因型;在5'-UTR区的176 bp处存在C→A突变,该位点只检测到CC和AC基因型,且CC基因型频率高于AC基因型。遗传多样性参数分析结果表明,东佛里生羊群体MSTN基因3'-UTR-272和5'-UTR-176位点的纯合度分别为0.827和0.887,杂合度分别为0.173和0.113,2个位点的多态性均较低(PIC<0.25),其群体基因型分布均符合哈代-温伯格平衡(P>0.05)。关联分析发现,3'-UTR-272位点AG基因型体斜长显著高于AA基因型(P<0.05),5'-UTR-176位点CC基因型胸围显著高于AC基因型(P<0.05),其余指标均无显著差异(P>0.05)。综上,东佛里生羊MSTN基因3'-UTR和5'-UTR突变位点可作为其目标性状选育的分子标记。     

Study on the Association Relationship Between the Polymorphism of MSTN Gene and Production Performance in Baicheng Fatty Chicken

In this study, the single nucleotide polymorphism(SNP) of MSTN gene and its correlation with the production performance was tested, and explored the molecular genetic marker of breeding in Baicheng fatty chicken. 96 Baicheng fatty chicken roosters were selected randomly and divided into 3 groups, there were 32 chicken in each group. The indexes of production performance were measured in 12, 18 and 24 weeks old and the SNP of MSTN gene was detected by PCR-RFLP method, and analyzed the relationship between gene polymorphism and production performance indexes.The results showed that 3 genotypes of AA,GA and GG were found in Baicheng fatty chicken, GA was the dominant genotype, and allele A was the dominant allele, the allele frequency was not in the Hardy-Weinberg equilibrium (P<0.05). At 12 weeks old,AA genotype was significantly higher than GA genotype in body weight, carcass weight,semi-eviscerated weight, eviscerated weight, breast muscle weight and leg muscle weight (P<0.05). At 18 weeks old,GA genotype was significantly higher than GG genotype in body weight, breast muscle weight and leg muscle weight (P<0.05). At 24 weeks old,AA genotype was extremely significantly higher in body weight, carcass weight and semi-eviscerated weight than GG genotype (P<0.01),and AA genotype was significantly higher in eviscerated weight and leg muscle weight than GG genotype (P<0.05). GA genotype was significantly higher in body weight, carcass weight,semi-eviscerated weight and leg muscle weight than GG genotype (P<0.05), there were no significant difference in the other indexes among different genotypes at different ages (P>0.05). MSTN gene polymorphism was closely related to the production performance indexes of Baicheng fatty chicken, it was speculated this gene could be used as one of the molecular genetic markers for the breeding of Baicheng fatty chicken.     

拜城油鸡肌肉生长抑制素基因多态性与生产性能的相关性研究

试验旨在研究肌肉生长抑制素（myostatin,MSTN）基因在拜城油鸡中的多态性及其与生产性能的关系,探寻可用于拜城油鸡选育的分子遗传标记。选取96只6周龄的拜城油鸡公鸡,随机分为3组,每组32只,分别在12、18和24周龄时对其生产性能指标进行测定,同时采用PCR-RFLP方法检测MSTN基因的多态性,分析MSTN基因多态性与拜城油鸡生产性能的关系。结果显示,在拜城油鸡公鸡中MSTN基因存在多态性,检测到3种基因型:AA、GA、GG,GA为优势基因型,等位基因A为优势等位基因,不符合哈代－温伯格平衡定律（P<0.05）。在12周龄时,AA基因型个体的体重、屠体重、半净膛重、全净膛重、胸肌重和腿肌重均显著高于GA基因型个体（P<0.05）;在18周龄时,GA基因型个体的体重、胸肌重和腿肌重均显著高于GG基因型个体（P<0.05）;在24周龄时,AA基因型个体的体重、屠体重和半净膛重均极显著高于GG基因型个体（P<0.01）,全净膛重和腿肌重显著高于GG基因型个体（P<0.05）,GA基因型个体的体重、屠体重、半净膛重和腿肌重均显著高于GG基因型个体（P<0.05）,其余指标在不同周龄不同基因型个体间差异不显著（P>0.05）。MSTN基因多态性与拜城油鸡部分生产性能指标密切相关,推测该基因可以作为拜城油鸡选育的分子遗传标记之一。     

Polymorphism of CLPG and MSTN Genes and their Association Analysis with Growth Traits in Sheep

The study was conducted to explore the possibility that CLPG (Callipyge) and MSTN (Myostatin) genes which could be the candidate genes of sheep growth traits, and investigate the molecular genetic markers related to sheep growth traits.133 (Austrilian White sheep×Dorper sheep×Hu sheep) hybid-sheep were chosen as subjects, the technology of direct sequencing of PCR products and PCR-RFLP were used to detect the single nucleotide polymorphism of CLPG and MSTN genes, then the association of the SNPs different genotypes and combined genotypes with sheep growth traits were analyzed by the GLM statistical model of SPSS 22.0.Sequencing results showed that the SNP of C/T which called C1 was detected at position 232 bp of the STS sequence in CLPG gene.The SNP of G/A which called M1 was detected in the 3'UTR of MSTN gene.PCR-RFLP analysis showed that two genotypes CC and CT were in C1 site, two genotypes GG and GA were in M1 site.Association analysis revealed that C1 site was significantly or extremely significantly associated with backfat thickness and loin muscle area (P<0.05;P<0.01), M1 site was significantly or extremely significantly associated with body weight, tube girth, backfat thickness and loin muscle area (P<0.05;P<0.01).Meanwhile, the combined genotype was extremely significantly associated with body weight, backfat thickness and loin muscle area (P<0.01).The conclusions indicated that SNPs and combined genotype of CLPG and MSTN genes had effects on growth traits in sheep.C1 and M1 sites could be considered as effective genetic markers for sheep growth traits.