新的绵羊精液冷冻保护液

众所周知,家畜精液在冷冻状态下一般能保存25年以上,但在养羊实践中冻精配种始终没有广泛应用,这是锦羊精液的特殊性和绵羊的生理特点决定的。绵羊精子冷冻处理后,在2万倍显微镜下观察,形态学发生显著变化,细胞浆和细胞膜脱离,形成空泡,继而崩解,发生这一现象的原因被认为是低渗保护液的不良作用。     

绵羊腹腔内窥镜子宫角深部冷冻精液输精试验

采用人用黄体酮，ＰＭＳＧ对绵羊进行同期发情处理，４６只绵羊４８ｈ同期发情率为９５．６５％，用冷冻精液经解冻后，活力仅０．２，借助腹腔内窥镜子宫角深部输精，情期受胎率达到７２．７３％，与澳大利亚Ｓａｌａｍａｎ教授腹腔内窥镜子宫角冷冻精液输精情期受胎率７４．０４％，仅差１．３１个百分点（Ｐ＞０．０５），且其解冻后活力为０．５；与常规冷冻精液输精的情期受胎率５５．４５％相比高出１７．２８个百分点（Ｐ＜０．０１）。     

降低绵羊冷冻精液配种成本的试验

<正>绵羊冷冻精液配种技术的研究,早在50年代国外已经开始,我国也在70年代中期,由国家组织攻关,并于1982年取得了情期受配母羊产羔率56.4％的成果。但是,直到90年代的今天,无论在国内还是在国外,绵羊冷冻精液配种技术仍不能在生产中普及应用,其根本原因就是每产一只羔羊的成本太高。就以56.4％的产羔率计算,就需7元以上,甚至高达10元以上(按情期2次或3次输精,每次用2粒冻精,每粒1元计算,下同)。导致这项技术无法在生产中应用。为了解决这个难题,我们从1989年至1992年度,试图通过对冻精不同方法的处理,得到生产单位可以接受的最低配种成本,促使这项技术早日转化为生产力,为提高我国绵羊品质作出努力。     

应用磁化及LRH-A_3等方法提高绵羊冷冻精液受胎率

<正> 前言 绵羊冷冻精液在我国已研制成功,并在部分地区推广应用。但仍存在情期母羊产羔百分率偏低的问题,致使绵羊冷冻精液不能象牛冷冻精液那样广泛推广应用。为进一步提高绵羊冷冻精液的受胎率,国内外畜牧工作者进行了多方面的试验研究。Maxwell(1986)借用腹腔镜进行绵羊冷冻精液子宫内输精,情期受胎率可达70％左右。但这一技术需要进口设备,难以在我国养羊生产中推广应用。科瓦列夫报道:牛精液冷冻前,置于固定磁场中平衡处理,受胎率平均提高16％。绵羊鲜精经固定磁场处理后输精,受胎率提高9.49％。张忠诚等报道:发情的     

绵羊精液冷冻保存技术的研究进展

绵羊精液冷冻保存技术目前推广还比较困难,受胎率不高是其主要原因。目前,对于绵羊精液冷冻的研究主要集中在冷冻稀释液和冷冻程序两个方面,现就国内外有关精液冷冻稀释液和冷冻程序的研究进展做一概述,希望对今后有关此方面的研究具有一定的参考价值。     

降低绵羊冷冻精液配种成本的试验

<正>绵羊冷冻精液配种技术的研究,早在50年代国外已经开始,我国也在70年代中期,由国家组织攻关,并于1982年取得了情期受配母羊产羔率56.4％的成果。但是,直到90年代的今天,无论在国内还是在国外,绵羊冷冻精液配种技术仉不能在生产中普及应用,其根本原因就是每产一只羔羊的成本太高。就以56.4％的产羔率计算,就需7元以上,甚至高达10元以上(按情期2次或3次输精,每次用2粒冻精,每粒1元计算,下同),致使这项技术无法在生产中应用。为了解决这个难题,我们从1989年至1992年度,试图通过对冻精不同方法的处理,得到生产单位可以接受的最低配种成本,促使这项技术早日转化为生产力,为提高我国绵羊品质作出努力。     

绵羊精液冷冻保存研究进展

绵羊精液保存技术目前虽然已进入生产应用阶段,但冷冻精液人工授精受胎率低仍是限制绵羊冷冻精液进行生产推广的重要因素。目前,对于绵羊精液冷冻的研究主要集中在冷冻稀释液组分和冷冻程序等方面。文章针对国内外有关绵羊精液冷冻保存稀释液、冷冻程序、解冻方法和冷冻损伤等研究进展作一综述,旨在对今后精液冷冻保存研究提供一定的参考。     

不同浓度大豆卵磷脂替代蛋黄对东佛里生奶绵羊精液冷冻保存效果的影响

本试验皆在研究添加不同浓度大豆卵磷脂（SL）冷冻保存东佛里生奶绵羊精液的效果。我们在Tris基础稀释液中,添加18%蛋黄为对照组,添加0.5%、1%、1.5%、2%、2.5%SL设为试验组,检测冷冻精液解冻后的精子活率和顶体完整率。结果显示,添加0.5%、2.5% SL冷冻稀释液稀释的精液,解冻后精子活率和顶体完整率与其他组之间存在显著差异（P<0.05）;添加18%蛋黄和1%～2% SL冷冻稀释液稀释的精液,冷冻解冻后精子活率和顶体完整率之间无显著差异（P>0.05）;添加18%蛋黄和1.0%～1.5% SL冷冻稀释液稀释后的精液,进行人工授精后母羊的妊娠率与对照组无显著差异（P>0.05）。因此,大豆卵磷脂可以作为冷冻保护剂用于东佛里生奶绵羊精液的冷冻保存,其最佳添加浓度为1～2%（g／L）。     

AMPK激活剂在绵羊精液冷冻保存中的作用研究

旨在研究AMPK激活剂二甲双胍（metformin,Met）和阿卡地新（acadesine,AICAR）对绵羊精液冷冻保存效果的影响。本研究首先在冷冻基础稀释液中分别添加不同浓度（0、100、200、300、400、500 μmol·L^-1）的Met和AICAR,冷冻解冻后根据精子活力、运动性能和结构完整性指标筛选出最佳的添加浓度（400 μmol·L^-1 Met、200 μmol·L^-1 AICAR）;然后分别使用不同的冷冻稀释液（对照组：稀释液;Met组：含400 μmol·L^-1 Met的稀释液;AICAR组：含200 μmol·L^-1 AICAR的稀释液）冷冻精液,解冻后检测精子中AMPK蛋白表达、顶体酶活性、代谢指标、线粒体功能以及抗氧化酶活性。结果表明,稀释液中添加400 μmol·L^-1 Met和200 μmol·L^-1AICAR均可显著提高解冻后精子活力、运动性能及精子结构完整性（P<0.05）,其中400 μmol·L^-1 Met组精子总活力达43.20%,顶体完整率为91%,质膜完整率为46%。与对照组相比,Met组和AICAR组解冻后精子中AMPK磷酸化水平显著升高（P<0.05）;顶体酶活性显著提高（P<0.05）;丙酮酸水平显著下降（P<0.05）,乳酸脱氢酶活性、乳酸以及ATP含量均显著升高（P<0.05）;与对照组相比,Met和AICAR组稀释液更有利于维持线粒体膜电位（P<0.05）,提高ATP酶（P<0.05）以及抗氧化酶的活性（P<0.05）。添加适当浓度的AMPK激活剂可以提高绵羊精液冷冻保存的效果。     

Study on the Role of AMPK Activator in Cryopreservation of Sheep Semen

This study aimed to investigate the effects of AMPK activators metformin (Met) and acadesine (AICAR) on sheep semen cryopreservation. Firstly, Met and AICAR with different concentrations (0, 100, 200, 300, 400, 500 μmol·L^-1) were added into the frozen diluent. After freezing and thawing, the optimal concentration (400 μmol·L^-1 Met, 200 μmol·L^-1 AICAR) were selected based on sperm motility, motion performance and membrane integrity; Secondly, the collected semen was froze using different frozen diluents (control group:diluent; Met group:diluent + 400 μmol·L^-1 Met; AICAR group:diluent + 200 μmol·L^-1 AICAR). After thawing, the sperm AMPK protein expression, acrosomal enzyme activity, metabolic index, mitochondrial function and antioxidant enzyme activity were examined. The results showed that the addition of 400 μmol·L^-1 Met and 200 μmol·L^-1 AICAR could significantly improve sperm motility, motion performance and membrane integrity(P<0.05) after thawing. In 400 μmol·L^-1 Met group, the total sperm motility, acrosome integrity rate and plasma membrane integrity rate were 43.20%, 91% and 46%, respectively. Compared with the control group, the level of AMPK phosphorylation in the sperm of the Met and AICAR groups was significantly increased after thawing (P<0.05), the acrosome enzyme activity of sperm was significantly increased(P<0.05); the pyruvate level was significantly decreased (P<0.05), the lactate dehydrogenase activity, lactic acid content, and ATP content were significantly increased(P<0.05). Compared with the control group, the dilution of Met group and AICAR group was more conducive to maintain mitochondrial membrane potential (P<0.05), increase ATPase and antioxidant enzyme activity (P<0.05). The addition of appropriate concentrations of Met and AICAR could improve semen quality of cryopreservation in sheep.     

湖羊胚胎和精液超低温保存效果的评价

【目的】 检验长期保存在国家家畜基因库的湖羊冷冻胚胎和冷冻精液的质量,评价超低温冷冻保存技术保种的效果。【方法】 对保存于国家家畜基因库的冷冻胚胎（保存20年）和冷冻精液（保存20和30年）进行复苏,进行相应鉴定后分别进行胚胎移植和人工授精,同时以0年冷冻精液和新鲜精液为对照,测定其受胎率和后代的羔皮性能、生长性能及繁殖性能,检验保存效果。【结果】 本试验共解冻胚胎36枚,其中,A级胚胎22枚,B级胚胎7枚,C级胚胎5枚,D级胚胎2枚,冷冻胚胎复苏利用率达到94.44%（34/36）,A级胚胎率达到61.11%（22/36）,移植34枚,产羔17只,冷冻胚胎复苏移植产羔率达50.00%;保存30年的冷冻精液复苏后平均精子活力达35%,受胎率为58.57%,平均产羔1.90只;保存20年冷冻精液复苏后平均精子活力达31%,受胎率为53.66%,平均产羔1.95只;胚胎复苏移植羊、30和20年冷冻精液后代体型外貌鉴定均符合纯种湖羊特征,没有畸形个体;羔羊一级羔皮率分别是31.25%、42.03%和23.81%,保持了当年湖羊的羔皮特性;生长发育及繁殖性能与现有湖羊群体性能基本保持一致。【结论】 利用超低温冷冻技术长期保存湖羊冷冻胚胎和冷冻精液的方法是可行的,对地方品种保种具有重要意义。     

冷冻精液输精深度和时间对蒙古羊受胎率的影响

[目的] 研究冷冻精液输精深度和时间对蒙古羊受胎率的影响。[方法] 选取体况健康、繁殖机能正常的蒙古羊母羊作为试验动物,采用孕酮海绵栓对受体母羊进行同期发情处理。应用常规人工输精法（n=135）、过子宫颈输精法[过子宫颈第一皱褶（1~2 cm）输精（n=120）,过子宫颈第二到第三皱褶（3~4 cm）输精（n=120）]、腹腔镜辅助子宫内输精法（n=128）对发情后的母羊进行冷冻精液人工授精。接受常规人工输精法和过子宫颈输精法处理的受体母羊在发情后约14 h和22 h各输精1次,接受腹腔镜辅助子宫内输精法处理的受体母羊在发情后30~36 h输精1次。输精后40 d用B超仪检测母羊妊娠情况,计算并比较接受不同输精方法处理母羊的受胎率。[结果] 腹腔镜辅助子宫内输精法的受体母羊受胎率平均值最高,为60.2%;其次为过子宫颈第二到第三皱褶（3~4 cm）输精,受胎率平均值为58.3%;过子宫颈第一皱褶（1~2 cm）输精和常规输精法的受体母羊受胎率平均值分别为37.5%和36.3%。统计学分析表明,腹腔镜辅助子宫内输精法和过子宫颈第二到第三皱褶（3~4 cm）输精的受体母羊受胎率平均值显著（P<0.05）高于常规输精法和过子宫颈第一皱褶（1~2 cm）输精。[结论] 蒙古羊母羊发情后30~36 h采用腹腔镜辅助子宫内输精法完全穿刺子宫颈输精1次,可获得比常规输精法更高的受胎率;采用过子宫颈输精法在母羊发情后约14 h和22 h各输精1次,当授精深度接近4 cm时可达到与腹腔镜辅助子宫内输精法接近的受胎率。     

牛精子冷冻损伤研究进展

人工授精技术是目前通过冷冻精液进行牛遗传改良而应用最为广泛的生物技术。虽然如此,由于精液产品的质量而导致人工授精的遗传影响被限制,在精液的冷冻－解冻过程中40%~50%的活精子失去完整性或功能受到损伤。作者在参阅国内外相关文献的基础上,通过阐述冷冻－解冻对精子细胞的损伤作用及机理、精浆对牛冷冻精液质量的影响、冷冻－解冻过程中精子的过氧化损伤,以及冷冻－解冻后精子相关基因与蛋白质的变化等,以期为牛高质量冷冻精液的研究提供一定参考,进一步提升冷冻精液质量。     

稀释液中添加半胱氨酸对绵羊冷冻精液品质的影响

在绵羊冷冻精液稀释液中添加0mmol／L、2．5mmol／L、5．0mmol／L、7．5mmol／L4个不同梯度的半胱氨酸,通过测定解冻后的精子活率、畸形率、顶体完整率、质膜完整率以及各项酶（SOD、GSH、GSH-PX、CAT和MDA）的活性来确定最适添加量。结果表明,添加5．0mmol／L的半胱氨酸组的精子活率和顶体完整率均极显著高于对照组和其他组（尸〈0．01）,而畸形率显著低于对照组和其他试验组（P〈0．05）;各项酶指标中,5．0mmol／L半胱氨酸组SOD和GSH浓度与其余各组间差异不显著（P〉0．05）,MDA浓度极显著低于对照组和7．5mmol／L试验组（P〈0．01）,CAT和GSH-PX活性极显著或显著高于对照组和其他试验组（P〈0．01,P〈0．05）。说明冷冻稀释液中添加5．0mmol／L的半胱氨酸可有效保护精子免受过氧化物的损害。     

驴精液冷冻保存技术研究进展

驴的精液冷冻保存技术是在马的基础上逐渐发展起来的,特别在近十年来,有关研究明显增多,在诸多方面取得了积极的成果。文章主要以驴精液冷冻保存技术环节的发展为侧重点,就其研究成果进行了总结。     

甘肃高山细毛羊细管鲜精低温保存效果研究

为了研究甘肃高山细毛羊种公羊细管精液低温保存的效果.用葡萄糖、柠檬酸钠、鲜奶和卵黄为主要成分配制了3种稀释液,10倍稀释精液,并在4℃保存,分别在12h,24 h,36h,48 h,60h和72 h观测精子活力和人工授精受胎率.结果显示,配方Ⅲ稀释精液后,细管封装,4℃保存,72 h后精子活力可达0.49,与配方Ⅰ和Ⅱ差异显著,而且配方Ⅲ稀释精液后,在远距离输精后受胎率可达78.3％.以柠檬酸钠和葡萄糖为基础,添加卵黄和TCM199,在4℃下,能有效保护甘肃高山细毛羊精液,延长精子寿命,且在3d内可以满足远距离人工授精要求,有效利用种公羊价值.