青海野生中国沙棘根际解钾菌的分离、鉴定及其促生能力比较

【目的】从青海野生中国沙棘(Hippophae rhamnoides subsp.sinensis)根际土中筛选出具有解钾能力的菌株,并比较其促生能力,为高原地区高效生物菌肥的研发提供依据。【方法】利用纯化培养方法从中国沙棘根际土中分离解钾菌;通过形态观察、生理生化检测及16S rDNA序列比对鉴定菌株;对解钾菌的解有机磷、解无机磷、解钾、降解纤维素的能力进行测定;将解钾菌接种于空心菜幼苗以验证其促生效果。【结果】K15、K50和K65三株解钾菌均为乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)。培养3 d后,3株解钾菌溶解有机磷的浑浊圈直径为3.75～7.13 mm,解有机磷菌液中磷的质量浓度为5.12～11.33μg·mL^-1;溶解无机磷的透明圈直径为3.25～5.31 mm,解无机磷菌液中磷的质量浓度为3.39～6.63μg·mL^-1;解钾的黄色光圈直径为17.53～25.17 mm,解钾菌液中K⁺质量浓度为4.87～7.15μg·mL^-1;降解纤维素的透明圈直径为8...     

枯草芽孢杆菌B2-GFP菌株的构建及其在土壤中的定殖

采用质粒消除与热激法构建枯草芽孢杆菌工程菌株B2-GFP,并测定其生长曲线、稳定性及对烟草疫霉的抑制率;同时,采用灌根和稀释平板法测定该菌株在烟株土壤中的活菌数.结果表明：工程菌株B2-GFP较野生型菌株B2提前1 h进入指数增长期,在培养11 h后同时进入稳定生长期;B2-GFP与烟草疫霉对峙培养后抑菌率达48.30%;在不含卡那霉素的LB固体培养基中继代培养10代后,在荧光显微镜下,菌落及菌体仍具有较强绿色荧光.烟株根际土壤活菌数大于根围土壤活菌数,且均呈现先升后降再趋于稳定的规律.在灭菌土壤中接种工程菌株B2-GFP第14天,烟株根际土壤活菌数达1.61×10⁷ CFU·g^-1;在自然土壤中接种该菌第42天,烟株根际土壤活菌数达1.46×10⁷ CFU·g^-1;接种第70天仍能保持绿色荧光表型.本研究证实工程菌株B2-GFP在烟田土壤中能够定殖并保持其特性.     

高粱根际高亲和性解磷复合菌系的构建及溶磷、促生效果

[目的]本文旨在构建既可在高粱根际高效定殖,又可显著强化单菌株溶磷、产吲哚-3-乙酸(IAA)能力的复合菌系,提高土壤中难溶性磷利用率,实现高粱节磷栽培。[方法]采用抗生素标记、Salkowski比色法、田间灌根试验、室内液态发酵试验和响应面CCD设计相结合的方法,对可在高粱根际高效定殖、促生效果明显的解磷细菌进行鉴选,并在此基础上构建复合菌系并测定其对高粱栽培的磷肥减施效果。[结果]菌株gz4-1、gz2-2、1-1和1-3可在主推高粱品种(晋杂22号、晋糯3号和晋杂2001号)根际高效定殖,灌根处理20 d后活菌数量均可达4.00×10⁵ cfu·g^-1,同初始接种浓度1.00×10⁵ cfu·m L^-1相比活菌数量呈现增加趋势;4菌株产IAA能力以gz4-1、gz2-2、1-1较优,均高于20 mg·L^-1;发酵72 h菌株1-3发酵液中的IAA浓度虽然低于菌株gz4-1、gz2-2、1-1,但仍达9.12 mg·L^-1,且促生效果明显;复合菌系中菌...     

高知芽孢杆菌Cytobacillus kochii H产蛋白酶条件优化及抑菌效应

【目的】对筛选到具有抑菌效果且产蛋白酶的菌株H进行分类地位的确定，同时对其产蛋白酶的条件进行优化，以期为其在植物病害防治上的应用奠定基础。【方法】通过生理生化、电子显微镜扫描及16sRNA测序相结合的方法明确菌株H的分类地位；通过单因素和正交试验对菌株H产蛋白酶条件进行优化，并检测其优化前后对病原真菌的抑菌效果。【结果】菌株H鉴定为高知芽孢杆菌(Cytobacillus kochii)；菌株H产蛋白酶的优化条件为：pH8.0、葡萄糖20.0 g·L^-1、蛋白胨8.0 g·L^-1、MgSO4 1.0 g·L^-1、CaSO4·2H2O 0.1 g·L^-1，在装有50 mL发酵培养基的250 mL三角瓶中接种2.5 mL108 CFU·mL^-1的种子液，培养24 h后蛋白酶活力达到402.2 U·mL^-1，较初始培养条件下的蛋白酶活力提高13.92倍；优化后菌株H对尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)和辣椒疫霉病菌(Phytophthora cap...     

磷高效转基因水稻OsPT4根际高效解有机磷细菌的分离鉴定

为提升磷高效转基因水稻根际土壤的磷素利用率,采用传统微生物分离培养技术分离筛选高效解有机磷菌株,并对分离菌株进行鉴定和解磷能力的测定。以改良的蒙金娜固体有机磷培养基分离磷高效转基因水稻OsPT4根际土壤中的解有机磷菌株,检测其溶磷特性,并通过比对16S rDNA基因序列进行分类鉴定。结果表明：从磷高效转基因水稻根际土壤中分离获得15株解菌株,纯化复筛后获得6株可以产生明显溶磷圈且生长稳定的解有机磷菌株。6株解磷菌的可溶性指数在1.50~6.33之间,其中菌株Y7的可溶性指数最高;培养24 h后菌株的解磷量在10.60~87.43 mg·L^-1之间,其中菌株Y7最大。培养24 h后菌株Y7的菌液pH降低最多,碱性磷酸酶分泌量仅低于菌株Y11。除Y7外的5株菌株均为大田土壤中分离筛选的常见类群,在解磷能力、溶磷特性上与传统大田作物中筛选获得的解磷菌株无明显差异。菌株Y7的解磷能力最强,经鉴定其属于泛菌属（Pantoea sp.）,是常见的水稻种子内生菌核心类群,酸化作用和碱性磷酸酶作用是其主要的解磷机制,Y7可作为高效解磷菌资源进行进一步研究。     

4株番木瓜根际解磷细菌发酵条件优化研究

以番木瓜根际分离出的4株具较好解磷效果菌株为试材,采用单因素实验以及正交实验研究温度、pH、摇床转速、接种量、装液量和培养时间对4株菌株解磷能力的影响。结果表明:4株菌株在初始pH 7.0和发酵培养5 d时均具有最高的解磷能力,而其他4个因素对其解磷能力的影响均表现出差异性。2株无机磷菌的最佳培养温度和接种量均相同,分别为33℃和3 mL,但摇床转速和装液量不同,分别为180、200 r/min和60、50 mL;2株有机磷菌最佳培养温度和摇床转速均相同,分别为31℃和160 r/min,但装液量和接种量不同,分别为60、50 mL和1、4 mL。     

解磷真菌JL-7的筛选及其作用于低品位磷矿的肥效研究

【目的】针对我国低品位磷矿资源利用率低、耕地土壤有效磷含量低以及传统化肥的大量使用造成的土壤易固化等一系列问题,筛选可解离低品位磷矿的高效菌株,为低品位磷矿的资源利用提供途径。【方法】以砂培法从贵州铜仁烟草种植基地土壤中筛选出一株新型解磷真菌,将其命名为JL-7,经过生理生化试验和分子生物学鉴定该菌为烟曲霉菌(Aspergillus fumigatiaffinis)。采用单因素和正交试验对该菌的解磷性能进行优化,在最佳优化条件下制备微生物菌肥并通过烟草盆栽试验进行肥效验证。【结果】从烟草根际土壤中筛选的真菌JL-7在优化条件(接菌量1×10⁵ cfu·mL^-1、初始pH 6、解离时间8 d、解离温度26℃)下对低品位磷矿的最高解磷量达到967.4 mg·kg^-1,真菌解离液中pH可降低至2.9左右。以高效解磷菌株JL-7制备菌肥,通过烟草盆栽种植试验,该菌肥对烟草(云烟87)的茎围、株高、最大叶面积分别提升44.60%、57.29%、62.90%。种植后对土壤进行分析,结果表明,该菌肥对土壤中的有效磷、速效钾、碱解氮含量...     

苹果根际解磷菌的分离筛选及解磷能力

为实现果园化肥减施计划,开发高效微生物解磷肥,利用蒙金娜有机磷固体培养基从苹果根际土壤中筛选具有矿化有机磷能力的细菌,经分离、纯化培养后鉴定其矿化植酸钙的效率。同时测定培养液的pH和磷酸酶的活性,运用16SrDNA测序分析进行菌株的分类信息鉴定,最后将其回接入有机磷培养基中,观察其对拟南芥生长的影响。结果表明:从苹果根际土壤中分离纯化得到10株解磷能力存在一定差异的解磷菌,其溶磷量在14.82～104.13mg/mL,磷酸酶活性为12.61～44.24μg/(mL·h)。经鉴定10株解磷菌分别属于Acinetobacter、Enterobacterer和Pseudomonas 3个属,综合生理特性和进化树分析,最终筛选出PsbM4,为较优候选苹果根际解磷菌,其可有效矿化培养基中有机磷,并刺激拟南芥植株泌氢以更好应对低磷胁迫。     

基于响应面法的粘质沙雷氏菌BRC-CXG2发酵培养基优化

为了将粘质沙雷氏菌（Serratia marcescens）应用在松墨天牛（Monochamus alternatus）防治上,对粘质沙雷氏菌的培养基配方进行了优化。通过单因素试验筛选粘质沙雷氏菌发酵培养基的碳源、氮源和无机盐,利用Plackett-Burman试验设计确定3个主要影响因素,通过最陡爬坡试验,结合Box-Behnken Design试验设计及响应面分析法优化培养基组成成分,获得培养基最佳配方与发酵条件：葡萄糖23.27 g·L^-1、蚕蛹粉22.37 g·L^-1、酵母粉10 g·L^-1、硫酸镁2 g·L^-1、磷酸氢二钠3 g·L^-1,氯化钠2 g·L^-1;在28 ℃、150 r·min^-1条件下发酵36 h,装液量体积分数为50 mL/250 mL,接种量4.73 %,pH 7.1~7.3。最后,根据最优培养条件验证发现优化后培养基中生长的菌落数为6.0×10⁹ cfu·mL^-1,是初始培养基的9.42倍,与模型预测值相符。研究结果为粘质沙雷氏菌的发酵生产提供了理论基础,为松材线虫病（pine wilt disease）的防治提供了新的途径。     

大豆根瘤菌定向微生态研究与应用

我国大豆根瘤菌种质资源丰富,但其应用进展缓慢,接种面积仅占全国大豆总种植面积的1%～3%。造成该问题的原因主要是根瘤菌不能产芽孢,其抗逆能力较差,导致产品货架期短,应用效果不稳定。为实现根瘤菌产品多元化、功能化、差异化,提高产品活性与应用效果,使用定向微生态(directed micro-ecology,DME)体系优化培养策略,实现根瘤菌、芽孢杆菌的定向扩培及应用。通过单因素实验及响应面法获得根瘤菌最优培养基(25.5 mL·L^-1糖蜜液、15.2 g·L^-1酵母膏、pH 6.98),在DME培菌机中使用该配方可以实现根瘤菌(100 L·min^-1,20 h)及芽孢杆菌(150 L·min^-1,14 h)菌量50倍以上的扩增,达到(20～50)×108 CFU·mL^-1,且杂菌率控制在5%以下。盆栽接种实验表明,DME扩培菌株接种处理的效果显著优于实验室常规培养菌株的同等接种处理,这表明DME培菌机培养的功能微生物应用效果更好。根瘤菌与芽孢杆菌的复配组合可以协助根瘤菌更好地实...     

当归和羌活根际促生菌筛选及特性研究

为获取对当归和羌活生长具有促生作用的促生菌(plant growth promoting rhizobacteria,PGPR),以当归、羌活的根系为研究对象,利用选择性培养基分离具有固氮、溶磷和分泌3-吲哚乙酸(IAA)能力的菌株。通过对菌株的固氮酶活性、溶磷能力及分泌IAA的能力进行测定,筛选出促生性能优良的菌株;进一步通过生理生化指标和16S rDNA序列分析相结合的方法分析优良菌株的分类地位。结果表明,共筛选到12株具有固氮酶活性的菌株,其固氮酶活性为0.30～4.04 nmol C₂H₄·mL^-1·h^-1;6株溶解无机磷的菌株,溶磷量为290.98～420.33μg·mL^-1;3株产IAA的菌株,IAA分泌量为10.38～18.63μg·mL^-1。经鉴定,溶磷特性优良的菌株属于假单胞菌属(Pseudomonas)和错玫杆菌属(Falsirhodobacter),假单胞菌属为优势菌属。综合各菌株的促生特性,筛选出2株促生性能优良的菌株：WQP-5(...     

荞麦根际微生物的分离及生物活性检测

为探明荞麦根际可培养微生物的数量及种类，并从中筛选一批具有生物活性的微生物资源，本试验通过稀释平板涂布法分离荞麦根际微生物，采用对峙法、点接法、琼脂块法检测其抗菌、产淀粉酶、产蛋白酶及解磷活性。结果表明，荞麦根际土壤中细菌含量最高，约为6.2×10⁸ cfu/g,放线菌次之，真菌含量最低，约为3.7×10⁵ cfu/g。试验共分离到72株菌，其中放线菌39株、真菌18株、细菌15株，具有生物活性的菌株分别占比44.4%、12.5%、11.1%。具广谱生物活性的菌株分别属于链霉菌属、镰刀菌属、芽孢杆菌属，其中链霉菌属SG15同时具有5种生物活性。综上，荞麦根际存在丰富的微生物资源，筛选出的11株具有广谱生物活性的菌株可用于功能菌肥开发。     

耐铅植物内生菌的筛选及其促生机制研究

为研究植物内生菌提高植物修复重金属污染的效率及机制,本试验以生长于丽水市水阁村重金属污染地区的植物为材料,分离筛选耐铅优势菌株,对其促生特性及影响因素进行检测。试验结果表明,从供试植物中分离筛选出一株耐铅性强的内生细菌GZ01,经鉴定为链球菌属。该菌最高耐受Pb²⁺浓度为700 mg·L^-1,且具有分泌吲哚-3-乙酸(IAA)、产铁载体、溶解难溶性磷及合成1-氨基环丙烷-1-羧酸(ACC)脱氨酶等功能。在初始接种量为3%、Pb²⁺浓度为500 mg·L^-1条件下培养5 d,该菌分泌IAA效果最佳;在初始接种量为10%,培养6 d时,该菌溶磷效果最好;在初始接种量为10%、Pb²⁺浓度为200 mg·L^-1的条件下培养6 d,该菌产铁载体效果最佳。回接试验表明,染菌组大豆的株高、鲜重等指标均比对照组高,其体内Pb²⁺含量低于对照组。说明菌株GZ01能通过分泌促生物质,促进宿主植物生长,降低重金属Pb²⁺对植物的毒害作用,可作为内生菌植物联合修复重金属污染的目标菌株。     

接种菌根真菌和氮添加处理对樟子松苗木根际微生态环境的影响

通过研究接种菌根真菌和N添加处理对植物根际土壤胞外酶及其计量特征,以及微生物养分限制的影响,从而探讨全球N沉降背景下菌根真菌对根际微生态环境的调控机制。以1年生樟子松的盆栽菌根苗（简称+M,混合接菌处理）和非菌根苗（简称-M,未接菌处理）为对象,设置4个N添加处理:不施N（0N,0 kg·hm^-2·a^-1）、低氮（LN,15 kg·hm^-2·a^-1）、中氮（MN,30 kg·hm^-2·a^-1）、高氮（HN,60 kg·hm^-2·a^-1）。对比分析接菌和N添加处理对樟子松苗木根际土壤速效养分和胞外酶活性及其计量特征的影响,探究菌根真菌对微生物养分限制调控规律。结果表明:1）不同接菌处理下,随N添加量增加,土壤中碱解N均呈增加的趋势。HN处理下,菌根苗根际土壤有效磷达到最大。2）LN、MN处理下,菌根苗根际土LAP、NAG和ALP酶活性均显著高于非菌根苗。3）MN、HN处理下,菌根苗根际土壤中微生物碳限制和磷限制较非菌根苗均显著降低。4）通过PLS-PM路径模型分析发现,接菌处理正效应作用于根际土壤微生物养分限制。综上,N添加改变了根际土壤N平衡,菌根真菌有效调控N添加下根际微生态环境的稳定性,降低苗木根际微生物的碳和磷限制。     

茶树根际土壤解磷细菌的筛选及解磷活性分析

为了获得具有高效解磷活性和应用潜力的根际促生菌,从河南省信阳黄棕壤茶区采集茶树根际土壤样品,采用选择性培养基,以稀释培养法筛选具有解磷能力的细菌。结果表明,共筛选获得具有较强解磷能力的根际细菌36株,其中,解无机磷细菌23株,解有机磷细菌13株;解磷细菌主要分布于芽孢杆菌属、类芽孢杆菌属、伯克氏菌属、肠杆菌属、不动杆菌属和假单胞菌属,其中,芽孢杆菌和类芽孢杆菌为优势种群。解磷特性和活性测定结果表明,蜡样芽孢杆菌、类芽孢杆菌和伯克氏菌兼具解无机磷和有机磷的作用,而假单胞菌仅具有解有机磷的作用;23株解无机磷细菌中,18株的解磷活性大于100μg/mL,13株解有机磷细菌的解磷活性均大于40μg/mL。     

多杀菌素发酵培养基优化及发酵工艺研究

为了优化刺糖多孢菌发酵工艺,以刺糖多孢菌YJY^-12为试验菌株,以多杀菌素发酵水平为指标,通过正交试验及单因素试验对产多杀菌素的发酵培养基成分及培养条件(种龄、接种量、温度、pH值等)进行优化,确定最佳的培养基组成及培养条件,并对其进行了试验验证。结果显示：最佳的发酵培养基组成为葡萄糖55 g·L^-1,棉籽蛋白30 g·L^-1,油酸甲酯40 g·L^-1,大豆油15 g·L^-1,酵母粉10 g·L^-1,蛋白粉15 g·L^-1,玉米浆干粉5 g·L^-1,蛋白胨15 g·L^-1,KH₂PO₄ 3 g·L^-1,(NH₄)₂SO₄ 1 g·L^-1,CuSO₄ 0.002g·L^-1,(NH₄     

短芽孢杆菌PB1对聚乙烯的降解

为寻求一种环境友好的方法治理聚乙烯污染,以聚乙烯为唯一碳源的无机盐培养基,从长期覆盖聚乙烯地膜的农田土壤中筛选出一株聚乙烯降解细菌PB1。PB1菌落呈圆形、边缘整齐、表面湿润,革兰氏阳性,杆状。16S rDNA基因序列比对发现菌株PB1与多株短芽孢杆菌属细菌同源性高于99%,从而初步判定菌株PB1为短芽孢杆菌(Brevibacillus sp.)。将PB1与聚乙烯共培育35 d后,聚乙烯膜片失重率为3.05%,同时培养液中菌液浓度(OD₆₀₀)总体呈上升趋势;扫描电镜观察发现降解后聚乙烯膜片表面出现明显的坑洞和凹痕,并且有丝状裂痕产生;傅立叶红外变换光谱仪观察发现聚乙烯结构中引入了活性官能团醚键,漆酶和锰过氧化物酶活力在35d时分别为0.125 IU·mL^-1和0.126 IU·mL^-1。印证了菌株PB1是一株高效聚乙烯降解菌株,研究结果丰富了聚乙烯降解菌的菌种资源,为进一步研究聚乙烯的生物降解奠定基础。     

贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4发酵培养基和发酵条件优化

【目的】贝莱斯芽孢杆菌FJ17-4对许多病原菌具有较强的抑制作用,为提高其生防作用,开展FJ17-4发酵技术研究。【方法】以发酵液的OD₆₀₀值为评估指标,采用单因素和正交试验方法对发酵培养基和发酵条件进行筛选和优化,获得最佳发酵培养基和发酵条件后,进一步对优化后发酵液的菌体数、病原菌抑制率和室内盆栽防治效果进行测定和分析。【结果】菌株FJ17-4的最佳培养基配方为黄豆粉12.5 g·L^-1、玉米粉5.0 g·L^-1、K₂HPO₄ 12.5g·L^-1,最佳发酵条件为：初始pH 7.0,培养温度30℃,装液量20%(50 mL/250 mL),接种量12.5%,转速180r·min^-1,发酵培养时间40 h。优化后发酵液的OD₆₀₀值和菌体数量分别为1.52×10¹⁰、1.03×10¹⁰ cfu·mL^-1,比优化前分别提高了25.62%和21.95%...     

食用菌菌渣高效降解菌的筛选及主菌株产酶环境优化

为筛选出高效降解食用菌废弃菌渣的复合菌系，有效促进菌渣的降解速率，明确复合菌系主要功能菌株最佳发酵环境。利用富集培养、限性继代培养和低温逐代驯化技术对205份采集的菌源材料进行筛选，通过对纤维素酶活性的测定，选取最佳菌源提取物料。同时采用划线分离培养，分离主要功能菌株，对菌株的产酶条件进行优化。结果表明，从205份菌源提取物质中分离纯化的1个具有较强的纤维素降解能力的材料，发现该菌属于曲霉属，产酶较高的主菌株是聚多曲霉(Aspergillus sydowii),对该菌株的产酶环境优化发现，产半纤维素酶和纤维素酶的最优环境是菌渣35 g·L^-1、硫酸铵3.5 g·L^-1、吐温-80为1.4 mL·L^-1、KH₂PO₄ 1.0 g·L^-1、MgSO₄·7H₂O 1.0 g·L^-1、NaCl 0.5 g·L^-1、FeSO₄·7H₂O...     

甜樱桃砧木根际和非根际解磷细菌研究初报

在甜樱桃砧木落叶期,利用根际和非根际土壤测定分解卵磷脂和溶解磷酸三钙的细菌,发现根际土壤解磷细菌的数量高于非根际土壤,但无论是根际还是非根际土壤,有机磷细菌比无机磷细菌多。根际土壤解磷细菌种类较多,而非根际土壤解磷细菌种类较少。根际土壤的有机磷细菌主要为假单胞菌属,且2种砧木之间根际与非根际解磷细菌种类明显不同。