应用SAS软件优化武夷菌素产生菌发酵培养基

武夷菌素是由不吸水链霉菌武夷变种(Streptomyces ahygroscopicus var.wuyiensis)产生的一种农用抗生素,对多种作物的真菌病害防治效果显著。为进一步提高武夷菌素产生菌的产量、降低其生产成本,应用SAS软件提供的Plackett-Burman设计法和响应面分析法对该菌株的发酵培养基进行优化组合,以期找到适宜武夷菌素产生菌C-75生产的最佳发酵培养基配方。应用Plackett-Burman设计法从9种培养基成分中筛选出玉米粉和碳酸钙为两个重要因素;通过响应面回归分析结果建立响应面回归模型：Y=5826.99-91.56X2-180.69X8-194.31X22 -151.25X2X8-205.31X82。回归模型预测当玉米粉和碳酸钙的含量分别为2.314 g和0.205 g（50 ml培养基装量）时,该模型能取到最大值。摇瓶发酵实验结果表明,该模型稳定点处的实际效价平均值为5837 μg/ml,菌株C-75经优化培养基发酵后的效价较之前提高了5.59%。     

土霉素菌种的自然分离 纯化及鉴定

以土霉素产生菌龟裂链霉菌(Streptomycesrimosus)D-7号为出发菌株,经自然分离,纯化处理后,再经摇瓶初筛、复筛获得高效价菌株10号,其摇瓶效价提高12.6%。经传代实验表明,该高产菌株遗传性能较为稳定。在15m罐上生产试验,与出发菌株相比,发酵效价提高7.18%,发酵总亿提高5.48%。3     

诱变育种提高乳酸乳球菌Lactococcus lactis产Nisin的能力

为了获得高产细菌素的乳酸乳球菌菌株,通过采用紫外线(UV)、亚硝基胍(NTG)、硫酸二乙酯(DES)诱变和紫外线与硫酸二乙酯复合诱变的方法,获得多株诱变菌株,研究突变株代谢生产Nisin的效价及抑菌能力。结果表明,其中通过诱变得到了一株高产菌株DU101,该菌株代谢生产Nisin的效价由442 IU/m L提高到了1386 IU/m L,约是原始菌株HDBR-06的3.14倍。通过传代试验验证了菌株的遗传性能稳定。     

2%武夷菌素水剂防治黄瓜白粉病田间试验研究

为明确2%武夷菌素水剂在农业生产上的防治效果及对作物的安全性,在烟台芝罘福地果业种植专业合作社进行田间试验,结果表明:在黄瓜白粉病发病初期,喷施试验剂量范围内的2%武夷菌素水剂能很好地控制病害的发生和蔓延,防治效果较好。建议在黄瓜白粉病发病初期用2%武夷菌素水剂有效成分量53~100 g/hm2,制剂量177~333 g/667 m2,兑水50 L/667 m2进行叶片正反面均匀喷雾,间隔7~10 d喷1次,连喷2~3次。     

L-苏氨酸生产菌的选育

以北京棒杆菌AS 1.299(Corynebacterium pekinense)为出发菌株,经过紫外—亚硝基胍(NTG)诱变,得到L-苏氨酸高产突变株N50-10,其质量浓度为1.150 g/L,比原菌株质量浓度提高了1.106 g/L。在菌株N50-10的基础上,又筛选出抗乙硫氨酸和抗磺胺胍突变株SG06-10(Ethr+SGr),其L-苏氨酸质量浓度达到了2.463 g/L,比原菌提高了2.419 g/L。经5次传代,产量稳定。     

黄霉素产生菌微波诱变育种的研究

采用微波诱变方法对黄霉素产生菌进行诱变处理,利用菌株抗自身代谢物的特征,在添加高浓度的黄霉素的分离培养基上选育获得比出发菌株单位提高的突变株sg2-M-2,效价比原始菌株提高了6.2倍。而且变株的菌落形态与亲本菌株差异较大。     

湖北、江苏团头鲂源嗜水气单胞菌致病性与药敏特性研究

对湖北、江苏两省的8个团头鲂主养区分离的嗜水气单胞菌的致病性和药敏特性进行比较,分析不同地区嗜水气单胞菌在致病力和耐药性方面的差异。结果表明：气溶素基因(aer)、丝氨酸蛋白酶基因(ahp)、溶血素基因(hly)、抗金属蛋白酶基因(ast)、肠毒素基因(alt)在各菌株中的携带率分别为100%(8/8)、75%(6/8)、87.5%(7/8)、100%(8/8)、75%(6/8),仅E6、X22分别缺少ahp、alt基因和ahp、hly、alt基因;6株均携带上述5个毒力基因的菌株,其中有5株菌的溶血价和溶蛋白效价均达到最高的1:128,W25为1:128、1:64,E6和X22分别是1:64和1:64、1:32和1:64;上述6株菌的LD50值在5.0×105~1.0×106 cfu/mL之间,E6和X22的LD50值分别为2.4×106 cfu/mL和4.0×106 cfu/mL;不同地区的嗜水气单胞菌对孢头菌素类、氟苯尼考高度敏感,对青霉素类高度不敏感,对氨基糖苷类、磺胺类呈现一定程度的耐药性;江苏省分离菌株对恩诺沙星、四环素的耐药性明显高于湖北省的分离株,而湖北省分离株对新生霉素的耐药性要高于江苏省的分离菌株。可以得出,不同地区的菌株致病力没有显著差异,而在耐药性方面呈现一定的区域差异性。     

河南省小麦纹枯病菌对咯菌腈仍然敏感

<正>为明确河南省小麦纹枯病菌对咯菌腈的敏感性,河南科技大学林学院研究人员采用菌丝生长速率法测定了咯菌腈对2013年从河南省15个地市分离的98株病菌的毒力。结果表明,咯菌腈对供试小麦纹枯病菌菌株的EC_(50)值在0.009～0.079μg/m L之间,平均EC_(50)值为(0.025±0.012)μg/mL;98个菌株对咯菌腈的     

外源添加乙偶姻对酿酒酵母产2,3-丁二醇及其菌株的影响

通过对菌株发酵特性的研究,旨在获得一株性能良好的2,3-丁二醇(2,3-BD)生产菌株。本研究以酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)W5/W5-$\Delta$pdc1/W5-$\Delta$pdc5/W141四株菌株为试材,利用高效液相色谱法(HPLC)对乙偶姻产量和BDH酶活进行检测,从而挑选出最适合作为产2,3-BD出发菌株,并外源添加不同浓度的乙偶姻,测定乙偶姻、葡萄糖和2,3-BD产量随发酵时间的变化情况。结果表明：S. cerevisiae W5与S. cerevisiae W141最适合作为产2,3-BD出发菌株,且S. cerevisiae W5最适添加量为12 g/L乙偶姻,且72 h时,2,3-BD的产量最大达到2.49 ± 0.02 g/L;S. cerevisiae W141最适添加量为8 g/L乙偶姻,且72 h时,2,3-BD的产量最大达到1.56 ± 0.04 g/L,外源添加乙偶姻后菌株生长状况良好,并且二者产生的乙偶姻在发酵结束前消耗完全,同时在24 h左右,二者产生的葡萄糖也均基本耗尽。这为研究和利用2,3-BD等可再生资源提供了思路,也为利用S. cerevisiae生产2,3-BD奠定了理论基础。     

2株甘薯强致病力镰刀菌的室内药剂筛选

爪哇镰刀菌和尖孢镰刀菌对甘薯具有强致病力，为了筛选对2种病原菌防效较好的药剂，采用菌丝生长速率法分别测定多菌灵、甲基硫菌灵、腐酶利、肟菌·戊唑醇、唑醚·代森联、咪鲜胺、中生菌素和四霉素对2株甘薯致病镰刀菌的室内毒力。结果表明，对爪哇镰刀菌菌株菌丝生长抑制作用最强的为四霉素和咪鲜胺，EC₅₀分别为1.292、2.145μg/mL，其次为中生菌素和肟菌·戊唑醇，EC₅₀分别为16.652、28.641μg/mL，腐酶利、甲基硫菌灵、多菌灵和唑醚·代森联对爪哇镰刀菌菌株的抑制作用最差，EC₅₀分别为440.540、637.120、680.765μg/mL和22385.367μg/mL；对尖孢镰刀菌菌株菌丝生长抑制作用最强的为四霉素、咪鲜胺和肟菌·戊唑醇，EC₅₀分别为0.03、0.131μg/mL和0.177μg/mL，其次为中生菌素和多菌灵，EC₅₀分别为3.66、14.408μg/mL。甲基硫菌灵和唑醚·代森联对尖孢镰刀菌菌株菌丝生长抑制作用较差，EC₅₀分...     

我国水稻纹枯病菌对己唑醇仍然敏感

正为评估我国水稻纹枯病菌对己唑醇的抗性风险,贵州省茶叶研究所、贵州大学作物保护研究所等单位研究人员采用菌丝生长速率法,测定了自贵州、湖北、湖南及河南7个稻区分离的101株纹枯病菌菌株对己唑醇的敏感性,建立了其敏感性基线。测定结果表明,不同稻区101株水稻纹枯病菌菌株的EC_(50)值介于1.0751～2.9228mg/L,平均为1.8081mg/L,菌株之间的EC_(50)     

苏云金杆菌HB菌株生物学特性初探

苏云金杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)BtHB菌株是从736株野生型Bt菌中筛选分离的1株对仓库害虫烟草粉螟具有高效杀虫活性的菌株。BtHB菌株与已知标准菌株生理生化特性比较,初步确定BtHB菌株为加拿大亚种(canadensis,H5a5c)。对BtHB菌株进行发酵条件筛选结果表明,BtHB菌株的最适培养时间、温度、酸碱度、转速分别为36h、30℃、pH7.5、180r/mim。BtHB菌株对烟草粉螟二龄幼虫的室内防治效果9d后发酵原粉稀释100、300、600倍的防效超过80%。BtHB菌株伴孢晶体蛋白质提纯在电镜下观察发现,BtHB菌株晶体有菱形、长椭圆形、不规则形晶体,晶体大小不同,长椭圆形晶体长轴平均1.59μm,短轴平均0.79μm,菱形晶体长轴平均1.60μm,短轴平均0.81μm。     

小麦赤霉病菌定性和定量ELISA检测方法的建立

以3株小麦赤霉菌(禾谷镰刀菌BDX4-5,BDX3-2,HwH4-5)的混合菌体蛋白为免疫原,制备多克隆抗体,建立了检测小麦赤霉菌的间接ELISA法。结果表明,小麦赤霉菌抗血清的效价为1∶640 000,灵敏度为0.005μg/mL。由ELISA法测定的结果可知,此抗体可以与镰刀菌发生特异性反应,而与其他供试的病原真菌的菌体蛋白呈阴性反应。对田间人工接种的小麦籽粒进行了ELISA定量测定,病菌的生物菌量与病害的发病程度相符合。     

4种常用杀菌剂对江苏省番茄枯萎病菌的毒力不同

正江苏省农科院植保所研究人员近期采用菌丝生长速率法测定了4种常用杀菌剂对36株番茄枯萎病菌的毒力。结果表明,不同杀菌剂对番茄枯萎病菌的毒力水平有显著差异,25%氰烯菌酯悬浮剂和50%多菌灵可湿性粉剂对菌落生长的抑制毒力最强,平均EC50分别为1.65μg/m L和2.91μg/m L;3%中生菌素可湿性粉剂的毒力次之,平均EC50为12.56μg/m L;75%百菌清可湿性粉剂的毒力最小,平均EC50为55.14μg/m L。不同地区的番茄枯萎病     

高产蛋白酶的纳豆杆菌菌种选育

以纳豆杆菌为出发菌株,进行紫外诱变,采用玉米蛋白粉为底物的平板分离法初筛及摇瓶发酵玉米蛋白粉复筛的筛选策略,以复筛发酵物中可溶性蛋白含量和抗氧化活力为指标进行筛选。结果表明,菌悬液在照射时间180 s,菌浓度为1×105个/mL下,突变株的浓醪玉米蛋白粉发酵液的可溶性蛋白质量浓度为(12.74±0.12)mg/mL,抗氧化活力达到(725.70±13.23)U/mL,突变株遗传性能稳定。     

根际耐盐真菌分离筛选及溶磷促生性能分析

溶磷微生物可提高土壤中有效磷含量,但目前筛选的溶磷菌株在盐渍化土壤中应用的潜力有限。以滨海盐生植物根际土壤为材料,分离筛选可用于盐碱土改良的高效耐盐解磷菌株,为盐碱土生物菌肥的研制提供优质菌种资源。结果表明,北戴河湿地及曹妃甸湿地的3种原生盐地植物根际土壤中共分离筛选无机磷降解菌株5株和有机磷降解菌株3株,命名为C1-C7和G1,均能耐受10%的盐浓度。菌株间解磷能力差异显著,D/d为1.05~1.81,无机磷降解菌解磷量为26.61~4415.00mg/L,与对照相比有效磷增量为0.80~4371.10mg/L;有机磷降解菌解磷量为1.96~5.79mg/L,有效磷增量-3.40~0.20mg/L,有效磷含量与D/d之间相关性不强。其中菌株C1降解无机磷能力最强,溶磷量达4397.70mg/L,吲哚乙酸（IAA）分泌量为33.07mg/L,经分子鉴定该菌株为草酸青霉,是一株高效耐盐解磷菌,兼具促生作用,可以考虑作为盐碱地改良菌肥的重点菌种,与植物协同改良修复中重度盐碱土,可有效提高盐碱地土壤肥力,有更好的应用潜力。     

蓝莓采后果实致腐菌的分离鉴定及植物精油对其抑制作用的研究

为明确山东泰安本地蓝莓采后果实致腐菌及植物精油的抑菌效果,本研究从自然发病的蓝莓果实上分离致腐菌株,采用传统真菌形态学、rDNA-ITS序列分析,结合构建系统进化发育树进行鉴定,并通过体外熏蒸抑菌试验研究植物精油的抑菌效果。结果表明:经鉴定该病原菌为尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum);6种植物精油对尖孢镰刀菌均有不同程度的抑菌活性,其中肉桂皮精油抑菌活性最强,对尖孢镰刀菌的抑制中浓度(EC_(50))和最小抑制浓度(MIC)分别为0.025 7μL/mL和0.060μL/mL。研究结果可为山东地区蓝莓货架期真菌病害的预测和防控提供一定的理论依据。     

一株产胶霉菌素菌株的ARTP诱变及筛选

试验旨在选育出胶霉菌素高产菌株,以胶霉菌素产生菌TY-009为初始菌株,利用常压室温等离子体(ARTP)诱变技术对产胶霉菌素的绿色木霉菌株进行诱变处理,并设置时间梯度,检测不同处理时间样品的胶霉菌素产量。通过平板筛选以及摇瓶复筛选出8株正突变菌株,其中产率最高达到0.86 mg/m L,较初始菌株的产率提高了45.76%。ARTP诱变方法快速、高效,对绿色木霉菌株的诱变效果良好,在提高胶霉菌素产量方面有很好的应用前景。     

生物农药武夷菌素对保护地番茄灰霉病的防治效果

为明确生物农药武夷菌素对番茄灰霉病的防治作用,通过室内毒力测定、温室盆栽和田间试验研究了武夷菌素对灰霉病菌的抑制作用和对灰霉病的防治效果。毒力测定结果表明武夷菌素能明显抑制灰霉病菌菌丝的生长,EC50为10.0802 μg/mL。温室试验表明,武夷菌素对番茄灰霉病有保护和治疗作用,而且保护作用优于治疗作用;武夷菌素对灰霉病有较长的持效期,400倍液处理番茄8天后再接种的防效仍然达61.32%。田间试验表明,对保护地番茄间隔7天、连续施药3次,第3次施药15天后2%武夷菌素100倍液的防效达83.93%,显著高于35%腐霉利悬浮剂600倍液的防效。此外对番茄果实品质的测定结果表明,使用2%武夷菌素后番茄除有机酸的含量无明显变化外,可溶性固形物、维生素C和可溶性糖等含量都有一定程度的升高。试验表明武夷菌素对番茄灰霉病有很好的防治作用,同时可以提高番茄果实品质,为番茄生产上合理应用生物农药提供了依据。     

高产纤溶酶蛹虫草菌株的诱变育种

蛹虫草中含有多种生理活性物质,是中国名贵中药材之一。前期试验发现其发酵液中含有纤溶酶,具有开发成一种新型溶栓药物的价值。以试验室保存的8株蛹虫草为试验菌株,以纤溶酶酶活为指标,进行液体深层培养,确定以C-5作为诱变出发菌株,对其进行原生质体紫外诱变处理,筛选得到31株抗制霉素突变株,抗性菌株以纤溶酶酶活为指标进行液体深层发酵,得到8株纤溶酶产量高于出发菌株15.00%以上的突变株,并从中筛选出3株遗传稳定性良好的正突变株CY-8,CY-18,CY-25,其纤溶酶产量分别比出发菌株提高了28.58%,28.22%,21.78%。