狐狸犬瘟热抗体的ELISA检测（英文）

从昌黎县某养殖小区中,采集经犬瘟热疫苗免疫接种后的狐狸全血,制备血清后,应用双夹心ELISA法对狐狸免疫接种犬瘟热病毒后85份样品进行抗体检测。结果显示,该养殖小区4个养殖户的85份样品有81例呈阳性,4例呈阴性,抗体水平较高,说明该地区犬瘟热的免疫和免疫程序得到大部分养殖户的重视,免疫保护效果较好。     

间接ELISA检测抗犬瘟热病毒抗体方法的建立

以大肠杆菌表达的犬瘟热病毒(CDV)重组核蛋白(GST-NP)经纯化后作为包被抗原,通过方阵ELISA滴定确定GST-NP的适宜包被浓度为1.31 μg·mL-1,并由此建立检测抗CDV抗体的间接ELISA方法.通过对已知抗CDV阳性血清及抗其他病毒血清的试验,表明所建立的间接ELISA可特异检测动物血清中的抗CDV抗体.另外,通过不同样品的重复试验以及不同批次的检测试验,证明该方法在用于检测CDV抗体时具有很好的重复性和稳定性.     

犬瘟热病毒单抗夹心ELISA检测方法的建立

以2株犬瘟热病毒(CDV)特异性单克隆抗体2H11和1G7为基础建立了检测CDV的单抗夹心ELISA方法.用单抗2H11作为捕获抗体,以辣根过氧化物酶(HRP)标记的单抗1G7为检测抗体,通过方阵试验确定2H11和1G7-HRP的最佳工作浓度分别为200和475 ng· mL-1.建立的单抗夹心ELISA方法具有良好的...     

2002年秋冬若干毛皮动物饲养场爆发狐狸犬瘟热的诊断

2002年秋冬,黑、吉、辽3省多处毛皮动物饲养场爆发狐狸犬瘟热,这是近年本研究室对毛皮动物疾病监测中发生的较为严重的疾病,不仅涉及的范围广,致死率也相对较高,有些饲养场动物甚至全群被屠宰,给饲养业造成了无法挽回的损失。为可靠、快捷、特异地确诊该病,笔者不仅采取了剖检、细菌学检查、病毒包涵体检查这些传统方法,而且选用PCR方法进行了对照研究,各种方法所得结论相符,并在此基础上对某未发病饲养场的狐群进行了带毒情况检测,为防治该病提供了可靠依据。     

检测禽霍乱抗体间接ELISA法的建立

以方阵滴定法选择出最适ＥＬＩＳＡ反应条件,用系列稀释法测定２１份血清样品的禽霍乱抗体ＥＬＩＳＡ效价（ＥＴ）,并与相应血清样品１：２００倍稀释的Ｐ／Ｎ值配对,作线性回归分析,得到回归方程ｙ＝２１９．６７３ａ－１８３．５７０（ｒ＝０．９４４）和标准曲线,从而建立起快速定量测定禽霍乱抗体的间接ＥＬＩＳＡ方法－阳阴比值ＥＬＩＳＡ效价法（Ｐ／ＮＩ－ＥＴ法）利用该法,血清样品只需作１：２００倍稀释,测定其Ｐ／     

狐狸脑炎的免疫效果监测(英文)

[目的]检测昌黎地区狐狸脑炎的免疫效果。[方法]从昌黎县泥井一养殖小区随机选择4个养殖户,85份取狐狸全血,制备血清,利用ELISA方法检测狐狸脑炎抗体,根据ELISA结果,计算样品实际浓度并判定其(CAV-1)抗体的存在与否。[结果]通过对85份血清样品的检测,4户养殖户狐狸脑炎免疫情况分别为:养殖户1的15份血清中,14例阳性,1例阴性,免疫合格率达93%;养殖户2的14份血清中,12例阳性,2例阴性,免疫合格率达到86%;养殖户3的30份血清中,29例阳性,1例阴性,免疫合格率达到97%;养殖户4的26份血清中,24例阳性,2例阴性,免疫合格率达到92%。该次检测免疫总合格率为93%。[结论]昌黎地区狐狸脑炎免疫效果良好,个别狐狸需要加强免疫。     

LH抗体间接ELISA检测方法的建立

以高纯度的促黄体素（LH）作为包被抗原,建立了检测LH抗体的间接ELISA法,该法的最适抗原包被浓度为1μg/mL,最佳酶标山羊抗小鼠抗体稀释度为1∶1500.该法只与LH阳性小鼠血清呈现阳性反应,而与LH阴性小鼠血清和小鼠促卵泡素（FSH）阳性血清呈现阴性反应.结果表明,该法具有良好的特异性和重复性,可用于LH免疫后抗体水平检测.     

IHA与ELISA法检测弓形虫IgG抗体的比较

目前．国内对弓形央特异性抗体的检测．大多采用间接红细胞凝集试验（IHA）。在检测中作者发现，同一份血清采用不同的检测方法其结果不尽相同，为此，作者采用IHA和酶联免疫吸咐试验（ELISA）进行比较，现将结果报道如下。三材料与方法正．五血清来源血清769份，其中638份来自湛江市区两间大医院产科门诊健康孕妇，131份来自本院附属医院临床科放疗和化疗前的恶性肿瘤患者。1．2试剂盒IHA试剂盒及IgG抗体ELISA试剂盒均购自兰州生物制品研究所，批号分别为：960725，961005。1．3方法每份血清分别用IHA、EI。ISA法按常现操作同…     

犬瘟热病毒研究进展

从犬瘟热病毒的生物学特性、主要基因组及结构肽、在细胞上的繁殖、检测方法、免疫及防治研究进展方面进行了综述,并在此基础上对今后的研究方向进行了探讨.     

抗犬瘟热病毒荧光标记单抗的制备和初步鉴定

1材料与方法 1．1材料 1．1．1病毒与细胞。犬瘟热病毒（CDV）、狂犬病毒（RV）、犬细小病毒（CPV）、犬副流感病毒（CPIV）、犬腺病毒（CAV）,非洲绿猴肾细胞（Vero）、犬肾细胞（MDCK）、猫肾细胞（F81）,犬瘟热病毒单克隆抗体CE3由军事医学科学院军事兽医研究所犬病研究中心提供。     

抗犬瘟热病毒荧光标记单抗的制备和初步鉴定(英文)

[Objective] The aim of the present study was to develop a direct immunofluorescence method for the diagnosis of canine distemper (CD) with FITC-conjugated monoclonal antibodies (FITC-McAb). [Method] The McAb against CDV, designated as CE3, was purified with protein G and labeled with FITC through agitation method. After purification and identification, the optimal working concentration of FITC-labeled CE3 was determined. Then 61 clinical samples of suspected canine distemper were detected by direct immunofluorescence assay. [Result] The absorption test, blocking test and specificity test showed that the labeled antibody had high specificity and sensitivity, but didn't have cross reaction with canine parvovirus (CPV), canine parainfluenza virus (CPIV), canine adenovirus (CAV) and rabies virus (RV). The optimal working concentration was 1∶80. The positive rate of clinical suspected samples was 48%. [Conclusion] The direct immunofluorescence assay developed in this study was rapid, specific and convenient, and had great significance for the early diagnosis of canine distemper.     

犬瘟热病毒的分离与鉴定

[目的]分离与鉴定犬瘟热病毒(CDV)的石河子流行株。[方法]对临床症状疑似犬瘟热和血清学(ELISA)检测为阳性的自然发病犬,取其淋巴结为病料,接种于非洲绿猴肾细胞系(Vero),进行病毒的分离;用RT-PCR检测感染CDV分离株特异性核酸。[结果]病料接种Vero细胞产生明显的细胞病变(CPE),用RT-PCR技术可扩增出CDV特异性核酸,扩增出的基因片段与预期设计的长度相同,所扩增的CDV分离株H基因片段与CDV C54标准强毒株核苷酸同源性为98.4%。[结论]该研究成功分离并鉴定了CDV石河子流行株,为犬瘟热(CD)的确诊提供了依据。     

抗犬瘟热病毒荧光标记单抗的制备和初步鉴定

[目的]建立利用单克隆抗体检测犬瘟热病毒的直接免疫荧光诊断方法。[方法]通过搅拌法,用异硫氰酸荧光素标记G蛋白纯化的抗犬瘟热病毒单抗CE3,对荧光抗体进行纯化、鉴定,并确定其最适工作浓度。对61份临床可疑犬瘟热病料进行直接免疫荧光检测。[结果]吸收试验、阻断试验和特异性试验结果显示,标记抗体具有高度的敏感性和特异性,与犬细小病毒（CPV）、犬副流感病毒（CPIV）、犬腺病毒（CAV）、狂犬病毒（RV）无交叉反应,其最优化工作浓度为1：80。对临床可疑犬瘟热病料的阳性检出率是48％。[结论]该研究建立的直接免疫荧光方法具有快速、特异和简便的优点,对犬瘟热疾病的早期诊断具有重要意义。     

犬瘟热病毒反转录—聚合酶链反应检测方法的建立及初步应用

根据 Gen Bank中 Barrett报道的犬瘟热病毒弱毒株 Onderstepoort的血凝蛋白基因序列 ,设计合成了一对能扩增 76 0 bp基因片段的引物。用异硫氰酸胍 -酚 -仿一步抽提法提取细胞总 RNA进行反转录 ,再以此产物为模板进行 PCR扩增 ,筛选出最佳扩增条件。结果以此对引物进行 PCR扩增能得到与设计片段大小相同的产物 ,并且不扩增犬细小病毒、犬 I型腺病毒、犬冠状病毒、狂犬病病毒的核酸。敏感性试验证实 ,此法能扩增出稀释 1 0 0 0倍的 CDV强毒细胞培养物 ( 1 0 5 .1 TCID5 0 /0 .1 ml)的反转录产物 ,其敏感性远高于电镜负染和荧光抗体染色法。经初步应用表明 ,此法可用于犬瘟热的临床诊断和实验研究。     

狐貉源犬瘟热病毒融合蛋白基因的同源性分析

2004—2006年,从黑龙江省和内蒙等地发病饲养狐、貉中分离获得6株犬瘟热病毒(CDV),分别命名为MS01、SC01、ZD01、GN01、HL01、NM01分离株。根据Genbank上发表的的CDV F基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR方法分别对6个分离株F基因进行克隆、测序,并推导其氨基酸序列,绘制出F基因的遗传进化树。结果表明:6个CDV分离株F基因的开放阅读框架(ORF)均为1 989 bp,编码663个氨基酸,蛋白结构中的13个Cys残基位点和4个潜在的糖基化位点均高度保守,其裂解位点的氨基酸序列为220R-R-Q-R-224R。遗传进化分析表明:6个分离株与CDV代表强毒株A75/17属于同一谱系,均为强毒株。其中,HL01株与海豹瘟热病毒2型(PDV-2)亲缘关系较近,与其它5个分离株关系相对较远。     

抗犬瘟热病毒单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立

[目的]筛选出稳定分泌抗犬瘟热病毒单克隆抗体的杂交瘤细胞株。[方法]用纯化的犬瘟热病毒(CDV)抗原免疫BALB/c小鼠,取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合,经间接ELISA和有限稀释法克隆杂交瘤细胞。研究了杂交瘤细胞的稳定性和染色体数,测定了单克隆抗体的效价并鉴定其特异性和亚型。[结果]经反复筛选和亚克隆后,共获得3株能稳定分泌抗CDV单克隆抗体的杂交瘤细胞株。3株单抗对CDV均有较高的特异性,与犬传染性肝炎病毒、犬细小病毒均不反应。3株杂交瘤细胞的腹水效价为1∶(8 000~128 000),细胞培养上清效价为1∶(256~512),染色体数为80~100。3株单克隆抗体重链均属于IgG1,轻链均属于κ链。[结论]该研究为研制CDV快速检测试剂盒奠定了基础。     

犬瘟热病毒感染的诊断方法比较

采用犬瘟热病毒抗原快速检测试纸和RT-PCR方法,对2008～2009年在兰州市和乌鲁木齐市的50份疑似犬瘟热患病犬样品进行检测对比,结果发现这2种方法的符合率达96%。犬瘟热病毒抗原快速检测试纸是一种比较可靠的临床检测犬瘟热病毒感染的方法,而敏感性和特异性很高的RT-PCR方法更适合研究领域。