沙棘多糖脱蛋白工艺的优化研究

植物多糖纯化过程中脱蛋白是较为重要的环节之一,为了提高多糖纯化效率,对沙棘多糖脱蛋白的工艺进行了优化研究。先选取了3种不同方法脱蛋白,即三氯乙酸法(TCA法)、沙维积法(Sevag法)、酶法与Sevag法联用,通过比较不同方法处理后的蛋白含量及多糖含量来确定最佳的脱蛋白方法。结果表明,对于三氯乙酸法而言,5%的三氯乙酸脱蛋白效率最高且多糖损失最小;对于Sevag法,反复处理5次脱蛋白效率相对较高且多糖损失率较小;对于酶法与Sevag法联用,酶法+Sevag法2次进行脱蛋白效果最好。并且3种方法相比,酶法与Sevag法联用脱蛋白效率相对最高,且多糖损失率最小。因此进一步设计正交试验来确定木瓜蛋白酶法脱蛋白的最佳条件,结果表明,木瓜蛋白酶法脱蛋白的最佳条件是酶加量5 mg/mL,酶解温度60℃,pH6,且此条件下的蛋白清除率为73.58%。     

肉苁蓉多糖脱蛋白工艺的优化

优选肉苁蓉多糖的脱蛋白工艺,为肉苁蓉多糖纯化提供试验依据。以脱蛋白率为指标,比较Sevag法、酶法及酶-Sevag联合法对肉苁蓉粗多糖的脱蛋白效果,采用正交试验优选最佳工艺。结果表明,Sevag法优于酶法和酶-Sevag联合法,Sevag法脱蛋白的最佳工艺为:三氯甲烷与正丁醇的体积配合比4∶1,料液体积比1∶3,搅拌40 min,脱蛋白4次。在该工艺下平均脱蛋白率为87.11%,RSD为1.34%;平均多糖保留率为83.05%,RSD为1.54%。试验证明该工艺稳定可靠,适用于肉苁蓉多糖的纯化。     

脱蛋白工艺对苦丁茶冬青叶多糖提取率的影响

采用乙醇对苦丁茶冬青叶进行脱脂,水提醇沉方法得到苦丁茶冬青叶粗多糖。采用Sevag法去除多糖中的蛋白质,研究了除蛋白次数对多糖及蛋白质含量的影响。结果表明,苦丁茶冬青叶多糖采用Sevag法脱蛋白3次以后再继续脱蛋白意义不大。     

亮菌菌索多糖脱蛋白方法研究

[目的]得到最佳的去除亮菌菌索糖复合物蛋白的方法。[方法]分别用Sevag法、酶法、三氯乙酸脱法、酶法与Sevag法结合法去除亮菌菌索糖复合物蛋白,筛选最佳脱蛋白方法。[结果]酶法与Sevag法结合脱蛋白的效果好,这时蛋白质含量仅为0.18%;酶法的最佳的条件：酶用量为0.5%,温度为40℃,水浴时间为0.5h,pH为6。[结论]酶法与Sevag法结合法是较好的脱蛋白法。     

褐蘑菇多糖脱蛋白方法研究

对褐蘑菇多糖脱蛋白方法进行研究.以糖保留率和蛋白去除率为指标,对Sevag法、三氯乙酸法、氯化钠法、氯化钙法、盐酸法和木瓜蛋白酶法6种脱蛋白方法进行比较.结果表明,酶法脱蛋白效果最好,Sevag法也能达到近似的脱蛋白效果.通过正交试验确定了Sevag法的最优条件为:样品:氯仿一正丁醇3:1,氯仿:正丁醇5:1,振荡20 min,添加试剂2次.     

蝉花虫草多糖脱蛋白研究

蝉花虫草粗多糖中杂有蛋白、核酸、酚类等物质,给多糖的分离纯化带来许多干扰,为了排除杂质干扰,获得较为纯净的多糖组分,采用Sevag法和大孔树脂吸附法相结合对蝉花虫草粗多糖进行了脱蛋白试验。结果表明:采用大孔树脂法或Sevag法均不能完全去除粗多糖中的游离蛋白,两种方法结合脱蛋白除杂效果较为理想,蛋白去除率达96%以上。初步分离获得大孔树脂水相洗脱部位和20%乙醇洗脱部位2种主要多糖组分。综合分析,先用Sevag法脱蛋白2~3次,再用大孔树脂AB-8吸附分离,或先大孔树脂AB-8吸附分离获得不同多糖组分,再用Sevag法辅助脱蛋白1~2次,两种方法去除蝉花虫草粗多糖中蛋白的效果均较好。     

关白附中多糖含量的测定

目的采用水提醇沉法提取关白附粗多糖.方法经反复冻融、酶法与Sevag法联合脱蛋白后测定关白附中多糖质量分数.结果多糖经苯酚-硫酸显色后在490 nm处用紫外可见分光光度计进行比色测定,测定结果：关白附中多糖质量分数达4.62%,平均加样回收率为97.72%,RSD=1.96%.结论该方法实验操作简便,准确可靠,重现性较好.     

DPPH检测碱提香菇菌丝体多糖的抗氧化性能研究

[目的]探讨碱提香菇菌丝体粗多糖抗氧化能力的影响因素。[方法]按Sevag法去除粗多糖中蛋白质,以考马斯亮蓝法、苯酚-硫酸法和DPPH法分别测定碱提香菇菌丝体粗多糖在脱蛋白过程中多糖含量、蛋白含量和清除自由基能力的变化。[结果]碱提香菇菌丝体水溶性多糖经Sevag洗脱后,多糖含量降低了33.10%;蛋白含量降低了97.08%;自由基清除率降低了74.38%。[结论]碱提香菇菌丝体多糖具有较高的抗氧化能力,并与其糖蛋白浓度成正相关,过分脱除香菇菌丝体多糖提取物结合态蛋白会降低其抗氧化活性。     

槐米多糖的提取和纯化工艺研究

为探讨中药槐米中可溶性粗多糖的提取工艺,通过单因素试验和L9(33)正交试验,研究了提取温度、料水质量比、提取时间对多糖提取率的影响。结果显示,3个因素对多糖提取率的影响顺序为提取时间、料液比、提取温度,最佳提取工艺为提取温度90℃,料水质量比1∶15,提取时间90 min,所得槐米粗多糖的提取率为5.10%。对槐米粗多糖脱蛋白方法的研究显示木瓜蛋白酶+Sevag法脱蛋白处理效果优于Sevag法和3%三氯乙酸法。     

茳芒水溶性多糖的提取与含量测定

目的从茳芒中分离出粗多糖,并建立其含量测定方法。方法沸水提取茳芒、醇析、Sevag法脱蛋白,分离出粗多糖,采用蒽酮-硫酸法制得有色糖醛衍生物,用分光光度法进行含量测定。结果该法平均回收率为98.5%,相对标准偏差为1.68% (n=9)。茳芒中多糖含量为3.14%。结论方法简便易行、稳定、快捷,可作为茳芒多糖的质量控制。     

金樱根多糖的超声提取研究

采用超声辅助提取金樱根多糖,通过水提醇沉法,得到粗多糖,再利用Sevag法脱蛋白,获得精制多糖。用苯酚-硫酸法测定多糖含量,以多糖含量为指标,评价提取条件。通过设计L_9(3~4)正交试验,可得最佳提取条件:提取温度70℃、料液比为1:50、提取时间为60min、提取次数为4次。     

洋葱粗多糖脱蛋白质方法比较

为探究洋葱多糖脱蛋白质的最优方法,以蛋白质脱除率、多糖损失率以及脱蛋白质处理后多糖的还原力和对羟基自由基(·OH)的清除能力为指标,比较了Sevag法、乙酸铅法、盐酸法、三氯乙酸法对洋葱粗多糖的脱蛋白质效果。结果表明:Sevag法脱蛋白质处理4次,洋葱粗多糖的蛋白质脱除率为79.44%,多糖损失率为22.30%,脱蛋白质处理后的洋葱多糖清除·OH的IC50值为16.00μg/m L,同时也表现出较强的还原力,对洋葱粗多糖的脱蛋白质效果最好,其次是乙酸铅法和盐酸法,三氯乙酸法最差。     

桑黄多糖脱蛋白方法与条件优化

对桑黄多糖提取液中的蛋白质去除方法和条件进行了优化.采用Sevag法与三氯乙酸(TCA)法去除桑黄多糖中的游离蛋白质,比较两种方法对蛋白质去除的影响.结果表明,三氯乙酸法去除蛋白质的效果优于Sevag法,其最佳脱蛋白条件为:5%三氯乙酸用量,处理3次,反应时间30 min,在此条件下,蛋白质去除率为82%,多糖损失率为10.8%.     

紫贻贝多糖脱除蛋白质方法的研究

探讨了酶法与Sevage法联用脱除紫贻贝（Mytilus edulis linnaeus）多糖蛋白。通过正交中心组合实验，应用响应面分析法考察酶法脱蛋白的工艺条件。结果表明，酶法脱蛋白的最优工艺参数为：pH7．1，枯草杆菌中性蛋白酶加入量0．5U／mg粗多糖，温度41℃，氯化钙加入量7．4mg／g，时间3h。在酶解的基础上应用Sevage法脱除游离蛋白，适宜的工艺条件为：氯仿：正丁醇=5：1，料液比4：1，振摇时间20min。酶法与Sevage联用法脱除贻贝多糖蛋白的脱除率为78．5％；与其它传统脱蛋白方法比较，该法适应范围广、样品损耗少、经济、快速、效果理想，为多糖的分离纯化研究提供了有益的参考。     

不同生态型云南引种玛咖的多糖含量及多糖纯化工艺研究

[目的]探讨不同生态型玛咖中的活性成分总多糖含量间的差异,并研究玛咖多糖的提取工艺.[方法]苯酚-硫酸法分别测定了云南丽江地区引种的4种生态型的玛咖块根中的多糖含量,并进行分析比较.玛咖多糖的基本纯化步骤为水提、醇沉、脱蛋白、脱色.[结果]依照颜色不同而划分为4种不同生态型的玛咖中总多糖含量有所不同,几种玛咖块根的总多糖含量顺序为黑色＞紫色＞绿色＞黄色.多糖纯化的最优方法为80％乙醇沉淀、Sevag法脱蛋白.[结论]玛咖多糖的含量与其生态型有一定的关系,因此不同生态型的玛咖,其生理活性可能有一定的差别.     

嗜热链球菌胞外多糖纯化条件的研究

[目的]探索一种分离纯化嗜热链球菌胞外多糖的途径。[方法]采用嗜热链球菌为材料,以MRS培养基为基础培养基,生产嗜热链球菌胞外多糖。采用酶法、TCA法、Sevag法、酶＋TCA法、酶＋Sevag法、TCA＋Sevag法、酶＋TCA＋Sevag法研究对嗜热链球菌胞外多糖去蛋白的影响,对得到的粗多糖用DEAE-Cellulose离子交换柱和葡聚糖G-100凝胶柱进行了分离,并用紫外光谱扫描对其的纯度进行鉴定。[结果]粗多糖用蒸馏水和0.1 mol/L NaC l通过DEAE-Cellulose离子交换柱可以分为中性多糖和酸性多糖,用葡聚糖G-100凝胶柱对酸性多糖的纯度进行了鉴定,得到单一的峰,紫外光谱扫描对酸性多糖进行全波长扫描,酸性多糖中不含蛋白质和核酸,证明得到的酸性多糖为纯多糖。[结论]酶＋Sevag法为最佳去蛋白法。     

紫贻贝多糖脱除蛋白质方法的研究

探讨了酶法与Sevage法联用脱除紫贻贝（Mytilus edulis linnaeus）多糖蛋白。通过正交中心组合实验，应用响应面分析法考察酶法脱蛋白的工艺条件。结果表明，酶法脱蛋白的最优工艺参数为：pH7．1，枯草杆菌中性蛋白酶加入量0．5U／mg粗多糖，温度41℃，氯化钙加入量7．4mg／g，时间3h。在酶解的基础上应用Sevage法脱除游离蛋白，适宜的工艺条件为：氯仿：正丁醇=5：1，料液比4：1，振摇时间20min。酶法与Sevage联用法脱除贻贝多糖蛋白的脱除率为78．5％；与其它传统脱蛋白方法比较，该法适应范围广、样品损耗少、经济、快速、效果理想，为多糖的分离纯化研究提供了有益的参考。     

冠突散囊菌胞外多糖的分离纯化

冠突散囊菌液体深层发酵滤液经浓缩,醇析,透析冻干得多糖粗品.粗多糖经Sevag法脱蛋白,DEAE-52阴离子交换柱层析纯化得到4种多糖.将含量最高的多糖ECP-A经Sephadex G-100葡聚糖凝胶柱层析得到纯化的冠突散囊菌胞外多糖(ECP-A1和ECP-A2),并测定其相对分子质量.用紫外光谱和红外光谱分析鉴定该多糖,紫外光谱分析未见蛋白质(280 nm)与核酸(260 nm)的特征吸收峰,红外光谱揭示ECP-A1具有典型的多糖特征吸收峰,表明ECP-A1和ECP-A2为单一均匀组分的多糖.     

樱桃叶多糖的提取、鉴别及定量测定

[目的]提取樱桃叶多糖,并对其进行定性鉴别和含量测定。[方法]先将樱桃叶经石油醚和乙醇脱脂、脱杂后,再采用水提醇沉法提取樱桃叶粗多糖(PPP),然后以Sevag法除去粗多糖中的蛋白,并用Molish试验(α-萘酚试验)、葸酮-硫酸法试验、Fehling试验与红外光谱分析、淀粉的碘试验对其进行定性鉴定;以硫酸-蒽酮法测定樱桃叶多糖的含量。[结果]经过鉴别可知,所提灰白色物质为多糖;经测定,其含量为29.7 mg/g。[结论]该方法简单,灵敏度高,重现性好,结果准确。     

碱提猴头发酵菌丝体多糖的分离、纯化及初步研究

从猴头发酵菌丝体中碱提出了水溶性粗多糖与碱溶性粗多糖，其中水溶性粗多糖经酶法和Sevage法联合脱蛋白后，经检验为均一组分，分子量约为6．53万，组成分析表明为葡聚糖。