菲律宾蛤仔木瓜蛋白酶水解物抗氧化活性研究

以菲律宾蛤仔蛋白为原料,用木瓜蛋白酶对其进行水解,采用正交实验方法研究酶解温度、酶解时间,加酶量和pH对水解度和抗氧化性的影响;通过检测羟自由基清除率、DPPH自由基清除、超氧阴离子自由基清除率和还原力评价水解物的抗氧化性。结果表明：水解度与抗氧化性之间没有正反相关系,当温度为45℃,时间为6 h,加酶量为1 500μg/g,pH为7.0时,水解度最大;温度为45℃,时间为2 h,加酶量为2 000μg/g,pH为7.0时,水解物的抗氧化活性最强;水解物对羟自由、DPPH自由基和超氧阴离子自由基均有很好的清除作用,并呈现浓度依赖性。因此,菲律宾蛤仔蛋白的木瓜蛋白酶水解物具有很好的抗氧化性。     

环境因子对菲律宾蛤仔吐出杂物的影响

在不同温度、盐度、pH和光照条件下,研究了4种因素对菲律宾蛤仔Ruditapes philippinarum快速净化的影响。结果表明:温度为15~20℃时,菲律宾蛤仔吐出杂物的速率较大,净化4 h后其吐出杂物的重量百分比达89.59%;盐度为25~30时,蛤仔吐出杂物的速率较大,净化4 h后其吐出杂物的重量百分比达88.4%;pH为7~8时,菲律宾蛤仔吐出杂物的速率较大,4 h后其吐出杂物的重量百分比达87.99%;菲律宾蛤仔处于黑暗条件时,其吐出杂物的速率较自然光照下大,4 h后其吐出杂物的重量百分比达85.92%。因此,快速净化菲律宾蛤仔的适宜条件应为:水温15~20℃,盐度25~30,pH为7~8,且选择黑暗条件下进行。     

不同温度和密封包装的活体菲律宾蛤仔理化和感官指标变化及货架期预测

为研究密封包装方式及温度对活品菲律宾蛤仔Ruditapes philippinarum品质的影响,将壳长为(40±5)mm的活品菲律宾蛤仔在0、5、10、15℃温度下采用真空、充氧、空气3种密封包装贮藏,分析存活期间蛤仔理化和感官指标的变化,并通过动力学反应结合Arrhenius方程推导活品菲律宾蛤仔pH值、菌落总数、糖原和色度差的货架期预测模型。结果表明:活品菲律宾蛤仔采用充氧包装更有利于其存活及品质的稳定,活品菲律宾蛤仔随贮藏时间的延长,感官评分及糖原含量下降明显,pH值、细菌总数及色度差均呈上升趋势;随贮藏温度升高,各品质主要指标的反应速率不断加快,其中,活品菲律宾蛤仔充氧包装的pH值、菌落总数、糖原和色度差,真空包装的色度差、pH值和糖原,空气包装的糖原及菌落总数所建立的货架期预测模型在一定温度范围内求得的预测值与实测值相对误差小于20%。研究表明,活品菲律宾蛤仔采用充氧包装更有利于其存活及品质的稳定,依据多项指标建立的货期架预测模型可为活贝无水载运密封包装及货架期预测提供数据参考。     

菲律宾蛤仔酶解物抗肺癌H1299细胞的活性研究

[目的]探讨菲律宾蛤仔酶解多肽的制备及体外抗肺癌H1299细胞的活性。[方法]选择胰蛋白酶酶解菲律宾蛤仔,经超滤得到3kD以下的酶解多肽,应用MTT法、HE染色和AO/EB染色等方法检测其体外抗H1299细胞的活性。[结果]3 kD以下的酶解多肽作用于H1299细胞后,MTT法检测结果表明该多肽能抑制该细胞增殖,呈剂量和时间依赖;经HE染色和AO/EB染色发现H1299细胞出现凋亡的形态学改变。[结论]菲律宾蛤仔酶解多肽能明显抑制H1299细胞的增殖并诱导细胞凋亡。     

不同降解工艺对螠蛏肉降解物活性的影响

用正交试验法对螠蛏组织的木瓜蛋白酶酶解工艺进行优选。以酶解液的生物活性为考察指标,研究酶解的温度、时间、pH和酶的用量对酶解产物生物活性的影响。得到用木瓜蛋白酶水解螠蛏组织的最佳条件为:pH 6,酶解温度60℃,酶加入量为底物的0.3%,水解6 h。在此条件下酶解产物的生物活性较高。     

硅烷化氨基磁性粒子的制备及其固定化木瓜蛋白酶的研究

通过硅烷化试剂(3-氨基丙基三乙氧基硅烷)对SiO2包覆的Fe3O4磁性纳米粒子进行表面修饰,得到了一种高亲水性、粒度均匀、表面富含氨基的磁性复合粒子,并以木瓜蛋白酶为模式酶,探讨了木瓜蛋白酶的最佳固定化条件,研究了固定化木瓜蛋白酶的酶学性质和动力学参数。结果表明:当戊二醛浓度在5%,固定化时间为4h,给酶量为10mg/g时,固定化酶的酶活最高;固定化酶的最适反应温度为70℃,最适反应pH值为6.8,Km值为34.48mg/mL,酶活回收率为46.5%。固定化酶在热稳定性和pH稳定性上较游离酶均得到了一定的提高。     

碱性蛋白酶酶解波纹巴非蛤制备小分子肽

以波纹巴非蛤为原料,用碱性蛋白酶酶解波纹巴非蛤肉蛋白制备小分子肽,并运用响应面方法设计优化波纹巴非蛤酶解的工艺条件。结果表明:在pH值6.5、液固比为3∶1、酶含量为2.50%、酶解温度为50.4℃、酶解时间122.60 min的条件下,小分子肽的提取率最高、为63.04%。     

鲮鱼蛋白酶解条件的研究

采用木瓜蛋白酶水解鲮鱼鱼蛋白,对酶解的工艺条件进行优化研究,分析酶浓度、底物浓度、温度、pH值、反应时间等因素对鲮鱼蛋白水解的影响。试验结果表明,木瓜蛋白酶水解鲮鱼蛋白的最佳条件为:酶浓度1.5%,底物浓度2.5%,酶解温度60℃,pH值6.0,反应时间3 h,在此条件下木瓜蛋白酶酶解鲮鱼蛋白所得酶解液中游离氨基态氮含量为585.20 mg/L。     

复合酶法提取金针菇多糖及光谱分析

研究了复合酶法提取金针菇(Flammulina velutipes)多糖的最佳工艺条件,并对金针菇多糖进行了光谱分析.采用木瓜蛋白酶、纤维素酶复合处理,对加酶质量比、酶解温度、pH、酶解时间4个因素对多糖提取率的影响进行了正交试验.确定了复合酶法提取金针菇多糖的最佳工艺条件为酶解温度60℃,复合酶添加量0.5％,加酶质量比(木瓜蛋白酶:纤维素酶)2∶1,pH 6.0,酶解时间2h,此条件下多糖提取率可达9.1％.     

菲律宾蛤仔酶解多肽抗前列腺癌DU-145细胞的活性研究

[目的]探讨菲律宾蛤仔酶解多肽抗人前列腺癌DU-145细胞增殖的活性。[方法]对菲律宾蛤仔内脏进行酶解,经超滤截取3 kD以下的多肽,应用MTT法、倒置显微镜观察和AO/EB染色等方法检测其体外抗DU-145细胞的活性。[结果]MTT法检测结果表明不同浓度的多肽对DU-145细胞有明显的生长抑制作用。通过倒置显微镜观察和AO/EB荧光双染观察到DU-145细胞出现细胞凋亡的形态学特征。[结论]菲律宾蛤仔3 kD以下的多肽具有抑制DU-145细胞生长,呈浓度和时间依赖性,并诱导细胞凋亡作用。     

酶法水解螺旋藻蛋白研究

[目的]研究木瓜蛋白酶对螺旋藻蛋白的水解作用。[方法]采用正交试验设计分析温度、酶浓度、pH值、水解时间对水解度的影响,利用葡聚糖凝胶柱Sephadex G-25层析测定螺旋藻多肽分子量。[结果]木瓜蛋白酶水解螺旋藻蛋白的最适宜工艺参数为:温度55℃,酶与底物比0.4%,时间3 h,pH值6.0。[结论]当水解度为82.6%时,2个螺旋藻多肽洗脱峰的分子量分别为2 992和231 Da。     

木瓜蛋白酶水解罗非鱼蛋白质的工艺研究

[目的]探讨采用木瓜蛋白酶水解罗非鱼蛋白质制备多肽水解液的方法。[方法]通过单因素试验研究了不同因素对木瓜蛋白酶水解罗非鱼蛋白质的影响,并以水解度为指标通过正交试验确定了木瓜蛋白酶水解罗非鱼的最佳水解工艺。[结果]单因素试验表明,在酶解时间约5h、底物浓度为4%、加酶量约5500U/g、pH值为7.0～7.5范围内,温度为50℃时,木瓜蛋白酶水解罗非鱼效果较好。正交试验表明,3因素的影响顺序为:加酶量>底物浓度>水解时间;最佳水解工艺为:水解液pH值7.5,加酶量为5500U/g,底物浓度为4%,温度50℃,水解6h,在此条件下水解度可达到37.89%。[结论]采用木瓜蛋白酶进行水解可获得较高水解度的酶解液,且鱼香浓郁,颜色正常,可用于制作调味品、口服液等。     

文蛤闭壳肌酶法水解工艺研究

[目的]探讨文蛤闭壳肌酶法水解蛋白液制备的最佳工艺。[方法]以加酶量(木瓜蛋白酶)、pH、温度为因素采取3因素3水平的设计方法对文蛤闭壳肌进行水解。[结果]以水解率为指标,得到各因素对文蛤闭壳肌酶法水解影响的大小顺序为加酶量﹥pH﹥温度。最佳水解工艺条件为加酶量8 000 U/g原料,pH 5.5,温度50℃,优化方案的水解率为32.4%。[结论]研究为文蛤闭壳肌的综合利用提供了一定的科学依据。     

木瓜蛋白酶酶解鸡骨渣的工艺条件优化

为了更好的利用鸡骨渣副产物,研究和优化木瓜蛋白酶水解鸡骨渣的工艺条件.用温度、加酶量、时间进行单因素实验,以水解度、残渣量和总氮回收率为评价指标,通过Box-Behnken响应面分析法优化木瓜蛋白酶水解鸡骨渣的工艺条件.结果表明:木瓜蛋白酶在温度65℃,加酶量0.1％,反应时间1.8h,自然pH值和1∶1的料液比条件下酶解鸡骨渣时,残渣量最低,水解度和总氮回收率最高,分别为24.6％,14.68％和71.68％,验证的优化结果与小试基本一致.说明木瓜蛋白酶适合用于酶解和综合利用鸡骨渣.     

离子交换树脂固定化果胶酶条件的优化研究

 以离子交换树脂为载体、戊二醛为交联剂,对果胶酶进行固定化。研究了温度、pH值、时间、加酶量、戊二醛浓度、交联温度、交联时间对果胶酶固定化效果的影响。研究表明,最佳固定化条件为：温度40℃,pH 5.5,固定化6 h,加酶量0.75 mL,戊二醛交联浓度0.1%,交联温度4℃,交联时间4 h。在此条件下固定化果胶酶的酶活回收率达到80%以上。     

溶胶-凝胶法固定木瓜蛋白酶条件的优化

［目的］探索正硅酸乙酯包埋木瓜蛋白酶的过程。［方法］以正硅酸乙酯为前驱体,采用溶胶-凝胶法制备固定化木瓜蛋白酶并优化试验条件。［结果］在固定化木瓜蛋白酶的制备过程中,卵胆比、酶原溶液含水量、酶原溶液加入量、胆固醇含量、木糖含量的极差分别为39.318、13.280、15.350、9.810和2.210。卵胆比对木瓜蛋白酶固定化的影响最大,酶原溶液加入量次之。制备固定化木瓜蛋白酶的最佳条件为：酶原溶液含水量为90 μl H2O/mg木瓜蛋白酶,木糖加入量为15 mg木糖/mg木瓜蛋白酶,正癸烷溶液中胆固醇含量为1.5%,卵磷脂与胆固醇的比值为4.5∶1.0（w/w）,固定化过程中酶原溶液、正癸烷溶液和前驱体溶液的加入量分别为80、500和600 μl。［结论］该研究为固定化木瓜蛋白酶的制备奠定了试验基础。     

响应面法优化蛋白酶提取贻贝蛋白的工艺参数

以贻贝蛋白质为原料,对比研究了pH值、加酶量、物料比、时间、温度等对木瓜蛋白酶、中性蛋白酶、胃蛋白酶和风味蛋白酶提取贻贝蛋白质的影响。结果表明,中性蛋白酶的蛋白质回收率最高。对中性蛋白酶进行优化试验,得出最佳的提取条件:pH值为6.3,加酶量为0.75%,酶解温度为42.9℃,184.9 min的酶解时间,可得到最大蛋白质回收率(72.2%)。通过氨基酸全自动分析仪分析,得出氨基酸含量酶解前后变化了1.453%。