黄芩苷抗热应激小鼠输卵管氧化损伤的研究

为降低热应激引起的动物机体活性氧(ROS)增加,减少组织氧化损伤和细胞过度凋亡。利用小鼠模型研究热应激对输卵管组织和细胞的损伤作用以及黄芩苷(Bai)对损伤的保护作用。将小鼠分为对照(Ⅰ)组;Bai(Ⅱ)组;热应激(Ⅲ)组和热应激加Bai(Ⅳ)组。用试剂盒检测组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和过氧化氢酶(CAT)活力;用Western Blot检测Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白-1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、苯醌氧化还原酶(NQO1)和血红素氧合酶-l(HO-1)蛋白表达;用免疫组化方法检测凋亡因子Apaf-1和Caspase-9蛋白表达。结果显示,与对照组相比热应激后小鼠输卵管组织MDA含量显著增加(P0.05),CAT和GSH-Px活力显著降低;同时,Nrf2、Keap1蛋白表达量显著升高(P0.05),凋亡因子Apaf-1和Caspase-9蛋白表达明显增加。注射黄芩苷后可显著(P0.05)降低小鼠输卵管组织MDA含量和Nrf2和Keap1蛋白表达量,降低凋亡因子Apaf-1和Caspase-9蛋白表达,并且显著增加(P0.05)SOD、CAT和GSH-Px活力。结果表明,黄芩苷能降低热应激小鼠输卵管组织的氧化损伤和细胞凋亡,其机制可能与激活抗氧化信号通路Keap1-Nrf2/ARE有关。     

CdCl2对牛卵母细胞体外成熟及凋亡的影响

利用不同浓度(0,0.8,1.6,2.4 μg/mL)的氯化镉(CdCl2)对处理牛卵母细胞前后对其成熟率、凋亡率、Ca2分布、线粒体膜电位、Bcl-2与Bax的基因表达的影响,初步为重金属对雌性哺乳动物生殖细胞发育及细胞凋亡机制的进一步研究打下基础.利用0,0.8,1.6,2.4 μg/mL的氯化镉(CdCl2)处理...     

奶牛HSP 70表达量与温湿指数的相关性研究

利用免疫学和分子生物学手段研究荷斯坦牛和娟-荷F1牛,在环境温湿指数(THI)影响下,血液淋巴细胞热应激蛋白70(HSP 70)的表达情况,旨在探索HSP 70表达量与THI相关性以及不同品种差异性。结果表明：(1)荷斯坦成乳牛在热应激和非热应激条件下均可表达HSP 70,严重热应激期(THI 93.5±2.1)HSP 70表达量分别是中度热应激期(THI 76.7±2.6)1.9倍(P<0.01)和非热应激期(THI 56.5±1.7)6.9倍(P<0.01),中度热应激期HSP 70表达量是非热应激期3.6倍(P<0.05),HSP 70表达量与THI呈强度正相关(R=0.91)(P<0.01),THI每上升1个单位,HSP 70表达量增加2172 OD/mm2;(2)在严重热应(THI 95.3)条件下,娟-荷F1成乳牛HSP 70表达量极显著高于荷斯坦牛(P<0.01)。 关键词：奶牛;热应激蛋白;温湿指数;相关性     

钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ对热休克小鼠胚胎成纤维细胞HSP70表达的影响

为证实热休克小鼠胎儿成纤维细胞中钙/钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinaseⅡ,CaMKⅡ)对热休克蛋白70(Heat shock protein70,HSP70)基因表达的影响及其作用机理,将体外培养的小鼠胎儿成纤维细胞(Mouse Embryonic Fibroblasts,MEF)随机分为39℃和41℃热处理组(分别处理0.5,1,1.5,2 h)和常温对照组(37℃),测定各组细胞CaMKⅡ和HSF1 mRNA的量。此外,将培养的细胞分为37℃和39℃CaMKⅡ特异性抑制剂(myr-AIP)处理组和相应的空白对照组,分别测定各组细胞HSP70、HSF1及其mRNA的量。结果表明,39℃热休克1 h后HSF1和CaMKⅡ的mRNA表达量极显著高于常温对照组,经过myr-AIP处理的39℃组细胞HSP70及其mR-NA含量显著低于39℃空白对照组,而37℃myr-AIP处理组与37℃对照组没有显著差异;myr-AIP对37℃组和39℃组的HSF1 mRNA和蛋白含量影响均不显著,却使p-HSF1的含量显著降低。热休克能增加CaMKⅡ和HSF1 mRNA的转录,且CaMKⅡ通过磷酸化HSF1促进HSP70基因表达。     

热应激小鼠附睾组织HSP70表达的研究

利用化学恒温培养箱对小鼠实施42℃1h/d的热应激处理,建立持续的全身热应激动物模型。在热应激持续到8d、13d、21d和35d时,颈椎脱臼处死对照组和热应激组小鼠,应用改良巴氏染色法检测附睾精子畸形率,免疫荧光组织化学和蛋白质印迹分析的方法检测附睾组织HSP70的表达。结果显示：热应激组小鼠附睾精子畸形率随着热应激持续时间的延长而升高,且显著（P<0.05）高于对照组;对照组小鼠附睾组织HSP70呈极强表达（+++）,而热应激组小鼠附睾组织HSP70的表达随着热应激持续时间的延长而减弱,当热应激持续到35d时呈极弱的表达（±）。结果表明：热应激损伤了附睾的功能,使附睾精子畸形率增加;附睾内HSP70为非热诱导型,HSP70可能在附睾精子的成熟过程发挥特殊的作用。     

附植前胚胎耐热应激损伤的MAPKs信号通路调控的研究进展

热应激(环境高温或热性疾病)致附植前胚胎发育阻滞/死亡是导致家畜(尤其是奶牛)夏季妊娠率低的主要因素,就热应激时附植前胚胎丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinases,MAPKs)信号通路的级联激活调节细胞增殖和分化,阻遏细胞凋亡,促进生长因子表达等研究和热应激时MAPKs信号通路对牛附植前胚胎的信号调控进行综述,重点阐述MAPKs通路对附植前胚胎的重要作用。通过对近年来国内外对附植前胚胎受热损伤和MAPKs信号通路的级联激活以及它们之间关联的研究进展的总结,并结合青岛农业大学产科实验室近年来对降低夏季由热应激引起的细胞凋亡的相关研究,来揭示附植前胚胎耐热应激损伤的MAPKs信号通路调控的研究进展。MAPKs信号通路在附植前胚胎的信号转导通路中占有重要位置。在热应激作用下,附植前胚胎经历氧化、凋亡和合成调节蛋白过程,胚胎能否存活,取决于其自身耐热能力及胚胎生存环境,并需要借助于信号通路的精细调控,不论是内因还是外因都可能通过MAPKs信号通路级联调控胚胎存亡。热应激时,MAPKs信号通路各成员在附植前胚胎中的生物学效应各不相同,并且相互联系,共同调控着附植前胚胎的分化、凋亡等过程,转导刺激信号,参与机体内的反应。热应激后胚胎细胞的生死取决于自身抗热能力(内因)和其在子宫/培养的生存环境(外因),并且内、外因素均与MAPKs信号转导通路有关。     

SD大鼠热应激模型的制作及评价

为了对热应激SD大鼠模型的制作及生理生化指标进行检测。将20只SD大鼠随机分成两组,一组为对照组,二组为模型组,模型组在霉菌培养箱内以40℃高温、50%相对湿度热攻击2 h,使热应激发生,对照组正常饲养,2 h后观察大鼠行为变化、死亡个体剖检、眼底静脉丛采血、检测各种理化指标和肝脏Hsp70表达量。结果表明：与对照组相比,模型组的pH升高,差异不显著(P＞0.05),Na⁺、K⁺浓度降低,其中K⁺达到差异极显著(P＜0.01);血浆蛋白TP、ALB、HB浓度下降,达到差异极显著(P＜0.01);血清酶ALT、GOT、ALP、LDH、CK活性均表现为升高,达到差异显著或极显著（P＜0.05或(P＜0.01);SOD浓度降低,差异极显著(P＜0.01),MDA浓度升高,差异极显著(P＜0.01);肝脏Hsp70相对表达量升高,差异极显著(P＜0.01)。说明模型组符合热应激指征,SD大鼠热应激模型制作成功。     

中草药方剂对鲫鱼热应激蛋白HSP 70表达的影响

选用4种中草药方剂AH、CD、Ⅳ和APS,每日按体质量的3%混饲鲫鱼30 d。采用实时荧光定量RT-PCR方法,监测适温(18℃)及热刺激(28℃)1 h后的鲫鱼脑及肝脏中HSP 70表达水平变化。试验结果表明,对照组鲫鱼体内2种组织中HSP 70的表达量在热刺激条件下均有不同程度的升高,且适温和热应激条件下,鲫鱼肝脏组织中HSP 70表达量均明显高于脑组织。而AH组、IV组和APS组热刺激后HSP 70 mRNA含量升高,但CD组热刺激后HSP 70 mRNA转录水平降低,且在肝脏中表达水平降低极为显著。4种方剂中尤以补血养气为主要功能的AH方剂在鲫鱼肝脏中对HSP 70表达水平有极大的促进作用,在适温及热应激条件下,分别是对照组的4.86,3.43倍。因此,中草药方剂AH对促进鲫鱼HSP 70基因高水平表达有较好的作用,有助于鱼体抵抗热刺激防止热损伤,可作为有效的鲫鱼抗热应激备选药物。     

不同氧气浓度对绵羊体外受精胚胎凋亡的影响

为了研究培养环境中的氧气浓度对绵羊体外受精胚胎发育的影响。比较了低氧环境(5%O2)和高氧环境(20%O2)中绵羊体外受精胚胎的发育能力和凋亡发生情况,同时利用Real-time PCR技术检测这两种氧气浓度下绵羊体外受精胚胎中凋亡相关基因Bax和Bcl-2的表达水平。结果表明：在这两种氧气浓度下发育的绵羊体外受精胚胎,细胞凋亡信号都起始于16-细胞期,且在胚胎各发育阶段发生凋亡的比率没有明显差异,但低氧环境组的囊胚发育率和囊胚细胞数都显著高于高氧环境组的（分别为45.9%、134;14.6%、106,P＜0.05）,且其囊胚细胞的凋亡指数也显著低于高氧环境组（分别为0.053、0.066,P＜0.05）;PCR的研究结果表明：不论是高氧环境还是低氧环境,在绵羊体外受精胚胎的各阶段都能检测到Bax和Bcl-2的表达。而且在囊胚阶段,低氧环境下的Bcl-2基因表达量明显高于高氧环境下的。低氧环境可以抑制绵羊胚胎细胞的凋亡,更有利于绵羊胚胎的发育。     

甲状腺素及胰高血糖素对高温条件下体外培养奶牛乳腺上皮细胞热休克蛋白表达的影响

为阐明甲状腺素及胰高血糖素对高温体外培养奶牛乳腺上皮细胞内热休克蛋白(HSPs)mRNA转录和蛋白表达的影响。本试验对体外培养的奶牛乳腺上皮细胞添加不同浓度的甲状腺素、胰高血糖素,分别于42℃培养12 h。采用RT-qPCR方法检测细胞内HSF-1、HSP27、HSP70和HSP90的mRNA表达丰度,ELISA方法检测HSP27、HSP70和HSP90的蛋白质表达。各浓度的甲状腺素、胰高血糖素均能显著降低高温条件下奶牛乳腺上皮细胞中HSP27、HSP70和HSP90 mRNA表达丰度(P0.05);各浓度的胰高血糖素能极显著的降低高温条件下HSP27、HSP70和HSP90的蛋白表达(P0.01),同时各浓度甲状腺素也能极显著的降低HSP27、HSP70的蛋白表达(P0.01),而仅0.01,0.1,2μmol/L的甲状腺素能极显著的降低HSP90的蛋白表达(P0.01)。结果提示,甲状腺素及胰高血糖素能明显降低高温条件下HSPs mRNA的转录和蛋白的表达水平。     

Experiment and Analysis in Apoptosis Induced by Steep Pulse in Vivo Wistar Mice

The paper Inspects the Bcl-2 and Bax protein expressions in vivo Wistar mice cells stimulated by steep pulse field, and puts forward the mechanism of steep pulse inducing apoptosis. Bcl-2/Baxprotein expression positive rate and apoptotic cell rate are determined by using immunohistochemical technique and TUNEL in 18 Wistar mice transplanted with Walker-256 cell line. Compared with control group, protein expressions of Bcl-2 and Bax in treated group decrease and increaserespectively. Apoptosis occurrswhen tumor tissue are impulsed by steep pulse field.     

苹果MdCaM的克隆及其对果实采后非生物胁迫的响应

为解析苹果钙调蛋白基因MdCaM在非生物胁迫过程中的功能.以秦冠苹果为材料,克隆了苹果MdCaM基因,并利用MEGA 5.0软件对其编码的蛋白进行了聚类分析,利用qPCR分析了MdCaM在采后损伤、低氧、高温等胁迫条件下的表达模式.结果表明,不同物种间钙调蛋白具有较高的同源性,MdCaM与拟南芥的钙调蛋白CaM1基因关系较近;qPCR结果表明,MdCaM在损伤、低氧胁迫(0 O2或3％ O2)后均呈先升高后恢复正常水平的表达模式,损伤后6h达到峰值,低氧(0 O2)处理1h后达到峰值;高温(20℃/40℃)诱导后其表达量高于同期对照组,并在处理后12 h达到峰值,表明该基因可能参与了高温胁迫下的全程响应.因此推测,MdCaM基因可能在苹果适应损伤、高温、低氧等逆境胁迫过程中发挥重要作用,可能参与了苹果生长发育过程中的逆境调控.为后继研究MdCaM的功能和作用机制奠定基础.     

高温及持续时间对华北落叶松SOD、POD活性的影响

【研究目的】研究了高温对华北落叶松保护酶活性影响规律,旨在为育苗和养护工作提供理论依据。【方法】设置W1（25℃ 对照）、W2（30℃ ）、W3（35℃ ）、W4（40℃ ）4个处理,温度处理持续时间设置为1、3、5、7、9、11 h。【结果】W4叶片内SOD活性5 h后均显著高于对照;茎内SOD活性W2、W3、W4处理在5 h处理下均与对照之间存在显著差异,11 h时,3个处理分别比对照降低了12.61%、1.93%、26.64%;根系内SOD活性W2、W3、W4的5、7 h处理均显著高于对照,11 h处理分别比对照降低了8.35%、5.99%、28.47%;叶片内POD活性W4的3、5 h处理分别比对照提高了109.75%、20.11%,差异显著;茎内POD活性11 h处理W3比对照提高了40.16%,差异显著;根系POD活性W4在5 h时达到最高值。【结论】华北落叶松35℃以上高温持续时间不宜超过5 h。     

葡萄逆境胁迫诱导启动子的克隆及表达分析

为了研究葡萄抗逆基因(CAN70200.1)的表达特性,采用PCR技术从葡萄中克隆了CAN70200.1基因上游一段长度为1 354 bp的启动子片段,命名为PCAN。采用Plant CARE和PLACE启动子在线预测工具分析表明,PCAN启动子序列具有CAAT-box、TATA-box基本的顺式作用元件和一些参与非生物胁迫、光和植物激素应答相关的顺式作用元件。为验证启动子的表达特性,将PCAN启动子连接到p CAMBIA1391Z载体GUS基因的上游,构建成植物表达载体p1391Z-CAN,并通过农杆菌介导法转化烟草,经PCR鉴定,获得转基因植株。对转基因烟草植株进行逆境胁迫处理发现,在干旱处理120 min后,PCAN启动子活性达到最强;而4℃低温处理30~60 min时,PCAN启动子活性达到最强,表明PCAN启动子具有低温和干旱胁迫诱导表达特性。     

水稻去泛素化酶OsUCH-L5基因的克隆及表达分析

通过生物信息学及RT-qPCR(quantitative Real-time PCR,RT-qPCR)的方法对水稻OsUCH-L5基因进行探究.生物信息学预测结果表明,该基因全长837 bp,编码278个氨基酸;OsUCH-L 5蛋白的相对分子质量为31.64 kDa,等电点为5.66,为亲水性蛋白,具备Peptida...     

Apoptosis of Hepatoma Cells HepG-2 Induced by Shikimic Acid from FRUCTUS ANISI STELLATI and Its Mechanism

[Objective]To research the apoptosis of hepatoma cells HepG-2 induced by shikimic acid from FRUCTUS ANISI STELLATI and its mechanism. [Methods]Hepatoma cells HepG-2 at logarithmic phase were randomly divided into drug group and control group. Shikimic acids from FRUCTUS ANISI STELLATI at the concentrations of 0. 125,0. 5 and 1 g /L were used. Inhibitory effects of shikimic acids on HepG-2 cell proliferation were detected by MTT method. Effects of shikimic acids at the concentrations of 0. 125,0. 5 and 1 g /L on the cell cycle of hepatoma cells HepG were researched by Flow Cytometer. Expression of Bcl-2 and Bax proteins were detected by immunocytochemistry detection. [Results]Results of MTT test showed that shikimic acid(0. 125,0. 5 and 1 g /L) had significant inhibitory effects on the proliferation of in vitro human liver cancer HepG-2 in a time-and dose-dependent relationship(P 0. 05). Shikimic acid blocked the hepatoma cells HepG-2 at G1 phase,so that the cells could not enter into S phase for DNA synthesis,which restricted the cell proliferation. Results of immunocytochemistry detection showed that protein expression of Bcl-2 decreased significantly,while Bax expression enhanced significantly,so that the proportion of Bcl-2 to Bax reduced. [Conclusions]shikimic acid blocked the hepatoma cells HepG-2 at G1 phase,and had significant inhibitory effects on the proliferation of human hepatoma cell through reducing the proportion of Bcl-2 to Bax.     

喂食细菌对家蚕血淋巴酚氧化酶活性及其基因表达的影响

[目的]为研究细菌刺激后,家蚕血淋巴酚氧化酶活性及其基因表达变化情况,[方法]利用实时荧光定量PCR的方法检测了喂食大肠杆菌和金黄色葡萄球菌后不同时间(6、12、24、48h)酚氧化酶原基因PPO1和PPO2的表达情况,同时测定了酚氧化酶的活性。[结果]喂食两种细菌6h、12h和24h,家蚕血淋巴中PPO1和PPO2基因上调表达,酚氧化酶活性显著高于对照组。喂食革兰氏阴性菌大肠杆菌后,PPO1和PPO2基因相对表达量及酚氧化酶活性在12h达到最高值,而喂食革兰氏阳性菌金黄色葡萄球菌在24h达到最高值。[结论]家蚕感染革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌,酚氧化酶活性及其基因表达存在一定差异,暗示感染不同细菌后诱发的家蚕免疫机制并不完全相同。。