基因克隆技术

综述了基因克隆常用技术包括图位克隆法、转座子或T－DNA标签法、同源序列法、表达序列标签（EST）法和差异表达基因分离方法的原理、应用、应用的潜力和限制因素。     

植物新基因克隆策略和技术进展

对基于表达序列标签(EST)的基因克隆、基于同源序列的候选基因法、基因图位克隆、基因转座子标签技术和差异表达基因分离技术等植物新基因克隆策略和技术进行了总结,并对其优缺点进行了简要介绍。     

mRNA差异显示技术及其在植物生理研究中的应用

简述了ｍＲＮＡ差异显示技术的基本原理及其在基因表达差异、基因的鉴定与克隆、激素调控机理、抗逆性机理等方面的应有,并对其在植物生理研究中存在的问题与改进的方法做了介绍。     

植物基因分离方法及其评述

总结了上前植物基因分离的方法及其成就,概括出６种植物基因分离的方法,即序列克隆法、功能克隆法、从子标签法、图谱分离法、消减杂交法和差异表达分析法（ｃＤＮＡ－ＲＡＰＤ、ＤＤ－ＰＣＲ、ＰＤＡ和ＳＳＨ）,并对其特点和适用范围进行了评述。     

植物雄性育性相关基因的克隆方法

文章基于植物分子生物学的研究成果．介绍了几种克隆植物雄性育性相关基因的方法．其中包括mRNA差异显示技术、染色体步行法（Chromosome walking）、基因标签法（Gene tagging）、基因序列同源克隆法等。     

针茅属植物基因组DNA提取方法的研究

植物体内所含的蛋白质，酚类，单宁，色素及多糖等物质影响Tag酶的聚合效率。是使PCR扩增反应失败的主要因素。本研究以针茅属植物为材料，对CTAB法，SDS法，简易提取法和高盐沉淀法提取的针茅DNA进行了比较研究。结果表明：CTAB法适合于针茅属植物基因组DNA的提取，采用这种方法提取的DNA能很好的用于PCR扩增。     

高等植物基因克隆的策略

基因克隆是进行植物基因功能研究的先决条件。随着拟南芥、水稻、杨树等植物全基因组序列的公布,标志着基因组进入后基因组研究时代是分子生物学发展的必然趋势,同时为进一步克隆植物中控制重要性状的主效基因提供强大的基因组数据支撑。目前有较多的基因克隆传统及衍生技术,文章综述了图位克隆、同源克隆、转座子标记法、表达序列标签法、差异表达基因克隆等5种应用比较广泛的基因克隆技术,并就其发展方向和策略作了展望。     

差异表达基因克隆技术的新进展

综述差异表达基因克隆技术的新进展，简要介绍抑制性消减杂交法、消减杂交法、ｍＲＮＡ差异显示法、代表性差式分析法。     

植物基因克隆方法在作物上的应用

本文在参考大量文献的基础上，综述了包括功能克隆、定位克隆、表型克隆、PCR扩增以及DNA芯片技术等植物基因克隆的方法及其在作物上的应用，并对各种方法的应用进行了比较，展望了它们的应用发展前景。     

植物抗病性信号传导调控基因的克隆与表达检测方法的研究

建立了从不同植物中克隆抗病性信号传导调控基因及检测其表达的方法，并优化了相关条件。用RT-PCR和PCR方法从拟南芥、烟草、番茄、中华鳖中克隆了7个信号传导通路中18个调控基因的cDNA和DNA序列，它们分别是：抗病基因Pto介导的蛋白激酶级联中的Pti4、Pti5和Pti6，细胞编程死亡通路中的Hinl和hsr203，水杨酸介导的系统性获得抗病性通路中的NPRI，乙烯信号通路中的ETRl、ERSl、CTRl、EIN2和ERFl，茉莉酸信号通路中的CO/1，核黄素信号通路中的RFBP和LR，脱落酸信号通路中的ABF3、ABF4和ABHI，以及调控不同信号通路的通调基因NDRl。进一步研究了这些基因表达的定量测定方法：用细菌激发子harpinE4处理植物，提取RNA作为cDNA第1链合成的模板，以在真核生物中广泛同源和高度保守的细胞伸长翻译因子基因EFlα为内参，用半定量RT-PCR法测定基因mRNA的积累，可以比较准确地检测不同基因的相对表达水平。     

从植物抗病基因的克隆看其基因结构、功能和进化

对植物抗病基因的克隆技术及已克隆的一些抗病基因作了概述,归纳了抗病基因的类型、产物结构和功能,对抗病基因进化的可能分子机制也作了讨论.     

棕榈科植物基因克隆方法的优化

【目的】优化棕榈科植物基因克隆方法,为其基因组学研究和分子育种奠定基础。【方法】通过优化DNA提取和目的片段回收步骤,检测其对提取DNA质量和纯度、目的片段回收率与阳性克隆等的影响。【结果】DNA提取方法优化后,提取获得的DNA完整性好,无杂质、无弥散现象,质量较好,其OD260/OD280在1.88-1.93;优化前不同样品提取的DNA仅为40.0-60.0 ng/μL,优化后样品DNA在104.5-214.8 ng/μL,为优化前的2-3倍;目的片段回收方法经优化后,可以从扩增的PCR产物中回收获得条带较清晰的目的片段,其胶回收率较高;对回收的目的片段进行亚克隆,以gyspy74引物鉴定阳性克隆,每个样品的菌落均在700 bp左右扩增获得清晰的目的条带,且其中3个菌落的目的条带测序结果与预期核酸序列一致。【结论】优化后的方法适用于棕榈科植物基因克隆。     

有机农业虫害管理策略及方法

为进一步推动害虫绿色防控新理念,解决有机农业中的虫害问题,基于Web of Science核心合集数据库（SCI-Expanded数据库）和中国科学引文数据库收集整理了近年来国内外有机农业虫害发生现状及绿色有效的虫害管理策略及方法。结果表明： 有机农业呈现持续增长态势,但农田系统中害虫种类及数量不断增加,为害程度逐年加重,带来了严重的经济损失,越来越多的科研工作者加入到有机农业虫害防治的队伍中,并在有机农业虫害防治方面获得了一批新技术,取得了一些新成果。本研究综述了我国有机农业主要害虫发生现状,提出了有机农业虫害的管理策略和绿色防治技术,为有机农业虫害治理提供了参考。     

玉米叶序对生候选基因筛选及克隆

根据近等基因系对生叶序玉米H4D与互生叶序玉米H4d的转录组测序数据筛选出的差异基因,结合玉米对生基因OPP-1和OPP-2的SSR分子标记定位,将19个玉米对生叶序差异基因进行了染色体定位。利用比较基因组学和生物信息学分析对染色体定位的差异基因进行了详细分析,发现11个对生叶序差异基因具有同源基因报道,对其进行荧光定量PCR验证后发现基因表达量变化与转录组数据较为一致,其中8个基因在对生中表达量显著提高,3个基因在对生中表达量下降。结合差异基因染色体定位与同源性分析,筛选确定了SSR标记定位之间的5个差异基因作为候选基因。启动子分析表明这些基因启动子区域发现了多个与激素和光信号诱导相关的作用元件。以对生玉米近等基因系H4D和H4d的四叶期茎尖生长点c DNA为模板,对候选基因进行克隆,成功克隆出GRMZM2G077744_T01,GRMZM2G064845_T01和GRMZM2G348959_T01基因。经测序和氨基酸序列比对,发现在H4D和H4d中,GRMZM2G077744_T01基因氨基酸序列同源性为97.30%,GRMZM2G064845_T01同源性为98.85%,GRMZM2G348959_T01同源性为98.50%。氨基酸序列上的差异可能与玉米叶序对生变异具有密切关系。     

两个类ADP-葡萄糖转运蛋白基因的克隆和特征

搜索数据库获得了2个新的类似ADP-葡萄糖转运蛋白(BT)基因的序列,通过PCR直接克隆了这2个基因。这2个基因都编码406个氨基酸组成的分子量为43 647Da的蛋白。BT2 A在蛋白氮端有一段59个氨基酸残基组成的叶绿体信号肽,而BT2 B的叶绿体信号肽长度为58个氨基酸。BT2 A在信号肽后的是一段71个氨基酸长可变区,碳端是276个氨基酸长的功能域;BT2 B可变区由72个氨基酸组成,碳端也是276氨基酸长的功能域。半定量PCR表明,BT2 A为组成型表达,而BT2 B则在胚乳发育的中晚期表达。BT基因进化树分析表明,BT2 A和BT2 B基因是在禾谷类作物分化后由基因倍增产生的。     

植物抗病毒基因工程育种策略

本文简要地介绍了近年来植物抗病毒基因工程育种策略及其机制的研究进展。将植物抗病毒基因工程的策略归纳为3个方面进行了综述,即病毒来源基因、非病毒来源基因和多基因策略。对于各种植物抗病毒基因工程策略介导的抗性主要分为蛋白质和RNA介导的抗性。