山东地区羊绿脓杆菌的分离鉴定及系统发育分析

近年,山东省规模化羊场羊患慢性化脓性肺炎病例频繁出现,为了探明其病原及特点,本试验在流行病学调查基础上,对山东省6个地区10个规模化羊场的病、死羊进行临床症状观察、病理学检查,对所分离的菌株进行形态特征、理化特性检查及药敏试验、致病性试验和16SrRNA基因的分子鉴定。结果显示,从剖检病死羊的肺、肝、气管等组织中分离出6株细菌(分别命名为PA1~PA6),分离菌株镜检均为革兰阴性、短杆菌,对庆大霉素高度敏感,对小鼠具有较强致病作用。综合流行病学和生化试验结果等判定,该6株分离菌均为绿脓杆菌。对6株绿脓杆菌16SrRNA序列分析表明,该6株分离菌与已知的绿脓杆菌16SrRNA序列的同源性为99.9%~100%,与报道的绿脓杆菌菌株B136-33、YMD-4以及LCQ-4的序列位于一个分支上,属于一个亚群,其中与北京株B136-33的进化关系更近,核苷酸同源性为100%。     

从高热病猪组织血液内分离大肠埃希氏菌分析

通过分析分离自病猪血液、器官的细菌生物学特性,探讨高热病猪发病病因,寻找预防、治疗的方法。取3头高热病猪组织、血液用羊血及伊红美兰琼脂平板培养、分离出的3株菌株,经VITEK2革兰氏阴性细菌鉴定卡全自动微生物鉴定;ASTGN10药敏卡,药敏分析系统鉴定;小鼠毒力实验;血清凝集实验;16SrRNA基因鉴定;致泻毒力基因鉴定。结果3株均为大肠埃希氏菌(Escherichiacoli)大肠埃希氏菌,并经16SrRNA基因鉴定与GenBank比对结果,3株细菌均鉴定为大肠杆菌。3株菌对氨曲南、头孢吡肟等药物敏感,而对庆大霉素、四环素等耐药。菌株对小鼠有较强的致病力。菌株与159种大肠杆菌诊断血清均不凝集,说明这些菌不是常见的大肠杆菌致病型。致泻毒力基因鉴定均为阴性。分离出3株非常见致病型大肠杆菌在当地猪高热症暴发中起到重要作用。高热病猪尽早配合使用敏感抗生素治疗有减轻病情、减少病死率的效果。     

禽霍乱病原菌的鉴定与主要特性分析

从河北某养鸡场80日龄左右鸡群所发生的禽霍乱病死鸡中，分离到了相应病原菌多杀巴斯德氏菌（pasteurella multocida）。对分离获得的16株菌（HPs-1至HPs-16）进行了形态特征、培养特性、理化特性等方面的鉴定，同时选取代表菌株（HPs-1）进行了16SrRNA基因的分子鉴定，测定了16SrRNA序列，构建了系统发育树。结果表明分离鉴定的16株细菌均为多杀巴斯德氏菌败血亚种（P．multocida subsp．septica），所测代表菌株的16SrRNA基因长度142bp，在GenBank登录号为AY999017，该菌株与检索出的22株巴斯德氏菌属（Pasteurella Trevisan，1887）细菌16SrRNA基因序列同源性均在98％～100％。另外，药敏试验结果显示分离株对供试的青霉素G等33种抗菌药物高敏、对克林霉素敏感、对苯唑青霉素等3种耐药。     

山东部分地区毛皮动物肺炎克雷伯氏菌的分离鉴定及系统发育分析

为确诊近两年造成毛皮动物(狐狸、貉子、水貂)死亡的主要细菌性病原,本研究在流行病学调查基础上,对新鲜病死毛皮动物进行临床症状观察、病理学检查,同时取病变肝、肺、气管为样品分离纯化细菌,对所分离的细菌进行形态特征、理化特性检查及药敏试验、致病性试验和16S rRNA基因的分子鉴定.结果显示,从剖检病死毛皮动物的肺、肝、气管组织等均检出同种细菌,分离菌株对菌必治和舒巴坦高度敏感,对小白鼠具有较强致病作用,与已知的肺炎克雷伯氏菌16S rRNA序列的同源性为98.6％～100％.综合分析,该分离菌株为克雷伯氏菌属的肺炎克雷伯氏菌.     

猪链球菌的分离、16SrRNA鉴定及药敏实验

从湖南娄底某猪场病猪组织中分离出6株细菌,通过培养特性、细菌染色镜检、16sRNA基因扩增及序列BLAST分析等系统鉴定,确定为猪链球菌。并对分离菌与GenBank中收录的17株猪链球菌的16SrRNA基因序列的进行同源性比对,结果显示,6株分离菌的16SrRNA基因序列与收录菌株同源性为99%以上。药物敏感试验表明,分离细菌对头孢类、β内酰胺类药物高度敏感、对磺胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类、四环素类药物产生耐药。而6株分离细菌对氯霉素类药物的敏感,但敏感性有差异。     

鹌鹑致病性大肠杆菌分离鉴定及抗生素敏感性试验

为确诊四川某养殖场产蛋鹌鹑死亡的病因,本试验采集病死鹌鹑的肝脏、心血等组织分离纯化细菌,并进行了细菌形态观察、生化特性检查、16S r RNA分子鉴定以及药物敏感性试验。结果显示:从肝脏、心血等组织中分离的细菌为致病性大肠杆菌;分离菌对环丙沙星、阿米卡星、大观霉素、链霉素、庆大霉素、头孢噻肟的敏感率均在84%以上,对氨苄西林、卡那霉素耐药。     

青岛地区兔肺炎克雷伯氏菌分离鉴定

对青岛地区某兔场病死兔的病变器官组织进行细菌分离和纯培养,对所分离的细菌进行形态特征、理化性质和16SrRNA序列的分子鉴定和测序,人工感染以及药敏试验,判定为肺炎克雷伯氏菌。代表菌株16SrRNA序列长度1414bp,与GeneBank登录号为EU360123.1的肺炎克雷伯氏菌16SrRNA序列同源性100%,人工感染小鼠24h全部死亡,对供试的诺氟沙星等药物高度敏感,对供试的强力霉素等中毒敏感,对头孢拉定等耐药。应用筛选的敏感药物,并采取综合防治措施,使疫情得到了有效控制。     

鲟源荧光假单胞菌的分离鉴定及药敏特性分析

从患病鲟体内分离到1株细菌,通过形态学观察、生理生化特性鉴定、16SrRNA基因序列分析及系统进化树构建等方法对分离菌种属进行确定,采用纸片扩散法对分离菌进行药物敏感性分析。结果显示:分离菌为革兰阴性杆菌;可分解葡萄糖和木糖,氧化酶和鸟氨酸脱羧酶试验阳性;16SrRNA基因测序分析与荧光假单胞菌(Pseudomonas fluorescens)同源性大于99%,在系统发育树上与荧光假单胞菌聚为一枝;药敏结果显示,分离菌对氧氟沙星、多西环素、复方新诺明等敏感,对氟苯尼考、卡那霉素、阿莫西林等耐药;人工感染试验结果显示,该菌对小鼠有致病力。本研究为贵州地区鲟细菌性疾病预防及合理用药提供依据。     

贵州中蜂蜂房哈夫尼菌的分离鉴定及药敏试验

为准确诊断贵州某蜂场发生的细菌性中蜂疾病,并提供防制方案,本试验进行了细菌分离纯化、形态学观察、生化试验,应用细菌16SrRNA基因通用引物进行基因扩增测序,测序结果在NCBI上进行比对分析,选取同源性较高的5个属的30株细菌的16SrRNA序列进行同源性分析并构建系统进化树,并对该分离菌进行动物回归试验和药敏试验。结果显示,分离菌为革兰氏阴性短杆菌,生化试验初步鉴定为蜂房哈夫尼菌;16SrRNA序列与哈夫尼杆菌属同源性最高,在97.0%~99.6%之间;遗传进化树表明,分离菌在哈夫尼菌菌属这一分支;动物回归试验显示,分离菌对中蜂有一定致病性,表明该蜂场受到蜂房哈夫尼菌感染,造成了蜜蜂的副伤寒;药敏试验结果表明,分离菌对青霉素、红霉素、克林霉素等耐药,对阿米卡星、复方新诺明、氧氟沙星等敏感。本试验结果为中蜂感染蜂房哈夫尼菌病的研究提供了一定参考,并能对蜂场提供合理用药意见。     

一株仔猪屎肠球菌的分离及其种属鉴定

为分离出可用作猪用微生态制剂的肠道益生菌株,本研究选择锦州市凌海大业乡生态猪场为试验采样点,采集10日龄左右健康仔猪肠道粪样12份。利用MRS琼脂培养基分离培养初筛目标分离菌株的形态特征和培养特性,再通过生理生化鉴定法和16SrRNA基因分子鉴定法,最终确定1株分离菌为屎肠球菌,并命名为LN／EFl312株。为后续肠道益生球菌的益生功能研究奠定了物质基础。     

一株猪源屎肠球菌的分离及其种属鉴定

为分离出可用作猪用微生态制剂的肠道益生菌株,本研究选择锦州市凌海大业乡生态猪场为试验采样点,采集10日龄左右健康仔猪肠道粪样12份。利用MRS琼脂培养基分离培养初筛目标分离菌株的形态特征和培养特性,再通过生理生化鉴定法和16SrRNA基因分子鉴定法,最终确定1株分离菌为屎肠球菌,并命名为LN/EF1312株,为后续肠道益生球菌的益生功能研究奠定了物质基础。     

一株羊驼源产气荚膜梭菌的分离与鉴定

2018年7月份,扬州大学动物医院接收到宿迁送检的1份羊驼病料,根据发病情况及剖检结果怀疑为产气荚膜梭菌感染,对其肠道、肝脏、肾脏病料进行厌氧菌分离培养,对分离菌进行了纯化、革兰染色、生化反应、16SrRNA基因序列分析以及药敏实验。结果表明:分离菌为产气荚膜梭菌,该菌对环丙沙星、氟霉素、氨苄西林敏感。     

新疆石河子规模化牛场多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及药敏试验

为了确定石河子地区某规模化牛场出现呼吸困难、咳嗽、病牛消瘦甚至死亡的病因,本研究以病牛病变组织为研究对象,采用常规细菌分离鉴定和细菌16SrRNA序列分析来鉴定菌种,以及多杀性巴氏杆菌种特异性基因Kmt-1和各个荚膜血清型特异性基因(hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJ、fcbD)PCR扩增来确定细菌的血清型,同时应用纸片扩散法对分离细菌进行药物敏感性试验和小鼠感染试验。结果表明,从病变的肺组织中分离到1株菌落为灰白色、露珠状、不溶血,染色为革兰阴性球杆状细菌,生化鉴定结果符合巴氏杆菌特征,同时16SrRNA序列分析与NCBI上已公布的多杀性巴氏杆菌16SrRNA序列同源性在99%以上;对多杀性巴氏杆菌特异性基因Kmt-1以及各血清型特异性基因PCR扩增只扩增到Kmt-1和hyaD-hyaC特异性基因片段;分离菌株对链霉素、庆大霉素、卡那霉素耐药,对其他30种药物敏感,同时感染小鼠全部死亡。结果显示从病牛体内分离到1株毒力较强的血清A型多杀性巴氏杆菌。     

肺炎克雷伯氏菌强毒株的分离鉴定及16-23SrRNAITS序列分析

为确诊疑似仔猪肺炎克雷伯氏菌(K.pneumonia)感染,并研究其病原的致病性、耐药性、16-23SrRNA ITS系统进化特征,本研究从云南因肺炎、腹泻而大量死亡的仔猪中分离到1株革兰氏阴性短粗杆菌,命名为KP14013,对其进行生化鉴定、16SrRNA鉴定,研究其对小白鼠和仔猪的致病性,并对其16-23SrRNA ITS基因进行测序和遗传进化分析。结果显示,KP14013分离株生化特征与肺炎克雷伯氏菌相符,其16SrRNA与GenBank中23株肺炎克雷伯氏菌代表株之间的同源性均为99%,将KP14013鉴定为肺炎克雷伯氏菌。KP14013对小白鼠半数致死量(LD50)为3×101.8 CFU,腹腔注射3×108 CFU可使仔猪100%致死。16-23SrRNA ITS系统进化关系结果表明,KP14013与GenBank中收录的15株肺炎克雷伯氏菌形成进化树的一个分支,属于同一个亚群,它们之间的核苷酸同源性为98.4%~99.2%。本研究证实了肺炎克雷伯氏菌是该起仔猪腹泻大量死亡的病原;KP14013分离株为毒力极强菌株,具有多重耐药性,其16-23SrRNA ITS与GenBank中收录的肺炎克雷伯氏菌代表株之间核苷酸存在差异,可用于肺炎克雷伯氏菌菌株间的鉴别。     

北京顺义区肉鸭大肠杆菌及鸭疫里默氏菌感染情况的调查

为了调查北京顺义肉鸭大肠杆菌及鸭疫里默氏菌感染情况,对该区约50个小型肉鸭养殖农户,采集具有典型心包炎、肝周炎和气囊炎特征的病(死)鸭肝脏、心脏、脾脏等组织,经细菌分离纯化、革兰染色、瑞氏染色及16S r DNA序列分析从而鉴定菌株。共分离得到大肠杆菌33株,鸭疫里默氏菌9株。这42株细菌的药敏试验表明,鸭疫里默氏菌对大多数抗菌药物敏感,而大肠杆菌则表现出较强的耐药性。     

仔猪大肠杆菌病病原分离鉴定及自家苗的制备

试验以腹泻仔猪肠道为试验材料,对其肠道内容物进行细菌学检查及分离,对从肠道内容物分离得到的优势菌进行形态特征、生化特性和16S r DNA分子鉴定,判定为大肠杆菌。此菌株对供试的小白鼠有致病性,测其LD50为1.26×107 CFU/只。菌株对供试的氧氟沙星等敏感;对庆大霉素等中度敏感;对林可霉素等耐药。推断此菌株是导致仔猪腹泻致死的主要病原菌。利用病死猪肠道制作自家苗,给产前母猪注射,其后代仔猪腹泻率大幅降低。研究弄清了四川某猪场仔猪腹泻的原因,减少了猪场的经济损失,也为仔猪大肠杆菌病的预防和治疗提供了一定参考,为临床早期合理用药提供一定借鉴。     

羊源D型多杀性巴氏杆菌的分离鉴定及毒力基因检测

为了确定石河子地区规模化羊场出现呼吸道症状死亡羊的细菌性病原,采用常规细菌分离鉴定方法、细菌16SrRNA序列分析以及多杀性巴氏杆菌特异性基因kmt,从病变肺组织分离鉴定细菌,利用5个荚膜血清型特异性基因确定其血清型,扩增分离株的16个毒力相关基因,分析分离菌致病性和对常用抗菌药物的耐药性。结果表明,从病羊的病变肺组织中分离鉴定到一株血清D型多杀性巴氏杆菌,具有较强的致病性;携带8个毒力相关基因,其片段序列与NCBI上己公布的多杀性巴氏杆菌参考株同源性在99%以上;分离株对青霉素、林可霉素、庆大霉素、复方新诺明耐药,对其他23种药物敏感。     

牦牛源维氏气单胞菌的分离鉴定

四川省阿坝藏族羌族自治州某牧场牦牛发生腹泻和肝脏肿大为特征的疾病,本实验的目的是对病料进行细菌的分离鉴定.采集2头病死牛鼻拭子、肛拭子及肝脏样本进行细菌分离,采用16SrRNA基因和gyrB基因的序列测定鉴定细菌种,从6份病死牛样本中分离到6株维氏气单胞菌.分离菌对小鼠有较强的致病性,能导致小鼠肺脏出血和小肠肿胀出血;...     

牦牛源干燥棒状杆菌的分离与鉴定

一只牦牛屠宰后肝有干酪样结节,为了探究其形成原因,本研究对该牦牛肝进行细菌的分离培养,对所分离可疑致病菌的16SrRNA以及rpoB基因序列进行扩增和序列分析,并用Vitek 2全自动微生物鉴定仪进行生化表型的鉴定,用K-B法进行药敏试验。结果显示,经细菌分离培养得到一株革兰阳性、棒状、可疑致病菌;其16S rRNA扩增片段大小1 483bp,GenBank序列编号为MH000696,该菌的16SrRNA与干燥棒状杆菌GD34株(KF928790.1)等的相似性最高,序列一致性为99%,系统进化树显示,本菌与干燥棒状杆菌在同一进化分支上;rpoB基因扩增片段大小434bp,GenBank序列编号为MH006608;Vitek 2全自动微生物鉴定仪鉴定为变异库克菌,可信度为93%。该菌对妥布霉素、氨曲南、头孢哌酮、米诺环素等多种药物高度敏感。综上所述,分离的细菌为干燥棒状杆菌,但基因序列,如rpoB等以及生化表型均存在一定程度的变异,本研究为兽医临床上该菌的分离和鉴定提供了依据,且为该菌的致病性研究奠定了基础。     

半滑舌鳎致病性荧光假单胞菌的分离鉴定及其感染的病理损伤

2015年6月,河北省秦皇岛市某养殖场半滑舌鳎发生以腹水、烂尾、内脏器官肿大、出血与坏死为特征的疾病。从自然发病的半滑舌鳎肝脏与肾脏中分离到1株细菌,通过细菌形态观察、培养特性、生化特性分析、动物试验和16SrRNA基因序列分析等方法,对该病原菌进行了分析鉴定。结果显示:致病菌株为革兰阴性杆菌,培养特性、生化特性分析与荧光假单胞菌较接近,以16SrRNA基因为遗传标记构建系统发育树,致病菌菌株与荧光假单胞菌菌株相似性为99%。结果表明:本次引起半滑舌鳎腹水烂尾病的病原菌为荧光假单胞菌。对分离到的菌株进行了常用抗药物的药敏试验,该菌对氧氟沙星、氨曲南、红霉素等药物高度敏感,对利福平、妥布霉素等药物中度敏感,对卡那霉素、新霉素不敏感。组织病理学观察发现,荧光假单胞菌感染半滑舌鳎对多个组织器官都造成明显的病理损伤,尤其是肝脏、肾脏、脾脏、肠及脑的损伤较为严重,表现为明显的淤血、出血,变性、坏死及炎症细胞浸润。