蓖麻蚕蛹虫草的培育及其虫草素腺苷分析

利用蓖麻蚕蛹人工接种蛹虫草菌种,在适宜条件下,可长出子实体,子实体丛生,经过30～40d,子实体成熟,测定虫草素与腺苷含量分别为640mg/kg,146.5mg/kg。     

蛹虫草不同栽培菌株产虫草素及腺苷差异性研究

目的：测定不同栽培菌株蛹虫草子实体中虫草素和腺苷的含量,为人工蛹虫草的质量评价提供依据。方法：采用高效液相色谱法测定11个栽培菌株人工蛹虫草样品中虫草素和腺苷的含量。结果：所测定的不同栽培菌株人工蛹虫草的腺苷含量为0.1%-0.17%,虫草素含量为0.06%-0.39%,表明蛹虫草不同栽培菌株的虫草素含量变化较大,腺苷含量则相对稳定。     

不同栽培基质蛹虫草的主要有效成分含量比较

选用大米和桑蚕蛹基质栽培蛹虫草,比较子实体生长情况并分别测定子实体和基质部分的虫草素、腺苷及多糖含量。结果表明,桑蚕蛹基质蛹虫草子实体色泽金黄、密度大,生物转化率高,达95.72%,其子实体虫草素、腺苷和多糖含量分别为223.41 mg/100 g、294.78 mg/100 g和254.91 mg/100 g;大米基质蛹虫草子实体呈浅黄色、分散,生物转化率为22.78%,其子实体虫草素、腺苷和多糖含量分别为246.73 mg/100 g、118.43 mg/100g和999.55 mg/100 g;栽培后桑蚕蛹基质的虫草多糖、虫草素和腺苷含量分别为3 785.27 mg/100 g、446.19 mg/100g和120.52 mg/100 g;栽培后大米基质的多糖含量高达8 852.23 mg/kg,虫草素、腺苷含量低。建议对基质中的高含量有效成分进行针对性开发利用。     

广东虫草与冬虫夏草及蛹虫草的成分比较

对人工驯化的广东虫草(Cordyceps guangdongensis)子实体进行成分分析,并与冬虫夏草和蛹虫草进行比较.结果表明,广东虫草的虫草酸含量较高,达151.00 mg/g,高于冬虫夏草(127.80 mg/g)和蛹虫草(39.00 mg/g);腺苷为0.81 mg/g,是冬虫夏草的3倍;虫草素为0.02 mg/g,粗蛋白为27.5%;水解氨基酸总量为15%.     

响应面法优化蛹虫草菌液体发酵条件

以蛹虫草菌(Cordyceps militaris)为试材,用单因素试验筛选适宜温度后,利用响应面法优化培养基,最后用优化的条件和培养基进行摇床6d和摇床6d+静置培养10d的液体发酵试验,研究不同培养条件下蛹虫草菌液体发酵后菌丝体产率以及静置培养对虫草素积累量的影响。结果表明:蛹虫草菌适宜温度为25℃,优化培养基为蔗糖4.34%、酵母粉3.06%、硫酸亚铁0.027%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸铵0.04%、硫酸镁0.13%、维生素B10.08%、硫酸锌0.06%;摇床6d和摇床6d+静置10d后,发酵液中的菌丝体产率分别为2.568g/100mL和3.389g/100mL,后者菌丝体产率比初始培养基增加了1.73倍,而虫草素积累量分别达到568.329μg/mL和862.893μg/mL,后者比初始培养基中增加了1.56倍。     

基于响应面的蛹虫草菌质固体发酵工艺条件优化

优化蛹虫草固体发酵菌质工艺以缩短发酵周期,提高有效成分含量,有效节约成本。通过单因素筛选和响应面优化法对碳源、氮源、料液比、小麦装料量、接种量、培养时间和腺苷浓度等培养条件进行优化。结果显示,蛹虫草固体发酵菌质最佳培养方案的小麦装料量为15 g,料液比为1.0∶1.3,接种量为2 mL,培养时间为17 d,营养液碳源为可溶性淀粉、氮源为黄豆粉,腺苷的质量浓度为76 g·L^-1。此条件下虫草素含量为3.718mg·g^-1,与初始配方相比,含量提高了4.47倍。工艺优化后的蛹虫草菌质固体发酵周期短,有效成分含量提高,研究结果为后期发酵菌质的开发利用奠定了基础。     

蛹虫草固体发酵生产虫草素的条件优化

用直径6 cm,高10 cm聚乙烯培养罐固体发酵蛹虫草(Cordyceps militaris),以固体发酵产物中虫草素含量为指标,从16个蛹虫草菌株中筛选出虫草素含量最高的菌株,考察固体发酵该菌株的培养基组成、培养时间、培养基装量、料液比、培养温度、接种量和添加物对虫草素含量的影响,得到了有利于蛹虫草固体发酵产虫草素的培养条件:培养罐装20 g小麦,按小麦干重6％的量分别加入玉米粉和黄豆粉,按料液比1∶1.4(w∶v,以小麦干重为基准)加入营养液(g/L:2.0 K2HPO4·3H2O,0.5 MgSO4·7H2O,16甘氨酸),培养温度为26℃,时间46 d,接种量10％.     

不同接种物对蛹虫草子实体营养成分的影响

以蛹虫草菌株母种的表层菌皮、母种基内菌丝和成熟的待分离的新鲜子实体顶端接种到液体培养基进行液体培养,分析比较栽培所获得不同蛹虫草子实体的有效成分得出:以母种表层菌皮接种液体培养所获得的子实体虫草素和硒元素含量最高;以母种培养基的基内菌丝接种培养栽培所获得子实体的虫草酸、腺苷、虫草多糖、SOD酶、蛋氨酸、酪氨酸含量较高。     

蛹虫草深层发酵产虫草素培养基的优化

以蛹虫草(Cordyceps militaris(L.)Link)NS-810为菌种,通过对接种量的考察,探索不同孢子浓度对蛹虫草液体一级种制作效果的影响;通过单次单因子试验和正交实验,优化深层发酵产虫草素的最佳培养基,筛选制备蛹虫草液体一级种和液体发酵生产虫草素的最佳工艺。结果表明:孢子浓度3.0×10~8 cfu·mL~(-1)时制作的母种最适合作为蛹虫草菌种扩大培养中的一级种子液;深层发酵的最佳培养基配方为葡萄糖25g·L~(-1)、土豆100g·L~(-1)、鱼蛋白胨18g·L~(-1)、(NH_4)_2SO_40.8g·L~(-1)、KH_2PO_41.0g·L~(-1)、MgSO_4·7H_2O 0.5g·L~(-1)、蚕蛹粉5.0g·L~(-1)、维生素B118mg·L~(-1)、水1L。优化后虫草素的总产量为1 144.31mg·L~(-1),较基础培养基提高了1.46倍。分别以价格低廉葡萄糖和鱼蛋白胨作为发酵培养基的碳源和有机氮源,利于蛹虫草产业化发酵生产虫草素。     

低温刺激对蛹虫草子实体产量及品质的影响

目的:研究温差刺激对蛹虫草子实体干重、虫草素和腺苷含量的影响.方法:以蛹虫草同一子实体头部和中部组织分离的异核体菌株CMS1和CMZ1为材料,采用小麦固体栽培基质室内培育子实体,在原基形成阶段进行温差刺激,培养45 d后,测定子实体数及干重、虫草素和腺苷质量分数.结果:低温10℃处理,CMS1菌株处理6 h/d时,子实...     

蛹虫草和冬虫夏草主要活性成分含量比较

对米饭培养蛹虫草、柞蚕蛹虫草和冬虫夏草中的虫草素、虫草多糖、虫草酸和氧基酸含量进行了分析比较,结果表明：米饭虫草中的虫草素、虫草多糖和虫草酸含量均高于柞蚕蛹虫草和冬虫夏草,尤其是虫草素含量为2465mg/kg,是冬虫夏草的20倍;三种虫草均含有18种氨基酸,氨基酸总量最高的是柞蚕蛹虫草为27130mg／100g,是冬虫夏草的1．4倍。     

蛹虫草液体发酵过程中虫草素含量的分析

以2个蛹虫草菌株2014072503-1和2014072301-1为试材,采用高效液相色谱(HPLC)法,分析蛹虫草40d液体发酵过程中其发酵液中的虫草素产量,研究了蛹虫草发酵时间对虫草素产量的影响,旨在确定虫草素开始产生、产量迅速升高、产量最高的3个关键时间点,为下一步对以上时间节点的菌丝样品进行转录组测序分析,进而挖掘与虫草素产量密切相关的候选基因奠定基础。结果表明:2个蛹虫草菌株发酵过程中产虫草素的起始时间点为发酵后3d,迅速升高的时间点是12d,虫草素产量最高的时间点2014072503-1号菌株为发酵后37d,而2014072301-1号菌株为发酵后34d。2014072301-1号菌株发酵产生的虫草素含量高(382.43μg·mL~(-1)),时间短(34d),更适于作为生产虫草素的菌株。     

硒和钙对蛹虫草活性物质含量的影响

向培养液中分别添加不同浓度的亚硒酸钠、氯化钙,用液体振荡培养法培养蛹虫草菌丝体,用HPLC法测定虫草素与腺苷含量,用苯酚-硫酸法测定多糖含量,用高碘酸钠比色法测定虫草酸含量.以研究2种微量元素对蛹虫草菌丝体中虫草素、腺苷、多糖和虫草酸含量的影响.结果表明:向培养液中添加适量的硒或钙,可显著提高蛹虫活性物质含量.添加15 mg/L亚硒酸钠,虫草素和虫草酸含量比对照组分别提高了29.0％和34.9％;添加16 mg/L氯化钙,虫草素含量比对照提高24.05％.     

氮源和无机盐对蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响

以小麦为主要栽培基质,通过添加不同的氮源和无机盐,选用优质蛹虫草菌株CM-16进行人工培养,探索这2个因素对蛹虫草子座产量及虫草素和腺苷的影响。结果表明:栽培过程中选用6g·L~(-1)的蛋白胨作为最佳氮源,子座干样质量、虫草素和腺苷的生成量均较高,分别为43.1g·盒~(-1)、3.95mg·g-1和2.35mg·g~(-1)。无机盐则选择1.0mg·L~(-1)的硫酸亚铁最为合适,此时子座干样质量、虫草素和腺苷的生成量分别为48.8g·盒~(-1)、4.98mg·g~(-1)和2.10mg·g~(-1)。     

柞蚕蛹虫草不同部位多糖含量的测定

采用苯酚-硫酸法测定柞蚕蛹虫草不同部位多糖含量,结果表明柞蚕蛹虫草多糖百分含量子实体部分高于蛹体,子实体多糖含量是蛹体的3.27倍。     

蛹虫草有性生殖研究

从2种人工栽培的蛹虫草子实体上分离子囊单孢子,将单孢子单独培养和两两配对培养来诱导产生子实体,以研究蛹虫草有性生殖机理。结果表明:蛹虫草有性生殖方式存在多样化,除了具有典型的二极异宗配合外,还存在可孕单孢子。将单孢子对峙培养结果发现在两单孢子间有扇形杂交区的配对培养产生子实体的能力强,没有扇形杂交区的两单孢子配对培养产生子实体的能力弱。     

代料栽培蛹虫草营养液的优化

为提高蛹虫草子实体的产量,通过单因素试验和正交试验优化添加营养液,最终确定以大米为主料的代料栽培蛹虫草的营养液配方:玉米粉200 g/L,酵母膏8g/L,MgSO41.5 g/L,KH2PO4 2.5 g/L.添加此营养液,蛹虫草瓶产量(干)5.26 g,比对照增加了1.83倍.     

适合虫草素积累的蛹虫草液体培养条件的优化

为了探索蛹虫草液体发酵中适合虫草素积累的培养基和发酵培养条件,以半定量薄层色谱法为检测手段,以虫草素含量为指标,通过单因素试验及正交试验优选的方法,最终优选出的培养基配方为蛋白胨15 g·L-1、葡萄糖20 g·L-1、磷酸二氢钾1 g·L-1、七水合硫酸镁0.5 g·L-1、维生素B110 mg·L-1、荼乙酸2 mg·L-1.优选出的培养条件为发酵液pH7,培养温度25℃,光照时间12h.     

高产虫草菌素蛹虫草菌株的紫外线诱变选育

蛹虫草是重要的药食用真菌。通过对蛹虫草原生质体进行紫外诱变处理,筛选到1株优良的菌株CMM-81。经固体发酵,虫草菌素和腺苷含量分别为0．437％和0．036％,是出发菌株的2倍。菌株CMM-81经连续15代传代培养,虫草菌素和腺苷的含量保持稳定。     

野生蛹虫草分化株子实体表型性状的分离

对采集于辽宁西丰、辽宁大石桥的3株（C5、D1、D5）野生蛹虫草后代6个分化株（C5-1、C5-2、D1-1、D1-2、D5-1、D5-2）进行菌落形态、农艺性状、营养成分对比,并利用ISSR分子标记技术进行遗传差异性分析。结果表明,来源于同一株野生蛹虫草子实体的分化株菌落生长速度、子实体高度、子实体密度多数有显著差异。ISSR标记分析表明同一株野生蛹虫草的分化株D1-1与D1-2、D5-1与D5-2基因型差异较大。来源于同一株野生蛹虫草的分化株虫草素、腺苷含量差异显著。