甘蔗茎RNA提取方法研究

[目的]找出提取甘蔗茎RNA的适宜方法.[方法]采用SDS法、试剂盒法、GHCL法3种方法提取甘蔗茎基因组RNA,并对提取的RNA进行质量比较.[结果]试剂盒法提取的RNA产率高,电泳条带清晰,RNA完整性好,无明显降解,OD260/OD280比值较好.试验操作要点:在RNA的提取过程中必须使操作温度保持在4 ℃左右(操作时温度可以通过垫加冰块来实现),从而充分抑制RNase的活性;植物组织称取要适量,将植物组织在液氮中充分研磨后,应在液氮还未充分挥发前将研磨物加入Eppendorf管中,样品要充分研磨,通过加大提取液中变性剂的量防止在此过程中内源RNase将植物组织中RNA降解;在用酚/氯仿/异戊醇抽提及氯仿/异戊醇抽提过程中,吸取上清液时,应尽量小心,不要吸取中间层从而防止酚类、蛋白质类的干扰.此外,提取的RNA还应及时保存于-70 ℃低温下,避免频繁冻融影响其质量以及RNA的降解.[结论]试剂盒法是有效提取甘蔗茎RNA的方法.该研究为甘蔗的分子生物学研究奠定了基础.     

保存温度对黄颡鱼肝组织总RNA质量的影响

以黄颡鱼肝脏为试验材料,用TRIzol法提取肝脏组织总RNA,将试验样品置于不同温度下保存,在1%琼脂糖凝胶中电泳检测RNA的质量。结果显示:在低温没有密封储存的情况下,RNA保存较长时间,完整性好;-70℃下RNA可以保存8个月,-20℃下RNA可以保存4个月;在其他温度条件下,若密封保存,4℃下可保存2周,10℃下可保存4 d以上,20℃下保存3 d时条带清晰,保存4 d时条带模糊,30℃下保存2.5 d时条带变得模糊,到3 d时全部降解,40℃下保存1 d条带清晰,保存2 d条带变得模糊,保存2.5 d时完全降解。此外应注意的是,RNA如果暴露于空气中,5 h内所有试验组的RNA大多数降解。     

甘蔗茎RNA提取方法研究（摘要）（英文）

[目的]找出提取甘蔗茎RNA的适宜方法。[方法]采用SDS法、试剂盒法、GHCL法3种方法提取甘蔗茎基因组RNA,并对提取的RNA进行质量比较。[结果]试剂盒法提取的RNA产率高,电泳条带清晰,RNA完整性好,无明显降解,OD260/OD280比值较好。试验操作要点：在RNA的提取过程中必须使操作温度保持在4℃左右（操作时温度可以通过垫加冰块来实现）,从而充分抑制RNase的活性;植物组织称取要适量,将植物组织在液氮中充分研磨后,应在液氮还未充分挥发前将研磨物加入Eppendorf管中,样品要充分研磨,通过加大提取液中变性剂的量防止在此过程中内源RNase将植物组织中RNA降解;在用酚/氯仿/异戊醇抽提及氯仿/异戊醇抽提过程中,吸取上清液时,应尽量小心,不要吸取中间层从而防止酚类、蛋白质类的干扰。此外,提取的RNA还应及时保存于-70℃低温下,避免频繁冻融影响其质量以及RNA的降解。[结论]试剂盒法是有效提取甘蔗茎RNA的方法。该研究为甘蔗的分子生物学研究奠定了基础。     

样品不同保存方法对猕猴桃总DNA提取效果的影响

以美味猕猴桃幼叶为试材，采用改良的CTAB法对-20℃、-70℃和硅胶脱水干燥保存的猕猴桃叶样中总DNA的提取效果进行了比较分析。结果表明，3种不同方法保存的样品所提DNA的完整性与纯度均较好，其OD260／OD280值为1．8以上，能完全被EcoR I酶切消化．1％琼脂糖凝胶电泳谱带明亮清晰，并获得条带清晰、多态性好的PCR扩增图谱。鉴于野外远距离采样的操作方便，硅胶脱水干样保存法较为理想。     

蓝莓果实总RNA提取方法比较

为了在蓝莓果实中提取出高质量RNA,比较了改良CTAB法、TRIzol法、试剂盒法和SDS法4种方法.结果表明:改良CTAB大量法能有效地去除果实中的多糖和酚类物质,获得的总RNA质量较好,纯度较高.28s∶18s的亮度约为2∶1,OD260/OD280在1.8～2.0,OD260/OD230的比值都大于2.0,且得率也较高,幼果期为23.978 μg·g-1,完熟期为30.817 μg·g-1.完全能适用于RT-PCR、转录组测序等分子生物学实验.     

成熟葡萄果实高质量总RNA提取方法的建立

成熟葡萄果实中富含多酚多糖类物质,对提取组织RNA造成了很大的干扰.研究分别采用3种试剂盒法和改良的十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法,以成熟的葡萄果实为材料,提取总RNA并检验其产量和质量,其中,改良CTAB法是在提取缓冲液中加入了聚乙烯吡咯烷酮、亚精胺、β-巯基乙醇及高浓度的氯化钠.对各组RNA产物进行质量检测,发现3种试剂盒法均没有得到可用的RNA,只有改良的CTAB法能够从新鲜采摘和贮藏的葡萄果实组织中提取出高质量的总RNA,基本无降解和污染,且得率可达到85μg/g以上.进一步研究表明,改良的CTAB法提取得到的RNA可用于后续的RT-PCR、qRT-PCR和CDS扩增试验.改良CTAB法适用于成熟葡萄果实RNA的提取,所得RNA质量良好,满足后续分子试验的需求.     

滇杨叶芽总RNA提取方法比较研究

 采用改良CTAB法、硼砂/CTAB法、酚/SDS法、皂土法和2种总RNA提取试剂盒共6种方法提取滇杨叶芽总RNA,并通过紫外分光光度计测定RNA样品的纯度,琼脂糖凝胶电泳和cDNA AFLP检测总RNA样品的完整性和质量。结果表明,硼砂/CTAB法和皂土法不适合滇杨叶芽总RNA的提取。改良CTAB法、酚/SDS法和2种试剂盒均能得到清晰的28S和18S条带。其中,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA完整性最好,OD260/OD280值在1.8-2.0之间,OD260/OD230值>2.0,经过cDNA-AFLP扩增分析,获得了清晰的条带。结果证明,改良CTAB法提取的滇杨叶芽总RNA能够满足RT-PCR等分子生物学实验。     

适合于高通量测序的槟榔总RNA的提取方法

为了获得能满足高通量测序要求的槟榔叶片总RNA,采用通用植物总RNA提取试剂盒和异硫氰酸胍-苯酚法提取槟榔叶片的总RNA。结果表明:异硫氰酸胍-苯酚法提取的总RNA完整性好、纯度高,通用植物总RNA提取试剂盒不能从槟榔叶片中提取完整的总RNA;70℃,10 min的热处理会导致槟榔总RNA的降解,苯酚/氯仿抽提能得到高纯度、完整性好的总RNA;总RNA质量浓度达到979 mg·L-1,OD260/OD280=1.98,OD260/OD230=2.31,能满足转录组高通量测序的要求。     

热硼酸盐法提取梨雌蕊RNA方法改进及提取效果

提取梨雌蕊的总RNA;方法:修改后的热硼酸盐法。采用电泳检测RNA的完整性、并测定了提取物的浓度和纯度、根据S基因设计引物对提取的总RNA进行3'-RACE实验等方法对提取产物进行检测。结果:修改后的整个提取过程可以在1 d内完成,提取的总RNA电泳条带清晰,总RNA提取液的浓度为1.925μg/L,OD260/OD280值为1.926,3'-RACE实验得到了预期的条带。结论:经过改进后的热硼酸盐法适合提取梨雌蕊的RNA。     

白皮松总RNA三种提取方法的比较研究

[目的]对白皮松（Pinus bungeana）松针总RNA提取方法做比较,以得到完整的、高质量的白皮松总RNA。[方法]采用Trizol法、RNA提取试剂盒法和LiCl沉淀法3种方法提取白皮松总RNA,通过琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测总RNA的完整性和提取纯度。[结果]LiCl沉淀法提取的RNA收率高,完整性好,OD260/OD280均在1.80～2.00,28S、18S条带清晰。[结论]LiCl沉淀法能高效地从白皮松针叶组织中分离出纯度高、完整性好的RNA样品。